液相色谱常见问题及其对策

液相色谱常见问题及其对策液相色谱常见问题类型

A.压力异常（偏高、波动）

B.漏液

C.保留时间漂移

D.基线问题（漂移、噪声）

E.峰形异常

一、压力异常现象：无压力，流动相不流动可能原因1、保险丝断或电源问题2、柱塞杆折断3、泵头内有空气或流动相不足4、单向阀损坏5、漏液6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)

一、压力异常现象：压力持续偏高或不断上升1、流速设定过高2、保护柱或柱子筛板堵塞3、流动相使用不当或有缓冲盐出4、色谱柱选择不当5、进样阀损坏一、压力异常现象：压力持续偏低1、流速设定过低2、色谱柱选择不当3、柱温过高4、系统漏液一、压力异常现象：压力波动可能原因1、泵头中有气泡2、单向阀损坏3、柱塞密封圈损坏4、脱气不充分5、系统漏液6、使用了梯度洗脱二、漏液接头处漏液1、接头处松动2、接头磨损3、接头被污染二、漏液泵漏液1、单向阀松动2、泵密封损坏3、接头松动（不要拧的太紧）二、漏液进样阀漏液可能原因1、转子密封损坏2、定量环堵塞3、进样口密封松动4、进样针尺寸不合适5、废液管产生虹吸6、废液管堵塞二、漏液检测器漏液可能原因1、流通池垫片损坏2、流通池透镜破碎3、手紧接头处漏液4、废液管堵塞5、流通池堵塞三、保留时间漂移保留时间漂移可能原因1、柱温变化2、流动相组分变化3、色谱柱没有平衡4、流速变化5、泵中有气泡6、流动相选择不当7、缓冲容量不够四、基线问题基线漂移可能原因1、温度波动2、流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂)3、流通池被污染或有气泡4、流动相配比不当或流速变化5、柱子平衡（约30－60min）6、流动相污染，变质或由低品质溶剂配成7、样品中有强保留的物质以馒头样峰被洗出8、检测器没有设定在最大吸收波长处四、基线问题基线噪声（规则的）可能原因1、流动相、泵、检测器中有气泡2、有地方漏液3、流动相混和不均匀4、温度影响（检测器和柱温差别太大）5、其他电子设备的影响四、基线问题基线噪声（不规则的）可能原因1、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、有地方漏液3、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀4、检测池能量不足5、系统内有气泡五、峰形异常前沿峰、拖尾峰可能原因1、柱塞板堵塞2、色谱柱塌陷3、干扰峰4、柱温过低5、缓冲不足或不合适6、重金属污染7、样品溶剂选择不当8、样品过载五、峰形异常分叉峰可能原因1、保护柱或分析柱污染2、样品溶剂不溶于流动相五、峰形异常峰展宽1.进样体积过大2.流动相粘度过高3.检测池体积过大4.保留时间过长5.样品过载五、峰形异常鬼峰1、进样阀残余峰2、柱未平衡3、水污染4、柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)液相色谱容易出问题的部件维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器液相色谱容易出问题的部件吸滤头材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断液相色谱容易出问题的部件单向阀故障1：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生压，使宝石球与垫片分开2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗液相色谱容易出问题的部件故障：密封圈磨损而导致密封不良现象：系统压力波动大或漏液措施：更换密封圈注意点：更换密封圈拆卸泵头前，柱塞杆复位液相色谱容易出问题的部件手动进样阀故障：转子密封损坏现象：漏液原因：a拧的太紧b样品太脏c针头损坏或不使用液相专用针解决措施：更换转子密封，并在使用时注意保养液相色谱容易出问题的部件手动进样阀故障：载样困难原因：a定量环堵塞b进样器污染解决措施：清洗或更换定量环、进样器液相色谱容易出问题的部件柱子故障：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留时间的改变解决措施：清洗正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05M稀硫酸液相色谱容易出问题的部件峰产生有肩或分叉的原因1.柱子劣化（进口处产生不均匀的空隙）2.样品劣化（生成氧化物、分解物等）判断标准所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化液相色谱容易出问题的部件延长柱寿命方法：倒冲柱换过滤片修补柱头液相色谱容易出问题的部件分析柱的维护1、在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下(0.2-0.3ml/min)冲洗30mins，长时间未用的分析柱也要同样处理2、定期使用强溶剂冲洗柱子3、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗4、净化样品5、分离条件6、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯7、使用预柱8、避免流动相组成及极性的剧烈变化9、避免压力脉冲的剧烈变化液相色谱容易出问题的部件更换氘灯（紫外检测器）判断氘灯能量：设定220nm波长，检查参比池能量，如能量低于800，需更换氘灯。操作注意点：不要用手直接接触氘灯表面液相色谱注意几个问题一、脱气除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形3）检测器中的气泡产生基线波动液相色谱注意几个问题脱气的目的1.防止由气泡的产生引起的故障2.防止由溶解（在液体中的）气体量的变动引起的检测不稳定程度1）示差折射率检测器*使折射率变化2）UV检测器（200nm以下）*溶解氧气有吸收液相色谱注意几个问题二、缓冲液选择缓冲液