尿沉渣分析仪课件

UF-100尿沉渣分析仪的原理与干化学

法结果的分析及注意事项

二、UF-100原理：应用荧光染色剂将尿沉渣中不同物质的细胞核或细胞膜进行分别染色后，利用最先进的流式细胞仪原理和技术，根据荧光、激光散射强度、散射波幅度及细胞大小的不同和细胞通过时产生的电阻抗分别落在不同的区域，来识别和计数尿内细胞定量数据，并打印出RBC和WBC的直方图。染色性9-氮杂菲（Phenanthridine）染色DNA和RNA发射荧光为:橙色对死细胞胞膜穿透性强羰花青（Carbocyanine）细胞膜、核膜以及线粒体等膜性物质被染色发射荧光为：绿色尿沉渣全自动分析(UF-100尿沉渣分析仪介绍)一、特点：

简化操作流程，提高分析效率，降低劳动强度。结果准确，重复性好，提供定量数据，进行有效筛选，可检测各种有形成份信息，有效协助血尿来源的鉴别诊断。

UF-100为临床检验的常规分析,为体检和疾病的筛选提供了较为全面﹑快速﹑准确而灵活方便的分析手段,检测重复性好,结果可靠,减少人为的误差,报告以每微升含有多少个细胞,通过观察尿中细胞数量可以帮助了解相关疾病(如肾炎﹑膀胱炎﹑肾结石﹑肾结核)等的诊断和鉴别诊断,通过观察这种病人尿中红细胞数量的变化,可了解病人的疗效观察。

由于红细胞在尿液中直径大约8um,没有细胞核及线粒体,所以荧光强度很弱,红细胞在尿液标本中大小不均,部分溶解成小红细胞碎片,或者在肾脏疾病时排除的红细胞也大小不等,因此红细胞前向散射光强度差异较大。一般来看,荧光几乎极低和散射光大小不等都可为红细胞。该仪器除给出尿红细胞数量(每微升的细胞数和每高倍视野的平均细胞数)参数外,还可报告尿中细胞其他参数。如均一性红细胞(IsomorphicRBC)的百分比,非均一性红细胞(Dysmorphic)的百分比,非溶血性红细胞的数(Non–IysedRBC#)和百分比(Non–IysedRBC%)。如尿内红细胞多时,化验单上提示:新版本RBC—InfoMicyocytic

小红细胞

Normocytic

正常红细胞

Non—Classified不典型红细胞1红细胞及其相关参数的临床意义①红细胞数量变化的临床意义:显微镜计数法,正常成人尿中红细胞约为<100万/24小时;UF-100仪器法参考值为男性0~12/ul,女性0~24/ul;离心后为0~偶见/HPF,如每高倍视野均可见1~2个为增多,≥3个/HPF为镜下血尿。通过动态观察病人尿红细胞数量变化,可了解病人治疗的效果。

②利用红细胞形态来鉴别血尿来源：1979年Birch和Fairley首先用相差显微镜观察红细胞形态变化，把血尿分为肾小球源性血尿(简称肾性)和非肾小球源性(简称非肾性)血尿两大类,这种分类方法以后得到了许多学者的赞同。这种分类方法主要是根据红细胞形态的变化,将均一性的红细胞(红细胞形态基本与正常红细胞相似)归为非肾性血尿,非均一性的红细胞(红细胞形态大小不等)归为肾性血尿。但在显微镜检查法是通过人眼观察单个红细胞的形态,需要熟练的技术并受主观因素的影响。Shichiri和丛玉隆等报道用尿液分析仪测量尿红细胞体积来鉴别血尿来源,认为较显微镜法准确,但此法容易将与红细胞体积相等或较小的成份(如细菌和结晶)误认为红细胞。特别是霉菌,因为尿液放置时间较长时,细菌生长快,霉菌个体与小红细胞相似,所以在UF-100尿沉渣仪器中误认是红细胞,计数就多,这方面的文章最近有报导。

干化学法检测尿中红细胞:主要是红细胞或红细胞破碎后HB,HB中的亚铁血红素有类似过氧化物酶活性,催化分解过氧化物释放新生态氧使邻甲苯胺氧化显色,此法可测定完整红细胞,破碎红细胞中的游离血红蛋白及肌红蛋白三部分。其颜色深浅与血红蛋白含量有关。

试带法对血红蛋白检测灵敏度约为0.015~0.03mg/dl,对红细胞检测灵敏度约为5~15个/ul。新鲜未离心尿,计数板法红细胞为10×106/L时,试带法的分析灵敏度为70~80%。与计数板法相比,若尿中红细胞溶解,则试带法红细胞分析特异度降低。白细胞:

观察尿液内白细胞数量可帮助有关疾病(如泌尿系感染.膀胱炎.结核等)的诊断与鉴别诊断,通过动态观察这些病人尿内白细胞数量变化,来确定病人的疗效观察和愈后。白细胞在尿液内分布直径大约10um,稍比红细胞大,前向散射光强度比红细胞稍大一些,但白细胞含有细胞核而红细胞无细胞核,因此它有高强度的前向荧光,就能将白细胞与红细胞区别开来,白细胞出现在散射图的正中央。白细胞也像红细胞那样有很多形状，当白细胞存活时，白细胞会呈现前向散射光强和前向荧光弱；当白细胞受损害或死亡时，会呈现前向散射光弱和前向荧光强。利用白细胞激光散射强度和荧光强度的技术识别白细胞高活性和低活性的不同程度,来进一步对急性感染和慢性感染,以及恢复期作出判断。

泌尿系感染时,在尿液中往往同时存在白细胞和细菌。因此,检查尿液中白细胞和细菌存在,是诊断泌尿系感染的重要指标.另外用白细胞数来判断急、慢性泌尿系感染,结果显示:急性泌尿感染白细胞数>60/uL,而白细胞前向散射光强度强和荧光弱;慢性泌尿系感染白细胞>10/uL,而白细胞前向散射光强度弱和荧光强度强,大多数是受损害和死亡的白细胞。干化学法:

根据嗜中性粒细胞中含有的特异性脂酶,水解试纸条中吡咯氨酸脂为吡咯氨酸,再与重氮物发生重氮反应而显色。干化学法和显微镜检查法也能测定白细胞数,但干化学法粗糙,不能准确反映数量变化,显微镜的报告法(每高倍视野XX∽XX个白细胞)或满视野/HPF,不能将治疗前后白细胞数量变化反应出来,使用UF-100尿沉渣仪能够观察到这种数量微弱变化,指导临床进一步的用药治疗。在化验单上有时出现干化学法白细胞数少,而尿沉渣白细胞计数多,这是因为干化学法测定的白细胞特异性脂酶,由于白细胞吞噬细菌时,白细胞核内含有溶菌酶,溶菌酶杀灭细菌时,大部分白细胞变成了脓球,所以干化学法测定数少,而尿沉渣计数多,白细胞虽然变成脓球,但白细胞的形状还存在,计数时仍然计数,如果是过敏性或变态反应性引起的肾炎,尿沉渣中的细胞,多是淋巴细胞或嗜酸性粒细胞。干化学法:10~20个/uL少、50~75个/uL+、100~150个/uL++、150~250个/uL+++、500个/uL++++、

尿沉渣报告方式对照表

报告结果阴性偶见1＋2＋3＋4＋

RBC/HPF00~23~1011~30>30满视野

WBC/HPF00~34~1011~30>30满视野上皮细胞/HPF0男0~34~1011~30>30满视野女0~56~10

管型/LPF00~11~56~1011~30>30

正常参考值红细胞0~3/HPF,白细胞0~5/HPF,尿结晶和盐类数量,以每高倍视野+2+3+4+报告。管型(透明管型)低倍视野0~1/全片。现代临床检验学2000年出版.上皮细胞:

上皮细胞由泌尿道上皮脱落而来,种类较多,大小不等。因为上皮细胞体积大,散射光程度强,都含有细胞核,线粒体等,荧光程度也比较强。仪器除了给出上皮细胞数量参数外,还标出小圆上皮细胞(SRC),并在第二个屏幕上显示每微升小圆细胞数。正常尿液中可见少量上皮细胞,主要是鳞状上皮细胞和移行上皮细胞,如果数量增多,可见小圆上皮细胞,可认为泌尿道炎症的表现。小圆上皮细胞:

来自肾小管上皮或移行上皮的底层,通常不见于尿中。其中细胞呈多边形,核较大,核大者来自肾小管,称肾小管上皮细胞或肾细胞;依形态又称多边形细胞。此细胞与白细胞相似,但较白细胞略大(大1/3左右),(直径一般不超过15um),含一大而明显的核,浆中常见脂肪滴和小空泡,此细胞出现或增多,表示肾小管有病变,多见于急性肾小球肾炎,如成堆出现,常表示肾小管有坏死性病变。

572例健康人群尿样RBC、WBC、EC、CAST参考范围(个/um95%可信界线)

RBCWBCECCAST

NXS95%XS95%XS95%XS95%

男3616.073.860~116.474.610~125.173.720~70.390.270~1

女2118.946.120~199.326.990~218.337.540~200.410.250~1

标本对结果的影响尿液标本必须新鲜,留尿后尽量立既测定,以免红细胞,白细胞破坏,导致干化学与镜检法人为实验误差。干化学法即能测定完整的细胞成份,又能测定因细胞破坏胞浆内涵物来辨别细胞的有无(通过特异或非特异性酯酶检测白细胞,通过血红蛋白的过氧化物酶反应检测红细胞),因此报告时要了解临床诊断,综合分析,排除相互结果的干扰。某些肾病患者的终尿,由于各种原因使细胞裂解,可导致仪器法与目测法的差异。⒈对干扰物对红.白细胞测定的影响白细胞试验的干扰干化学法检测尿内白细胞的原理,位于粒细胞浆内含有酯酶,可作为试剂带膜块中的吲哚酚酯。操作时应注意:⑴应了解此法只能测定粒细胞,不与淋巴细胞反应,在肾移植病人发生排异反应尿中以淋巴细胞为主时,会出现阴性结果,此类病人不应用干化学法检查,应该以显微镜检查法为准。⑵尿液中污染甲醛,或高浓度胆红素,或使用某些药物(如呋喃旦啶)时,可产生假阳性;尿蛋白≥5g/L,或尿液中含有大剂量先锋Ⅳ、庆大霉素等药物时,可使结果偏低或出现假阴性。2.对红细胞试验的干扰尿液中含有对热不稳定酶、肌红蛋白或菌尿,可引起干化学法测定尿红细胞呈假阳性;易使检测红细胞出现假阳性的原因主要是热不稳定过氧化物酶的干扰。尿液大量维生素C的存在,可竞争性抑制反应致使干化学法产生假阴性,应注意细胞破坏造成的“假阴性”现象。所述“假阳性”、“假阴性”现象,是以显微镜检查为基础的。由于干化学法是检测细胞胞浆内涵物来辨别细胞的有无(通过特异或非特异性酯酶检测白细胞,通过血红蛋白的过氧化物酶反应检测红细胞),在实际工作中可能存在下列问题:①由于尿液在膀胱贮存时间过长或标本放置时间延长,导致白细胞破坏,酯酶释放到尿液中,造成干化学法阳性、镜检阴性的所为“假阳性”现象。②肾病患者的红细胞在肾脏或泌尿道破坏,或尿比重过低、尿PH偏高,均易造成红细胞破坏,血红蛋白放出并出现在尿中,造成所谓红细胞干化学检查的“假阳性”现象。因此在干化学法结果与显微镜下所见出现矛盾时,要结合临床综合分析,甚至要动态观察,切不一概否定干化学法结果。镜检法与干化学法的相应关系有作者报道干化学与镜检两种方法检查尿红细胞实验结果的对应关系,发现这两种方法虽然结果没有明显的对应关系,但每一等级尿分析仪结果对应镜检红细胞计数有较好的百分比范围,特别是干化学“neg”档,<3/HP占100%,红细胞<10/ul,镜检正常占99.82%。鉴于此种现象,认为在排除上述病理或其他干扰因素存在下,仪器结果为“红细胞≤10ul”时,可以省略显微镜检查,而其他档次(25/ul、50/ul、150/ul、250/ul、)均有较大的交叉,必须镜检。原理不同,报告方式是两种不同的概念,很难找出两者的对应关系,迄今还没有一种直接的换算方式,有文章报道计算板计数与仪器结果的内在关系,Alwall报道每高倍视野白细胞数大约是仪器法报告(WBC/ul)数的11%;Loosyt等指出,白细胞/ul是白细胞/高倍视野的10.8倍,丛玉隆的实验结果是8.7倍。因此仪器法白细胞检测只是一个筛选实验,决不可代替显微镜检查。干化学结果异常,镜检结果正常,视为假阳性;反之干化学结果正常,镜检结果异常,视为假阴性.由于过筛的目的是筛出正常,镜检病理性标本,因为过筛的原则是不能出现假阴性,否则就要漏诊。干化学结果假阳性的标本经过镜检后即可得到纠正。虽然假阳性不如假阴性那么重要,但假阳性结果过多,达不到过筛的目的。尿沉渣检查标准化

塑料离心管离心后需要摇匀的尿液量离心条件的标准化(时间和速度)用标准刻度离心管倒入混匀后的尿液10毫升,用回转半径15CM的标准离心机,速度1500r/min,离心5min.

尿沉渣量及倾弃方式要一致,尿沉渣的残留量应为0.2毫升,轻轻摇动离心管,使尿沉渣有形成分混匀.采混合后尿沉渣1滴置于载玻片上，用盖玻片覆盖尿沉渣后镜检。

因此，在世界上许多国家开始采用尿沉渣定量分析板来定量分析尿沉渣。以××/μl

的形式来报告实验结果，国内某些大医院开始使用引有意大利生产的尿沉渣定量分析板（FAST-READ10）。该系统结构为每块分析板有10个统一厚度(0.1mm)的计算池,每一个计算池内有固定体积为1μl

的计算区(计算区划分为10个大方格,每个大方格分9个小方格).该系统的操作完全同玻片法,不同的是该法是定量计数每μl

的红细胞﹑白细胞、上皮细胞和管型的数量。

使用固定的检验尿沉渣量和使用标准的玻片及覆盖玻片.

计算和报告尿沉渣中各种有形成分,XX/HPF或XX/ml.举例:

高倍镜视野的直径=0.35mm,

高倍镜视野的面积=0.096mm²

盖玻片的面积(22mmX22mm)=484mm²

换算系数

HPF体积=0.18μl

1/HPF=1(0.18μl)=(1/0.18)/μl=5.56/μl

LPF体积=2.9μl

1/LPF=1/(2.9μl)=(1/2.9)/μl=0.34/μl

收集标本注意事项:⑴我们工作人员应指导病人正确留取尿标本的方法。⑵:容器应清洁干燥。⑶:女性病人应避免在月经期留取尿标本,防止混入阴道分泌物,男性病人则要避免前列腺液或精液混入,女性病人必要时冲洗外阴后留取中段尿或导尿。⑷:新生儿及婴儿在收取尿标本时,应注意用0.1%新洁尔灭消毒尿导尿道口及会阴部然后将清洁的标本杯紧贴尿道口收取标本,或采取特残留尿方式。⑸:标本留取后应立即送检,不能立即送检的标本应妥善保存,在2小时内送化验室检测。⑹:应根据不同实验室要求留取不同种类的尿液标本及不同取样方式。每次收集尿标本量不少于20-50ml,以备标本的复查检测。

标本保存尿标本留取后到检验应在2小时内完成,最迟不宜超过2小时。否则,可引起如下的变化:1.尿液排出放置一定时间后,可导致细胞和管型发生变形.变质;2.细菌在尿中生长繁殖,分解尿素产生氨,使尿液PH上升,在碱性环境中有形成份更易分解破坏。

3.细菌和真菌分解葡萄糖,使病理性糖尿减弱或消失;4.菌体干扰病理性蛋白尿的检验;5.尿中某些化学成份(如尿胆原)因尿久置而变性,分解;6.尿中盐类成份因尿久置而析出结晶,干扰镜检。如尿标本不能及时检验,可按下述方法进行保存。

(1)冰箱冷藏此为较好的保存尿液方法,能抑制微生物生长,维持尿液PH恒定,可保持尿中有形成份的形态基本不变(但碱性尿中的有形成份仍可发生变化).冷藏时间不宜超过8小时,冷藏与防腐剂联用,效果更好。有时,冷藏可使尿液析出尿酸盐,磷酸盐的沉淀。(2)加入防腐剂①甲苯:于尿液中加入适量(1-2ml/100ml尿)甲苯,使其呈薄膜状覆盖于尿液表面,