胶体金技术简介课件

胶体金技术简介周军BioDot中国1精选可编辑ppt胶体金技术的起源1971年,Faulk和Taytor在做免疫金电镜实验时引入胶体金：是一种分散相颗粒在1～100nm之间的分散体系，外观透明不浑浊，在普通显微镜下看不见；颜色为红色,指示剂胶体金复合物（conjugate）:与抗体连接2精选可编辑ppt胶体金技术的发展80年代：第一代产品，免疫渗滤法(FlowThrough)90年代：第二代产品，免疫层析法（LateralFlow）,女性妊娠

HCG21世纪：快速诊断方法适应市场需要，胶体金技术进入快速发展期，成为IVD的热点（传染病、毒品、食品安全、畜牧兽医等领域）

3精选可编辑ppt两种技术的比较4精选可编辑ppt免疫层析法技术优势:简单/现场/快速1.打开包装取出试纸条2.直接插入待测样品中3.目测读出结果（3-10分钟内）5精选可编辑ppt免疫层析法与常规诊断方法比较优点缺点快速：全部检测过程仅需3-10分钟简便：不需其它任何仪器设备，操作简单，无需专业人员，携带方便，可随时随地进行。适合基层单位粗筛使用廉价：单个测试条成本极低

可单人份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立刻拿到结果，不必等待稳定性好：金标试剂稳定，可长期室温保存

检测标本种类多：既可用于测血清/血浆/全血，又可用于测尿或唾液,或处理后的组织等固体样品定量问题灵敏度问题（ng级）固体样品处理6精选可编辑ppt免疫层析法应用领域类别应用领域检测的物质人类医学各级医院,血站,CDC,防疫站,诊断中心；家庭自检；商检系统；边检口岸；公安系统.女性妊娠（hCG,LH等)传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等）肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等）心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）农牧业畜牧兽医站,商检系统,边检口岸,农牧类院系和研究所传染病（禽流感、兽瘟疫等）病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）环境环保监测部门,研究机构有害物质超标食品安全食品安全检测中心,各监管部门农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）、大肠杆菌、黄曲霉素7精选可编辑ppt免疫层析法试纸条结构测试线（T线）质控线（C线）胶体金垫吸水滤纸样品垫NC膜（硝酸纤维素膜）层析方向PVC底板8精选可编辑ppt免疫层析法原理视频9精选可编辑ppt免疫层析法检测原理分类介绍

（双抗体夹心法）（以大分子HCG检测为例）10精选可编辑ppt免疫层析法检测原理分类介绍

（竞争法）（以小分子吗啡检测为例）11精选可编辑ppt

免疫层析法检测原理分类介绍

（间接法，标记proteinA）

（以HIV抗体检测为例）12精选可编辑ppt免疫层析法检测原理分类介绍

（双抗原夹心法，标记抗原）同上，测抗体13精选可编辑ppt技术流程AssembledCardsTeststripscutFINALPRODUCTProcessesReagentsMaterialsDesiccantAdhesiveCardsTopLaminateAbsorbentPadMembraneConjugatePadSamplePadPouchHousingPackagingCaptureReagentsDetectorReagentSalts+14精选可编辑ppt平台准备与技术分项材料准备:样品垫、胶体金垫、NC膜、吸水纸试剂准备:免疫试剂如抗原抗体等生物活性原料；生化试剂如氯金酸、柠檬酸三纳、氯化纳、Tween20、BSA等仪器准备：常规仪器pH计、加热平台、冷冻离心机等；专用仪器喷膜仪、切条机等胶体金标记技术NC膜与溶液喷点胶体金垫与溶液喷点干燥方法15精选可编辑ppt抗体Antibody来源差异:鼠抗,兔抗和羊抗种类差异:单抗,多抗腹水的处理:饱和硫酸铵沉淀法特异性:亲和层析柱溶解液:不含盐,例如PB抗原抗体生物原料

优质的原料是优质产品的保证抗原Antigen天然抗原,重组抗原,合成抗原偶联抗原物质:BSA,OVA等16精选可编辑ppt胶体金标记技术容器清洁或硅化处理胶体金颗粒制备(负电)颜色与颗粒的关系.最佳标记颗粒大小40nm.蛋白质最适用量测定:盐析法17精选可编辑pptNC膜与溶液喷点-NC膜NC膜的性能NC膜的选择爬速对灵敏度的影响底衬的作用不同膜厂家的产品差异(Pall/Whatman/Millipore/Sartorius)18精选可编辑pptNC膜与溶液喷点---溶液喷点

C\T线溶液前处理:1.过滤,0.2um孔径滤膜2.离心1万转10分钟喷点过程头尾去除,喷点中的报废标志C\T线喷点工艺(BJQ3000喷头)与接触划线(FL1000喷头)工艺比较19精选可编辑ppt胶体金垫与溶液喷点胶体金垫1.材料选择2.糖的作用3.缓冲溶液的作用喷点法与浸泡法的比较(AJQ3000喷头)1.释放快慢2.液体量不同，干燥快慢，边缘效应3.生产方便性20精选可编辑ppt样品垫

材料选择各成分的作用1.缓冲溶液的作用(PH)2.盐的作用3.大分子蛋白BSA\PVP4.表面活性剂Tween-20,TritonX-10021精选可编辑ppt吸水纸吸水效率进口与国产纸的差异22精选可编辑ppt粘性底板原理作用供应商的选择对NC膜的影响23精选可编辑ppt干燥方法干燥方法的比较1.冷冻干燥法2.烘箱3.烘房温湿度的控制1.温度对蛋白的影响2.湿度的控制办法24精选可编辑ppt溶液体系分析各环节缓冲溶液的选择与统一盐的作用表面活性剂的作用糖的作用大分子蛋白的作用其他作用物质25精选可编辑ppt注意事项试剂原料耗材的批号控制，确保来源可靠有保障设置关键控制点，确保流程无差错仪器定期维护校准研发时即考虑一定生产量的工艺问题，避免上量后不匹配均一性，稳定性26精选可编辑ppt胶体金技术在中国的发展---回顾1995年：国内基本空白，没有研发，1-2家生产单位仅是大包装分切1997年：杭州艾康起步，依靠美国技术转让快速发展为国内第一品牌，2007年因专利纠纷被Inverness收购1998年：美国BioDot公司第一台RR3000仪器进入中国，国内单位开始少量研发与生产1999年：基因公司代理BioDot，开始大力推广胶体金技术2000年：“第一届胶体金技术培训班”在北京生物制品研究所成功举办2008年：BioDot中国办事处成立，全权负责中国区市场/销售/售后2010年：星星之火已经燎原---国内已有约150多家单位从事胶体金技术的研发与生产，HCG产品全球市场的70-80%在中国生产27精选可编辑pptRR3000---中国第一台BioDot仪器(1998年)28精选可编辑ppt胶体金技术在中国的发展---机遇中国具有行业优势：前端大量的生物学人才+科研，后端廉价的劳动力+生产OTC、家庭自检市场保持稳定需求食品安全、畜牧兽医、生物反恐、流行性传染病等领域需要现场快速检测，会有较快增长临床医疗市场将向全自动仪器与简约化快速化检测这两级发展，基层社区服务中心、中西部地区对快速检测产品会有一定的需求29精选可编辑ppt胶体金技术在中国的发展---挑战关键材料NC膜均为进口优质的上游原料（抗原抗体）依赖进口，仅少部分实现国产化，但质量不稳定稳定的生产仪器及关键配件，大部分进口专利：基本被国外公司垄断30精选可编辑ppt胶体金技术发展展望(一)标记物的发展:乳胶微粒、荧光微粒(Merck)、顺磁微粒、量子点31精选可编辑ppt胶体金技术发展展望(二)检测仪的发展：胶体金定量仪（ESE）、荧光定量仪(ESE，Biosite)；磁微粒检测仪（MagnaBiosciences）32精选可编辑ppt胶体金技术发展展望(三)新材料的使用：WhatmanFusion5材料不吸附或极低吸附蛋白材料“四和一”，节约了60%的组装劳动力检测线和质控线上的包被试剂，需先与乳胶微粒共价，或pH<4时直接包被