化学药品质量研究及制订

新药的药学评价

—化学药品质量研究及质量标准制订第二军医大学药学院范国荣

2014-07-072006年“齐二药”事件：急性肾衰亮菌甲素注射液

辅料“丙二醇”实际为“二甘醇”

药品安全事件药物不良反应药害事件2006年安徽华源“欣弗”事件：急性肝坏死克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液(批号06060801、06062301、06062601、06062602和06041302)违规生产2006年6月1日，国家食品药品监督管理局做出决定，暂停使用、暂停受理和审批鱼腥草注射液等7个注射剂。根据国家药品不良反应监测中心的监测，鱼腥草注射液等7个注射剂在临床应用中出现了过敏性休克、全身过敏反应、胸闷、心急、呼吸困难和重症药疹等严重不良反应，甚至有引起死亡病例报告。2007年7月6日和7月30日，国家药监局叫停四个批次的甲氨蝶呤（批号为070403A、070403B、070405b和070502b，规格5mg)。广西、上海部分医院的白血病患儿出现下肢疼痛、乏力、行走困难等不良反应症状。最终真相被查明：现场操作人员将硫酸长春新碱尾液混于注射用甲氨蝶呤、盐酸阿糖胞苷等批号药品中，导致多个批次的药品被硫酸长春新碱污染，造成“重大的药品生产质量责任事故”。而相关人员隐瞒了违规生产的事实。2008年10月14日，卫生部、国家食品药品监督管理局联合通报，中国药品生物制品检定所检验初步结果显示，黑龙江省完达山制药厂生产的刺五加注射液部分批号的部分样品有被细菌污染的问题。完达山药业生产的刺五加注射液部分药品在流通环节被雨水浸泡，受到细菌污染，后又被更换包装标签并销售，致使3名使用该药品的患者死亡。2009年1月6日辽宁大连金港安迪生物制品有限公司生产的11批冻干人用狂犬病疫苗被检查出含有违法添加的核酸物质，该行为涉嫌故意造假。2011年6月18日国家食品药品监督管理局发出对阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂的通知：经中国食品药品鉴定研究院检验，在葛兰素史克公司生产的阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂中检出邻苯二甲酸二异癸酯（DIDP）。国家食品药品监督管理局决定立即停止葛兰素史克公司生产的阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂产品的销售和使用，已进口上市的由企业召回。

2012年4月21日，卫生部要求毒胶囊企业所有胶囊药停用，药用胶囊接受审批检验。河北一些企业，用生石灰处理皮革废料，熬制成工业明胶，卖给一些企业制成药用胶囊，最终流入药品企业。由于皮革在工业加工时，要使用含铬的鞣制剂，因此这样制成的胶囊，往往重金属铬超标。修正药业等9家药厂13个批次药品，所用胶囊重金属铬含量超标。

治病的药品变成了“毒药”？来自“药害”的反思:

发现问题仅仅“冰山一角”！

问题出在哪儿？？？

怎么办???

舆论监督意识氛围政府监管制度人员

技术监验法律规范新药的药学评价……

相关技术指导原则(ICH)InternationalConferenceonHarmonisationofTechnicalRequirementsforRegistrationofPharmaceuticalsforHumanuse人用药品注册技术要求国际协调会（欧盟、美国、日本三方）InternationalConferenceonHarmonisation-Quality质量方面的技术文件，共23个，以Q表示国际法规Q1A(R2)StabilityTestingofNewDrugSubstancesandProducts

新原料药及制剂稳定性Q1BPhotostabilityTestingofNewDrugSubstancesandProducts

新原料药及制剂光稳定性Q1CStabilityTestingForNewDosageForms:annextotheICHHarmonisedTripartiteGuidelineonStabilityTestingforNewDrugsandProducts

新剂型的稳定性试验分析方法验证Q1DBracketingandMatrixingDesignsforStabilityTestingofNewDrugSubstancesandProducts

新原料药和制剂稳定性试验的括号设计法和矩阵设计法Q1EEvaluationforStabilityData

稳定性数据评价Q1FStabilityDataPackageforRegistrationApplicationsinClimaticZonesIIIandIV

气候带III和IV注册用稳定性研究Q2ATextonValidationofAnalyticalProcedures

分析方法验证的文本Q2BValidationofAnalyticalProcedures:Methodology

分析方法的论证：方法学Q3A(R)ImpuritiesinNewDrugSubstances

新原料药杂质要求Q3B(R)ImpuritiesinNewDrugProducts(Revision2)

新制剂的杂质要求Q3CImpurities:GuidelineforResidualSolvents

溶剂残留量的指导原则Q4Evaluationandmendationof

PharmacopoeialTextsforUseintheICHRegions

药典相关内容Q5AViralSafetyEvaluationOfBiotechnologyProductsDerivedFromCellLinesOfHumanOrAnimalOrigin

病毒安全性评价Q5BAnalysisoftheExpressionConstructinCellsusedforProductionofr-DNADerivedProteinProducts

遗传稳定性评价Q5C

QualityofBiotechnologicalProducts:StabilityTestingofBiotechnological/BiologicalProducts

生物制品的稳定性试验Q5DDerivationandCharacterisationofCellSubstratesUsedforProductionofBiotechnological/BiologicalProducts

细胞基质的质量要求Q5EComparabilityofBiotechnological/BiologicalProductsSubjecttoChangesinTheirManufacturingProcess

生物技术/生物制品在生产工艺变更前后的可比性Q6ASpecifications:TestProceduresandAcceptanceCriteria

forNewDrugSubstancesandNewDrugProducts:

ChemicalSubstances

化学产品标准规格Q6BSpecifications:TestProceduresandAcceptanceCriteriaforBiotechnological/BiologicalProducts

生物药品标准规格Q7

GoodManufacturingPracticeGuidefor

ActivePharmaceuticalIngredients

药物活性成分的GMP指南Q8PharmaceuticalDevelopment

药品研发Q9QualityRiskManagement

质量风险管理Q10PharmaceuticalQualitySystem

药品质量体系《药品注册管理办法》附件2要求申报资料项目第一部分综合资料第二部分药学资料第三部分药理毒理资料第四部分临床资料国内法规第一部分综合资料1.药品名称。2.证明性文件。3.立题目的与依据。4.对主要研究结果的总结及评价。5.药品说明书、起草说明及相关参考文献。6.包装、标签设计样稿。

第二部分药学资料8.原料药生产工艺的研究资料及文献资料；制剂处方及工艺的研究资料及文献资料9.确证化学结构或组分的试验资料及文献资料10.质量研究工作的试验资料及文献资料，包括性状、鉴别、检查和含量测定等。11.质量标准草案及起草说明，并提供标准品或对照品。12.临床研究用的样品及其检验报告书（申请临床时报送）或生产的样品3批及其检验报告书（申请生产时报送）14.稳定性研究的试验资料及文献资料13.原料药、辅料的来源及质量标准、检验报告书15.直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及质量标准第三部分药理毒理资料16.药理毒理研究资料综述。

17.主要药效学试验资料及文献资料。

18.一般药理学的试验资料及文献资料。

19.急性毒性试验资料及文献资料。

20.长期毒性试验资料及文献资料。

21.过敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮肤、粘膜、肌肉等）刺激性等特殊安全性试验资料和文献资料。

22.复方制剂中多种成份药效、毒性、药代动力学相互影响的试验资料及文献资料。

23.致突变试验资料及文献资料。

24.生殖毒性试验资料及文献资料。

25.致癌试验资料及文献资料。

26.依赖性试验资料及文献资料。

27.非临床药代动力学试验资料及文献资料。第四部分临床资料28.国内外相关的临床试验资料综述。

29.临床试验计划及研究方案。

30.临床研究者手册。

31.知情同意书样稿、伦理委员会批准件。

32.临床试验报告。新药申报—化学药品CTD格式国家食品药品监督管理局于2010年9月25日发布的“关于按CTD格式撰写化学药品注册申报资料有关事项的通知（国食药监注[2010]387号）”

3、4、5和6类药的生产注册申请的药学部分申报资料，可参照印发的CTD格式整理提交化学药品CTD(TheCommonTechnicalDocument)格式申报资料申报两种申报资料格式对于质量标准的要求没有区别，只是格式上的不同国内法规化学药品CTD格式申报资料撰写要求国食药监注[2010]387号：

《药品注册管理办法》附件2化学药品注册分类3、4、5和6的生产注册申请的药学部分申报资料，可参照印发的CTD格式整理提交，同时提交电子版。按《药品注册管理办法》附件2申报资料要求提交的生产注册申请申报资料仍予接收技术审评部门将对提交CTD格式申报资料的注册申请单独按序进行审评技术要求、申报资料格式逐步与国际接轨对药品研发、注册申报的指导更为具体进一步提高申报资料的规范性，促进我国药物研发水平的提升，并有利于我国药品进入国际市场进一步加强审评的全面性、系统性和科学性最为重要的是，固化全面质量控制的理念新药申报—化学药品CTD格式化学药品CTD格式申报资料撰写要求(原料药）我国颁布的CTDICHCTD3.2.S.1基本信息3.2.S.2生产信息3.2.S.3特性鉴定3.2.S.4原料药的质量控制3.2.S.5对照品3.2.S.6包装材料和容器3.2.S.7稳定性3.2.S.1GeneralInformation3.2.S.2Manufacture3.2.S.3Characterisation3.2.S.4ControlofDrugSubstance3.2.S.5ReferenceStandardsorMaterials3.2.S.6ContainerClosureSystem3.2.S.7StabilityCTD的思路：先结果后逐层论证结果，质量控制的思路贯穿全过程

相关技术指导原则(SFDA)化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则化学药物杂质研究技术指导原则化学药物有机溶剂残留量研究技术指导原则化学药物稳定性研究技术指导原则

……国内法规

主要内容化学药物质量标准建立的规范化过程化学药物质量控制分析方法验证质量研究及标准制订中的几个技术问题一、化学药物质量标准建立的规范化过程创新药物质量研究基本步骤质量标准建立的基本过程创新药物质量研究基本步骤文献调研掌握待研药物结构特点、理化常数，寻找类似结构药物在国内外药典收载情况和文献中分析方法通过合成工艺过程获得目标化合物以及各有关物质（原料、中间体、降解产物、催化剂、副产物等）的信息设计理化常数、鉴别、检查和含量测定的方法对各分析方法进行验证质量标准建立的基本过程

确定质量研究的内容进行方法学研究确定质量标准的项目及限度制订及修订质量标准确定质量研究的内容研究产品的特性原料药考虑结构特征、理化性质等制剂考虑不同剂型、临床用法以及辅料的影响制备工艺对产品质量的影响原料药中要考虑的是起始原料和试剂、中间体、副产物以及有机溶剂制剂考虑辅料、不同的工艺和降解产物药品的稳定性考虑储藏过程中药品安全性药物质量研究的一般内容

性状鉴别检查含量测定

性状外观、色泽、臭、味、结晶性等溶解度一般考察药物在水（酸、碱）和常用溶剂（与药物溶解性相关的、配制溶剂、制备溶液或精制操作的溶剂）熔点或熔距比旋度吸收系数吸收系数应至少用五台不同型号的仪器，对结果统计处理。性状相对密度凝点馏程折光率黏度碘值、酸值、皂化值、羟值等鉴别用可靠的理化方法来证明已知药物的真伪，而不是对未知药物进行定性分析。可选用的方法

．化学法

．理化常数测定法

．仪器分析法鉴别化学反应法功能团专属的化学反应。包括显色反应、沉淀反应、盐类的离子反应等。色谱法主要包括GC、HPLC、TLC。采用GC、HPLC法的保留时间和TLC法的RF及颜色鉴别。光谱法一般有IR和UV

鉴别鉴别法选择的基本原则

方法具专属性、灵敏性，便于推广

化学法与仪器法相结合。每种药品一般选用2～4种方法进行鉴别试验

尽可能采用药典中收载的方法对于药物制剂的鉴别，通常是把主药提取出来后进行鉴别检查一般杂质氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐、炽灼残渣等有关物质起始原料、中间体、聚合物、副反应产物、降解产物。有机溶剂残留生产过程中所有涉及的有机溶剂一般都需要检测检查晶型粒度用于制备固体制剂或混悬的难溶性原料药，需要检查粒度分布，并规定其限度。溶液的澄清度与颜色、溶液的酸碱度对于制备注射剂用的原料药，需要检查溶液的澄清度与颜色、溶液的酸碱度。干燥失重和水分一般同时进行干燥失重和水分测定，并将两者的测定结果比较。检查异构体异构体包括顺反异构体和光学异构体其他抗生素或注射用原料药，需检查异常毒性、细菌内毒素或热原等含量常用的法定方法容量分析法重量分析法分光光度法色谱法其他

方法学研究包括方法的选择和方法的验证一般原则常规项目试验的方法针对所研究药品的试验方法方法的选择

方法选择的依据一般有文献的依据、理论的依据和试验的依据。常规项目根据药典规定：

鉴别项目重点考察方法的专属性

检查项考察专属性、灵敏度和准确性

有关物质检查和含量测定要采用两种或两种以上的方法进行对比研究，比较方法的优劣，择优选择方法学验证专属性(Specificity)准确度(Accuracy)精密度、重复性、中间精密度、(Precision,repeatabilityandintermediateprecision)检测限(Detectionlimit)定量限(Quantitationlimit)线性(Linearity)范围(Range)耐用性(Robustness)系统适用性试验(Systemsuitabilitytest)专属性对于可以得到的杂质加入纯物质（原料或制剂）中，证明其可以和主成分分离；如果进行杂质检查，需要证明各杂质也可以得到有效分离无法得到的杂质比较两种方法的测定结果进行必要的强力破坏试验，酸碱氧化等，看是否色谱分离完全峰纯度检查准确性

含量测定——原料药用该分析方法去测定已知纯度的被分析物（参比物质）与另一种成熟的分析方法结果相比较在精密度、线性和专属性建立后，推论而得含量测定——制剂用该分析方法测定按处方量制成的混合物（已加入原料药）加样回收率准确性杂质定量已知杂质采用加样回收率方式未知杂质测定可以比较所建立的方法与其他已知方法测定的结果明确如何测定单个或总杂质量，如采用重量百分比或者面积百分比精密度重复性：线性范围内测定9次/用100%试验浓度测定6次中间精密度：应根据分析方法预期使用的环境而定，申请者应确定随机事件对分析方法精密度的影响，包括：日期、分析者、仪器等。没有必要逐个考察每个因素。重现性：通过试验室之间的试验来评价，需要收载到药典中需要考察检测限度直观评价—准确测得被分析物最小量根据信噪比—适用于出现基线噪音的分析方法3:1根据响应值的标准差和斜率检测限度（DL）=3.3σ/S

σ：响应值的标准差，几份空白样品的分析，计算背景响应值的大小的标准差

S：校正曲线的斜率直观评价或信噪比法需要提供相关色谱图定量限度直观评价—准确测得被分析物最小量，准确度和精密度符合要求根据信噪比—适用于出现基线噪音的分析方法10:1根据响应值的标准差和斜率检测限度（DL）=10σ/S

σ：响应值的标准差，几份空白样品的分析，计算背景响应值的大小的标准差

S：校正曲线的斜率准确度和精密度一定是符合要求的线性与范围最小规定范围原料药或成品的含量测定：80%~120%含量均匀度检查：70%~130%溶出度试验：应为规定范围的±20%杂质检查：应为杂质的报告水平至规定限度的120%如果一个试验同时进行含量测定和纯度检查，且仅使用100%的标准品，线性范围应覆盖杂质的报告水平至规范中规定的120%耐用性对于敏感的分析条件，在方法中需要预先注明考察的典型对象—分析用溶液稳定性，提取时间……HPLC:流动相pH，组成的变化；不同柱子（批号/品牌）；温度，流速……GC:不同柱子（批号/品牌）；温度，流速……分析方法类型鉴别杂质检查含量分析项目定量限度检查含量、溶出度、释放度等准确度－＋－＋精密度重复性－＋－＋中间精密度－

＋a－

＋a专属性b＋＋＋＋检测限度－

－c＋－定量限度－＋－－线性－＋－＋范围－＋－＋-表示通常不需确证的项目

+表示通常需确证的项目

a假如已论证重现性,可不需再论证中间精密度

b缺乏专属性的分析方法,应由其他分析方法作补充

c有些情况下需要分析方法学验证含量1．原料药

容量、重量、紫外、凯氏定氮等，少用色谱法。2．制剂

色谱（HPLC>GC、TLC）、UV，少用容量法。3．酶类、抗生素类等4．计算分光光度法质量标准项目及限度的确定在充分的质量研究基础上确定质量标准项目的设置既要有通用性，又要有针对性质量标准中限度的确定通常基于：安全性、有效性的考虑规模生产及贮藏的实际情况参考国外标准药品质量标准制定的原则（一）安全有效性安全性主要表现为药品的毒副作用小；有效性主要指药物的疗效确定（二）先进性（三）针对性充分考虑药品剂型、生产工艺、流通、使用各个环节的实际因素（四）规范性“安全有效、技术先进、经济合理、不断完善”

制订和修订质量标准质量标准的格式和用语质量标准的起草说明质量标准的阶段性及修订的必要性药品质量标准的内容名称性状鉴别检查含量测定贮藏三、质量研究及标准制订中的几个技术问题质量研究用样品及对照品关于晶型问题手性药物的质量研究有关物质的检查残留溶剂的检查溶出度研究的主要内容和要注意的问题质量研究用样品及对照品质量研究用样品采用小试样品进行结构确证研究、各鉴别检查项，主要是有关物质检查的方法摸索工作，以及稳定性预实验工作采用中试样品（连续三批）进行质量标准研究和稳定性研究采用对照品进行含量测定工作质量研究用样品及对照品质量研究用对照品所用对照品中检所已经发放提供，且使用方法相同时，应使用中检所提供的现行批号对照品新的对照品应进行相应的研究工作，并制订质量标准，说明其来源、理化常数、纯度、含量及其测定方法和数据自制对照品的相关信息主成分对照品通用名、结构式、分子式、分子量化学名、含量、来源、用途、贮藏制备方法定量：各种杂质含量（水分、残留溶剂、无机盐）、主成分含量测定（各种技术）杂质对照品名称、结构式、分子式、分子量化学名、含量、来源、用途、贮藏定性：UV、IR、NMR、MS、X-射线衍射定量：各种杂质含量、主成分含量测定（各种技术）混合对照品（系统适用性试验用）各组分名称、分子式、分子量来源、用途、贮藏定性具体方法与限度要求自制对照品的相关信息PEP-多肽原料药是一种人工合成制备的含5个氨基酸的多肽，根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪⅩA《药品质量标准分析方法验证》、《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》、《化学药物杂质研究技术指导原则》、《化学药物残留溶剂研究技术指导原则

》、《化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则》、《合成多肽药物药学研究技术指导原则》和《化学药品技术标准》的技术要求，对PEP-多肽原料药的质量进行了研究，建立了质量标准草案，同时根据草案上的分析方法对PEP-多肽原料药工作对照品进行了标化。PEP-多肽原料药工作对照品的标化示例一、样品信息化学名称：(甲硫氨酰-谷氨酰胺酰-半胱酰胺酰-天冬酰胺酰-丝氨酸)三氟醋酸盐氨基酸序列：H-Met-Gln-Cys-Asn-Ser-OH化学结构式分子式：C20H35N7O9S2•xC2HF3O2分子量：581.66•x114.02样品来源：Sino-SN生物制药有限公司批号：201006XXXX。PEP-多肽原料药工作对照品的标化二、质量研究根据PEP-多肽原料药质量标准草案中所建立的方法，对批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品进行检测和标化。1鉴别1.1外观性状取本品适量，按照中国药典2010年版二部凡例五（1）中的相关规定进行检查，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品为白色或类白色疏松状粉末，臭味。PEP-多肽原料药工作对照品的标化1.2溶解度取本品适量，按照中国药典2010年版二部凡例五（2）中的相关规定进行检查，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品易溶于水和DMSO，溶解于三氟醋酸，微溶于醋酸，极微溶解于甲醇，不溶于乙醚、乙醇、丙酮和乙腈。1.3比旋度取本品适量，按照中国药典2010年版二部附录ⅥE旋光度测定法中的相关规定进行检查，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品的比旋光度为-25.3°。PEP-多肽原料药工作对照品的标化1.4引湿性取本品适量，按照中国药典2010年版二部附录ⅪⅩJ“药物引湿性试验指导原则”的相关要求进行测定，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品极具引湿性。1.5特征显色反应本品化学结构中具有酰胺基，在强碱性溶液中，能进行双缩脲反应。批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品的双缩脲反应显蓝紫色，证明其化学结构中均含有酰胺基团。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2检查2.1溶液颜色检查取本品适量，按照中国药典2010年版二部附录ⅨA“溶液颜色检查法”第一法进行检查，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品的水溶液为无色。2.2澄清度检查取本品适量，按照中国药典2010年版二部附录ⅨB“澄清度检查法”的相关要求进行检查，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品的水溶液澄清。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2.3酸度取本品适量，按照中国药典2010年版二部附录ⅥHpH值测定法进行检查，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品的pH为2.98。2.4水分根据质量标准草案中所建立的水分测定方法，取本品适量，采用卡尔费休氏水分测定仪进行测定，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品中的水分为4.56%（n=3）。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2.5炽灼残渣取本品适量，将样品炭化后，高温炽灼，按照中国药典2010版二部附录ⅧN炽灼残渣法检查其残留的无机物质的硫酸盐，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品中炽灼残渣的量为0.21%（n=2）。2.6不溶性微粒取本品10mg，精密加入适量0.9%氯化钠注射液100ml，缓缓振摇使溶解，小心转移至取样杯中，然后静置30分钟脱气，再置于取样器上。按照中国药典2010版二部附录ⅨC“不溶性微粒检查法”第一法“光阻法”进行检查，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品中，含10μm及10μm以上的微粒1080粒，含25μm及25μm以上的微粒100粒，符合规定。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2.7可见异物取本品10mg，用水溶解后，转移至透明具塞玻璃试管中，然后加入适量水使总体积约100ml，按照2010版中国药典二部附录ⅨH“可见异物检查法”第一法灯检法进行检查，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品中的可见异物符合规定。2.8有关物质根据质量标准草案中所建立的有关物质分析方法，取本品适量，采用高效液相色谱法进行测定，按照1%自身对照法计算，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品中单个杂质的最大含量为0.16%，总杂质的含量为0.82%。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2.9三氟醋酸根据质量标准草案中所建立的三氟醋酸的分析方法，取本品适量，采用高效液相色谱法进行测定，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品中三氟醋酸的含量为20.52%。2.10有机溶剂残留采用气相色谱法（中国药典2010年版二部附录ⅧP第二法毛细管柱顶空进样系统程序升温法），分别对PEP-多肽原料药精制品中的哌啶和二氯甲烷、乙腈、乙醚进行了测定，采用气相色谱法（中国药典2010年版二部附录ⅧP第三法溶液直接进样法），对PEP-多肽原料药精制品中的N,N-二甲基甲酰胺进行了测定，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品中的N,N-二甲基甲酰胺、哌啶、乙醚、二氯甲烷和乙腈均未检出。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2.11氨基酸组成根据质量标准草案中所建立的氨基酸组成测定方法，取本品适量，采用高效液相色谱法测定，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品中的丝氨酸，谷氨酰胺，天门冬酰胺，半胱氨酸，甲硫氨酸的相对摩尔比分别为1.071，0.891，0.865，1.078和1.096，均在0.7~1.2范围内。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2.12重金属按照中国药典2010版二部附录ⅧH“重金属检查法”第一法的相关操作进行检查。取25ml纳氏比色管三支，甲管中加标准铅溶液1ml与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml后，加水稀释成25ml，乙管中加入40mg/ml的供试品溶液25ml（其中含pH3.5醋酸盐缓冲液2ml），丙管中加入与乙管相同量的供试品，加水适量使溶解，再加与甲管相同量的标准铅溶液与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml后，用溶剂稀释成25ml。再在甲、乙、丙三管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视进行测定。结果显示丙管中显出的颜色深于甲管，乙管中显示的颜色比甲管浅，接近溶剂的颜色，即批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品中重金属的含量小于小于百万分之十。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2.13砷盐按照中国药典2010年版附录ⅧJ砷盐检查法的相关要求进行检查。取批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品2.0g，加水23ml溶解后，加盐酸5ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即按药典规定将导气管密塞于反应瓶上，并将反应瓶置于30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞纸试，观察并比较结果。结果显示，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品砷含量小于0.0001%。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2.14细菌内毒素

取本品适量，用BET检查用水溶解，然后加入适量Tris溶液，逐级稀释，按照中国药典2010版二部附录ⅪE“细菌内毒素检查法”的相关要求进行检查，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品中，每1mg含细菌内毒素的量小于5EU。2.15微生物限度

取本品适量，按照中国药典2010版二部附录ⅪJ“微生物限度检查法”的相关要求进行检查，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品微生物限度检查结果符合规定。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2.16降压物质取本品适量，加入氯化钠注射液配制成每1ml中含PEP-多肽原料药

1mg的溶液，按照中国药典2010版二部附录ⅪG“降压物质检查法”的相关要求进行检查，剂量按猫体重每公斤注射0.25ml，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品降压物质的限度符合规定。2.17异常毒性

取本品适量，加入氯化钠注射液配制成每1ml中含PEP-多肽原料药

2mg的溶液，按照中国药典2010版二部附录ⅪC“异常毒性检查法”的相关要求进行检查，

ICR小鼠尾静脉注射给药0.5ml，批号为201006XXXX的PEP-多肽原料药精制品降压物质的异常毒性检查符合规定。PEP-多肽原料药工作对照品的标化三、含量分析:质量平衡法1无机杂质

以炽灼残渣结果表征本品无机杂质的含量，高温炽灼后遗留残渣为0.21%（n=2）。PEP-多肽原料药工作对照品的标化2挥发性物质2.1水分采用卡尔费休氏水分测定法进行测定，本品水分为4.56%（n=3）。2.2残留溶剂采用气相色谱法—毛细管柱顶空进样系统程序升温法分别测定了本品中的哌啶和二氯甲烷、乙腈、乙醚，结果显示哌啶和二氯甲烷、乙腈、乙醚均未检出，采用气相色谱法—溶液直接进样法测定了本品中的N,N-二甲基甲酰胺，结果显示N,N-二甲基甲酰胺未检出。2.3三氟醋酸采用高效液相色谱法进行测定，本品中三氟醋酸的含量为20.52%。PEP-多肽原料药工作对照品的标化3有关物质采用高效液相色谱法进行测定，按照1%自身对照法计算，本品中单个杂质的最大含量为0.16%，总杂质的含量为0.82%，纯度为100%-0.82%=99.18%。PEP-多肽原料药工作对照品的标化4含量确定根据上述组成分析及纯度的测定结果，按质量平衡法计算本品的含量。计算公式及结果为：PEP-多肽原料药精制品含量%=纯度%×（1-挥发性物质%-无机杂质%）

=99.18%×（1-4.56%-20.52%-0.21%）

=74.10%即本批PEP-多肽原料药精制品（批号201006XXXX）的含量为74.10%。PEP-多肽原料药工作对照品的标化

关于晶型问题

晶型是指结晶物质晶格内分子的排列形式多晶型物质晶格内部分子间力的差异可能引起药物各种理化性质的变化,主要对熔点、溶解度及溶出速率、稳定性、有效性的影响在不同条件下，各晶型之间可能会发生相互转化

关于晶型问题

原料药晶型研究全新药物：进行充分的晶型研究，确定是否为无晶型药物，若具有药用晶型，应详细说明仿制已上市的药品：要与原研药进行比较，确定与其晶型的一致性制剂晶型研究难溶性药物的口服固体制剂应注意晶型的一致性

关于晶型问题

晶型检查目的:控制有效晶型的含量、减少低效无效晶型的产生、保证批与批之间样品晶型的一致性、确保药品使用的安全性和有效性方法:熔点、IR、DSC、粉末X-射线衍射法、偏振光显微镜、电镜等手性药物的质量研究对映异构体的构型与药理作用的关系：药物的药理作用完全或主要由其中的一个对映体产生两个对映体具有完全相反的药理作用一个对映体有严重的毒副作用一种药理作用具有高度的立体选择性，而其他药理作用的立体选择性很低或无两个对映体的药理作用不同手性药物的质量研究原料药质量研究：应制订合理的比旋度范围如含量测定采用非立体专属性方法，应在“有关物质”项中增加对映异构体检查对于含有多个手性中心的药物，若根据所用的合成路线及质量研究的结果，对映异构体不可能存在，则可不订入对映异构体检查项，但应对其他可能产生的非对映异构体进行控制手性药物的质量研究制剂质量研究：如果该手性药物在制剂的制备及放置过程中有外消旋化发生，则制剂的标准中需制订对映异构体的检查项如无外消旋化发生，但同时有该手性药物的外消旋体或对映异构体上市销售，则制剂的标准中不必制订对映异构体的检查项，但应订入立体专属性的鉴别项以进行区别如无外消旋化发生，并且也没有该手性药物的外消旋体或对映异构体上市销售，则制剂的标准中既不必制订对映异构体的检查项，也不必订入立体专属性的鉴别项有关物质的检查

分析方法分离技术与检测手段的结合:HPLC、GC、TLC

注意不同原理的分析方法间的相互补充与验证有关物质的定量方式分析方法的验证：专属性、灵敏度有关物质的检查杂质谱分析—分析杂质的来源：依据制备工艺，分析潜在工艺杂质基于结构特征，分析可能的降解产物通过强制降解试验，验证降解产物的存在与检出与原研市售品的杂质情况进行对比研究，明确杂质的异同杂质谱分析的意义：从理论上推导杂质的结构，便于定性和文献比对为杂质对照品的获得提供信息，便于杂质对照品的合成或外购为杂质控制的方法学建立提供必要的信息杂质谱的研究贯穿于工艺研究、结构确证、质量研究和稳定性研究中，是开展质量研究和稳定性研究的基础和必要条件。有关物质的检查有关物质的检查

分析方法（专属性研究中存在问题）破坏条件太剧烈，主药峰太低，提供的色谱图主峰与降解物或降解物间分离不好，甚至主峰消失，失去破坏性试验意义。一般样品含量控制在80%-90%范围（归一化法）未注意破坏前后的物料守恒遗漏了药物敏感条件下的破坏试验缺少制剂的辅料考核和未排除辅料产生的杂质干扰有关物质的检查杂质限度的制订一般原则创新药物仿制已有国家标准的药品临床研究与上市生产申请阶段的杂质研究最新CTD要求：杂质按下表列明已鉴定的杂质（有机杂质、无机杂质、副产物、降解产物、残留溶剂和催化剂等)，对于已知杂质提供详细的结构确证资料杂质名称杂质结构杂质来源杂质控制限度是否定入质量标准原料药的杂质限度

最大日剂量报告限度鉴定限度质控限度≤2g0.05%0.10%或1.0mg(取最小值)0.15%或1.0mg(取最小值)>2g0.03%0.05%0.05%制剂的杂质限度

报告限度最大日剂量≤1g>1g限度0.1%0.05%鉴定限度最大日剂量<1mg1mg～10mg>10mg～2g>2g限度1.0%或5μg(取最小值)0.5%或20μg(取最小值)0.2%或2mg(取最小值)0.10%质控限度最大日剂量<10mg10mg～100mg>100mg～2g>2g限度1.0%或50μg(取最小值)0.5%或200μg(取最小值)0.2%或3mg(取最小值)0.15%杂质含量是否

大于鉴定限度？合格结构确证有无与人体有关的危险性？降低到安全限度合格合格合格是否大于质控限度？是否与临床不良反应有关？考虑病例数与疗程，同时考虑：

遗传毒性研究；常规毒性研究；其它特定的毒性终点（酌情而定）。降低到鉴定限度以下？降低到质控限度？降低到安全限度决策树否否否否否否是是是是是是有无那格列奈(Nateglinide)质量研究示例一治疗Ⅱ型糖尿病药口服速效型餐后降血糖药主要优点是：作用机制新颍，起效快，给药灵活、安全性好等

有报道认为是早期及轻度糖尿病患者的一线治疗药物

那格列奈工艺过程新型结构：苯丙氨酸衍生物N-(反式-4-异丙基环已基-1-甲酰基)-D-苯丙氨酸纯度检查杂质分析有关物质检查HPLC晶型检查B晶型异构体检查手性分离分析供试品中B晶型的检查红外光谱法热分析法X射线粉末衍射法

示例二头孢克肟中有关物质检查（百分之一自身对照法）取含量测定项下的样品溶液1ml，用pH7.0的磷酸缓冲液稀释定容至100ml，制成浓度为样品溶液的1/100的对照溶液取对照溶液20μl注入液相色谱进行预试，调节灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的20～25％，与含量测定项下的供试品溶液比较，供试品溶液的色谱图中如果有杂质峰（溶剂峰除外），杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰面积的3倍（3％）采用自身对照方法计算：有关物质（3％）＝×3％∑A-A主峰A`主峰×3主峰∑AA`主峰计算：有关物质（3％）＝×3％

＝（121.588-119.6601）/（1.3031×3）×3％＝1.48％∑A-A主峰A`主峰×3示例三HPLC分别串联紫外检测器和荧光检测器测定盐酸苯达莫司汀原料药的有关物质一种双功能基烷化剂，通过烷化作用使DNA单链和双链交联，干扰DNA的功能和DNA的合成，从而发挥抗肿瘤作用。BDH紫外吸收全扫（200

400nm）典型图谱BDH荧光吸收全扫（200

800nm）典型图谱

BDH在234和335nm波长处有最大吸收峰激发波长为334nm，发射波长为425nmBDH原料药有关物质HPLC-UV分析典型谱图

BDH原料药有关物质HPLC-FLD分析典型谱图

杂质峰1、2、3、5、6，主成份峰4杂质峰1、2、3、5、6、7，主成份峰4

杂质峰1、2、3、5、6，主成份峰4杂质峰1、2、3、5、6、7，主成份峰4示例四盐酸苯达莫司汀临床给药过程中的降解产物及其结构确证

由于BDH在水溶液中容易发生水解，所以国外上市销售的BDH为冻干粉针剂，临床使用都是现用现配，目的是防止BDH由于水解而降低疗效。

随着时间增加，BDH主成份不断减少，降解产物HP1和HP2逐渐增加。1h内降解产物HP1的百分含量在1%以内；室温放置50h后，BDH降解为52.27%，同时HP1含量增加到33.53%，HP2增加到14.20%。ThermoScientificLCQFleetLC-MSn分析根据BDH、HP1和HP2在色谱图上的保留时间与极性关系，可以推测降解产物HP1和HP2为一羟基取代BDH和二羟基取代BDH。

ThermoScientificQExactiveLC-MSn分析BDH提取离子流图与对应的一级质谱图ThermoScientificQExactiveLC-MSn分析HP1提取离子流图与对应的一级质谱图ThermoScientificQExactiveLC-MSn分析HP2提取离子流图与对应的一级质谱图降解产物HP1与HP2结构示意图

残留溶剂的检查

残留溶剂研究的基本原则确定残留溶剂的研究对象残留溶剂分类及研究原则研究结果的分析及质量标准的制定残留溶剂表示方法

A.允许日接触量PDEB.浓度限度(%)=

质量标准制定的一般原则及阶段性要求药物中常见残留溶剂及其限度第一类溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)苯0.020.0002四氯化碳0.040.00041,2-二氯乙烷0.050.00051,1-二氯乙烷0.080.00081,1,1-三氯乙烷15.00.15第二类溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙腈4.10.041氯苯3.60.036三氯甲烷0.60.006环己烷38.80.3881,2-二氯乙烯18.70.187二氯甲烷6.00.06第二类溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙二醇6.20.062甲酰胺2.20.022正已烷2.90.029甲醇30.00.3甲基环已烷11.80.118第二类溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)N-甲基吡咯烷酮5.30.053吡啶2.00.02甲苯8.90.089N,N-二甲氧基甲酰胺8.80.0881,4-二氧六环3.80.038第三类溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙酸50.00.5丙酮50.00.5正丁醇50.00.5二甲亚砜50.00.5乙醇50.00.5第三类溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙酸乙酯50.00.5乙醚50.00.5正丙醇50.00.5异丙醇50.00.5异丁醇50.00.5尚无足够毒性资料的溶剂

1,1-二乙氧基丙烷1,1-二甲氧基甲烷

2,2-二甲氧基丙烷异辛烷异丙醚甲基异丙基酮甲基四氢呋喃石油醚三氯乙酸三氟乙酸示例五大孔树脂有机溶剂残留大孔树脂是一种不溶于酸、碱及各种有机溶剂的有机高分子聚合物,应用大孔树脂进行分离的技术是20世纪60年代末发展起来的继离子交换树脂后的分离新技术之一物理化学稳定性高比表面积大吸附容量大选择性好吸附速度快解吸条件温和再生处理方便使用周期长宜于构成闭路循环节省费用溶剂残留的引入大孔吸附树脂主要以苯乙烯、а-甲基苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯、丙腈等为原料加入一定量致孔剂二乙烯苯聚合而成,多为球状颗粒,直径一般在0.3～1.25mm之间,通常分为非极性、弱极性和中极性。主要存在正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯（对于树脂的检测）洗脱过程采用不同比例的乙醇，因此也存在乙醇的残留（主要存在于产品中）乳癖消原料药（提取物）中有机溶剂残留的测定

乳癖消原料药的制备取昆布、漏芦等14味药材按处方比例称取后加水煎煮两次，合并两次提取液滤过，滤液减压回收浓缩，上样D-101大孔树脂，静止吸附，采用梯度洗脱：水—20％乙醇—75％乙醇。收集醇洗部分，减压回收乙醇后喷雾干燥，成细粉。可能残留的溶剂—乙醇—第三类溶剂，限度0.5％实验部分色谱条件仪器：岛津GC-14B气相色谱仪色谱条件：SIMPLICITY-530m×0.32mm×0.25

m毛细管柱FID检测分流比30:1，进样量1

l。进样分析开始毛细管60℃恒温6min，而后程序升温40

C/min至200

C，并维持1min。实验部分系统适用性试验：理论塔板数以乙醇、正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、苯乙烯和二乙烯苯色谱峰计算应不低于5000；乙醇、正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、苯乙烯和二乙烯苯与内标物正庚烷的色谱峰分离度应大于1.5；以内标法测定时，所得待测物与内标物色谱峰面积之比的相对标准偏差应不大于5%。tR5.355对二甲苯tR5.982苯乙烯tR9.008、9.0979.338、9.462二乙烯苯tR2.170乙醇tR2.410正己烷tR2.682苯tR2.845正庚烷（内标）tR3.487甲苯峰号保留时间半峰宽理论塔板数分离度12.1700.03521361.2380.00022.4100.02840248.4023.81632.6820.03729817.5144.23142.8450.03536690.6412.20953.4870.055223