T-SPPHN 003-2023 单核苷酸多态性和侵染性克隆法鉴定蔬菜抗病毒病抗性技术规程

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B15/19湖南省植物保护学会团体标准T/SPPHN

单核苷酸多态性和侵染性克隆法鉴定蔬菜抗病毒病抗性技术规程Rule

for

evaluation

of

vegetables

resistance

against

viral

diseases-single

polymorphism

and

viral

infectious

clone

method11-20

发布 11-20

实施湖南省植物保护学会

发布学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

003-2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载本文件是根据GB/T

《标准化工作导则

第一部分：标准的结构和起草规则》的要求编制本文件由湖南省植物保护学会归口。物保护研究所、宁波大学。学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

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Solanum

）和辣椒（Capsicum

3.1

黄瓜花叶病毒（Cucumber

mosaic

virus,

Cucumovirus性降低。3.2

烟草花叶病毒（Tobacco

mosaic

virus，TMV）Tobamovirus），病毒粒子为杆状结构。可通过蚜虫、种子、水、土壤、机械和嫁接传播，寄主范围广，侵染葫芦3.3

黄瓜花叶病毒病（Cucumber

mosaic

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003-2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载畸形，植株矮化，花和果实易脱落，导致减产；果实畸形，从而失去商品性。3.4

烟草花叶病毒病（Tobacco

mosaic

畸形，果实着色不均匀或畸形，商品性严重下降。3.5

分子标记(Molecular

3.6

CMV、TMV

infectious

cDNA

clones

of

CMV

orTMV

cDNA

3.7

disease

nursery的抗病水平。

4.1

CTAB

70

ddH

20

8.0)0.5

200

30

4.2

1.5%

1.5

100

504.3

50×TAE

242

57.1

37.2

ddH

4.4

SYBR

99

ddH

4.5

pH8.0

800

ddH

121

8.050

8.050

50%4.6

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003-2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载4.7

MS

4.43

30

5.8121

30

4.2

YEP

10

10

950

pH7.0

121

30

固体培养基添加琼脂粉

4.3

100

500

的一次性注射器中，经孔径0.22

100

℃长期保存。

50

250

利福平先用少量无水乙醇涡旋振荡以溶解，再用无离子水定容至

，然后在超净台内用一次性注射器和一次性0.22

滤膜过滤除菌，即配成50

利福平母液。分装到个灭菌的

4.4

100

mmol/L

98.1

00

mmol/L

4.5

CMV、TMV

侵染性克隆农杆菌菌株，采用该病毒的特异性引物和方法，扩增出病毒基因组的全序列后，将扩增产物克隆中，克隆进行选和测定再利用限酶切法把基因全长

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003-2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6.1

10

6.2

Solanum

lycopersicum

Solanum

lycopersicum

Zuanhong

号（

6.3

70%30

20%0.1%15

5~66.4

131

℃，30~50

28

30

18

20

苗的子叶或第

7.1

7.2

DNA

7.2.1

100

107.2.2

0.2

15

12

000

10

7.2.3

20

7.2.4

12

000

10

7.2.5

75%

次；12

000

10

7.2.6

3050

ddH2O

7.3

PCR

7.3.1

20

µL10

µL10

µL

µL

µLddH2O15

µL学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

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检测反应体系

94

35

94

30

30

72

72

10

7.5

7.5.1

扩增产物10

µL

1.5%80

30

7.5.2

7.5.3

7.6

8.1

将冻存的

侵染性克隆农杆菌菌株接种至含卡那霉素

100

mg/L

和利福平

50

28

24

48

50

100

50

28

200

ｘｗ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

003-2023ｘｗ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆ．ｃｏｍ标准下载

000

10

，随即用

100

1.0

8.2

“6.2

子叶完全伸展和长至第

0.1

辣椒植株置于防虫温室里，进行正常的肥水管理。

9.1

周后观察鉴定植株的发病症状，

30

9.2

引起花叶病毒病的病情级别划分病情级别，并计算每份鉴定材料的病情指数（），取三次重复病情指数的平均值。∑（

100 ..………….………(1)

Highly

20

2040

40

Susceptibleｚｆｗｗｗ．ｂｘｗ兔学兔．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

003-2023ｚｆｗｗｗ．ｂｘｗ兔学兔．ｃｏｍ标准下载

10

10.1

茄科作物材料对黄瓜花叶病毒病和烟草花叶病毒病抗性的评价标准10.2

茄科作物材料对黄瓜花叶病毒病和烟草花叶病毒病抗性的评价标准10.2

10.3

茄科作物材料抗黄瓜花叶病毒病（表

年茄科作物材料抗黄瓜花叶病毒病鉴定结果记载表

年茄科作物材料抗烟草花叶病毒病鉴定结果记载表学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN

003-2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载10.4

5’-3’

556235723055

、

、

、

、

、

、

15651617657001819

CTTTCC

CTC

TCC55950

569

20

CTTTCC

CCT下准ｏｍ标ｘｗ．ｃｚｆ学兔兔ｗｗｗ．ｂ载T/SPPHN

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A.1.1

Cucumovirus），病毒粒子为二十面体球状结构，是一种正单链植物病毒。烟草花叶病毒病的病原为烟草花叶病毒，属于帚状病毒科（）烟草花叶