液相色谱仪ROHS2.0操作指导书

XXX有限公司文件编号QCD-WI-1073文件版本号A0文件名称液相色谱仪箱操作指导书生效日期2021-8-31页码第1页共10页文件修订记录修订日期修订内容修订者A02021/8/31新版发行

目的:为LC液相色谱仪的使用提供方法、依据。范围:LC液相色谱仪。职责说明:ROHS检测员负责每日的ROHS检验和设备保养工作；技术员/工程师负责仪器的调试及测试不合格品的确认。程序:4.1过滤、超声脱气使用溶剂过滤器分别过滤甲醇和纯水（过滤甲醇时采用有机系滤膜、过滤水时采用水系滤膜），过滤后转入流动相瓶中（甲醇和水的体积需要满足当天的实验所需。如果仪器停机超过一星期，建议先清洗流动相瓶）。将流动相瓶放入超声波清洗器内超声脱气10分钟左右。接好流动相（将流动相吸滤头放入流动相瓶中。A泵接甲醇、B泵接纯水）。（图一：溶剂过滤器和真空泵） （图二：超声清洗器）（图三：仪器外部管线连接图）4.2观察流动相输入管内是否有大量气泡如果流动相输入管内有大量气泡，则先打开高压恒流泵的排空阀，用针筒快速抽出约15毫升流动相，以排出流动相输入管内的气泡，再关闭排空阀。B泵分别按这一步操作）否则，直接跳过这一步、执行下一步的操作。4.3断开连接保护柱和色谱柱将保护柱入口端的PEEK接头旋开（保护柱上的箭头尾部的一端，即不连接保护柱和色谱柱）。PEEK管置于废液瓶中（如右图四所示）。 （图四）4.4冲洗管路——B泵（水）打开仪器B泵(水）的电源开关，按“设置”键7次进入冲洗设置，按向上或向下的方向键选择“是”，依次按两次“启动”键，此时泵以5毫升/分钟的流量输液（注：切记此时不可以连接保护柱和色谱柱，否则将冲坏保护柱和色谱柱）。观察与手动进样阀的3号位相接的PEEK管的另一端是否有连续的液体流出（如果没有液体流出，说明泵的两个输入单向阀都堵塞了；如果液体断续流出，说明泵的某一个输入单向阀堵塞了。请停泵后按单向阀的拆卸及清洗步骤进行），冲洗结束后自动停止输液。4.5冲洗管路——A泵（甲醇）打开仪器A泵（甲醇）的电源开关，按上面的4.4步操作。4.6接好管路冲洗好管路后把PEEK一端管路接回保护柱，注意PEEK管需要留出不少于5mm（如右图五所示），再旋接上保护柱。（图五）4.7打开工作站软件按图三所示重新接好保护柱和色谱柱，打开紫外检测器的电源开关，待自检完毕、显示默认波长254nm后，打开电脑上的色谱工作站（伍丰液相）软件。4.8设置仪器参数在色谱工作站上设置波长为224nm、初始比例（甲醇：水=70：30）、流量为1mL/min、柱温为35℃、压力下限和压力上限分别为0.5MPa和25MPa），设置梯度时间程序（详见下面的步骤4.13梯度程序），按“泵启动”运行输液泵、按“加热”开启柱温箱控温（见图六中红色方框标记的部分）。（图六：工作站软件界面示意图）4.9选择色谱工作站的参数设置（左上角的第三个图标），按下面图七中的内容设置各项参数（显示上限设为200）。设置谱图保存路径和文件名命名方式（所有文件夹和文件名只能以字母、数字和汉字来命名，千万不能有其它字符，否则软件会出错）。（图七：参数设置界面）4.10观察基线是否稳定需要在泵启动约30分钟后观察基线，当基线变成一条水平方向的直线即为基线稳定，基线稳定后才能进行下一步实验操作。如果基线未稳定，需要查找原因（检查泵的压力实测值是否有异常、压力波动是否大于0.2MPa、各项仪器参数设置是否正确）。4.11测试混合标准溶液（简称：混标溶液或混标、标样，下同）4.11.1进混标溶液（标样）测试用混标溶液洗涤微量进样针四次以上（用微量进样针吸取80～100μL混标溶液后排至废液瓶，重复四次以上），再次吸取80～100μL混标溶液，将微量进样针针尖向上，缓慢排出进样针内的气泡（需确保进样针内剩余的标液体积不少于60μL，如不足则再次吸取标液）。将手动进样阀旋转手柄快速旋转至LAOD位置，将微量进样针针尖插入手动进样阀中，注入混标溶液，将手动进样阀旋转手柄快速旋转至INJECT位置，此时色谱工作站开始采集数据。注：A.进样时不可以将气泡注入进样阀。B.混合标液需储存在冰箱的冰藏室中保存（不要放在冷冻室）。每天使用前需至少提前一小时将存放混合标液的瓶子取出，在室温下解冻（不能扭开瓶盖）。C.每天开机后必须用4P混合标样溶液连续测试两次以上，每次35分钟，35分钟后软件会自动结束采样并转入工作站的后处理界面。需要等待5分钟以上才能再次进样测试。（如果因特殊原因需要提前结束，4P混标可以在25分钟左右按左上解的蓝色正方图标提前结束，但是需要再等待10分钟以上才能再次测试标样溶液或样品溶液）。测试样品溶液时必须等待35分钟后自动结束。4.11.2设置标样色谱图保存路径和文件名在测试中按工作站左上角的“参数设置”图标，在参数设置界面中修改谱图的保存路径和文件名。4.11.3标样色谱图手工积分工作站采集信号至35分钟后将自动结束，得出标液的色谱图并保存，并自动切换至工作站后处理界面。根据需要对谱图进行手工积分处理，记录标液测试的峰面积。（建议进样两至三次，如果保留时间偏差超过百分之一时需重复进样分析。如保留时间偏差一直超出要求，需检查仪器运行的状态是否正常。）注：手工积分的方法及步骤请参见手工积分的视频。4.12测试样品4.12.1样品分解、称重（此步操作可以与混标测试同步进行）将样品剪成直径1至2mm（颗粒越小越好）；称取1.0～1.2克左右的样品于100mL具塞锥形瓶中（去掉锥形瓶的重量），并记录准确的称样重量，单位克。（图五：样品分解后示意图）（图六：称重）（图八：样品分解后示意图）（图九：称重）4.12.2加入萃取溶剂、超声萃取（此步操作可以与混标测试同步进行）用25mL移液管准确吸取25毫升甲醇（液位处于25mL移液管上的刻线位置即为25mL），加入上一步骤的锥形瓶中，放入超声波清洗器中超声提取30分钟，停止后静置5分钟，再次超声30分钟。样品总的超声提取时间控制在60至120分钟。（视样品的颗粒大小等而定）部分PVC材质样品需要使用乙腈来萃取样品。（图十：后图为样品超声萃取示意图）4.12.3过滤样品溶液超声提取后的样品溶液，用1毫升的玻璃注射器吸取后接针头样品过滤器过滤，滤液用2毫升或4毫升样品瓶收集。样品在使用针头样品过滤器过滤时，过滤速度不要太快，建议每秒钟1至2滴的速度过滤。特别是那些样品超声提取后溶液中含有较多杂质或纤维时，过滤时需要慢一点，用力也不能太大（用力太大时容易将针头样品过滤器内的滤膜弄破，达不到过滤的效果）。如果过滤后的溶液中还含有肉眼能看到的颗粒物或纤维，必要时需要另外用一只新的针头样品过滤器再次过滤。注：前一天超声提取后未过滤的样品，第二天要再次超声30分钟后按该步骤过滤。（图十一：样品过滤）（图十二：清洗进样阀）4.12.4进样品溶液测试用过滤后的样品溶液洗涤微量进样针四次以上（用该微量进样针吸取80～100μL样品溶液后排至废液瓶，重复四次以上），再次吸取80～100μL样品溶液，将微量进样针针尖向上，缓慢排出进样针内的气泡（需确保进样针内剩余的样品溶液体积不少于60μL，如不足则再次吸取样品溶液），将手动进样阀旋转手柄快速旋转至LAOD位置，将微量进样针针尖插入手动进样阀中，注入样品溶液，将手动进样阀旋转手柄快速旋转至INJECT位置，此时色谱工作站开始采集数据。注：如前一次测试的样品溶液超标时，需要先用甲醇清洗手动进样阀（见上面的图九）。清洗时用专用的注射器清洗，吸取1mL的甲醇，确认阀的位置在（INJECT位置）时，注入约0.5mL甲醇到阀里面清洗，然后将阀旋转至（LAOD位置）再次注入约0.5mL甲醇到阀里面清洗，清洗后阀的位置保持在（LAOD位置），再吸取不少于60μL样品溶液注入到阀中，再将阀旋转至（INJECT位置）进行正常测试。4.12.5设置样品色谱图的保存路径和文件名按色谱工作站左上角的“参数设置”图标，进入参数设置界面。修改谱图的保存路径和文件名（如有需要）。4.12.6样品色谱图手工积分工作站结束信号采集后，得出样品的色谱图，并自动切换至工作站后处理界面。根据需要对谱图进行手工积分处理，记录样品溶液测试的峰面积，工作站结束信号采集后需等待5分钟以上才可以测试下个样品。4.12.7分析结果判定如果样品中某一个色谱峰的保留时间与标样中某一种邻苯二甲酸酯的保留时间相差不超过百分之一（指保留时间数值的相对偏差），可判断为该色谱峰就是这种邻苯二甲酸酯；如果该色谱峰的保留时间与标样中任意一种邻苯二甲酸酯的保留时间的偏差超过百分之三，判定为不是这种邻苯二甲酸酯；如果该色谱峰的保留时间与标样中某一种邻苯二甲酸酯的保留时间相差在百分之一至百分之三之间时，判断为疑似这种邻苯二甲酸酯，必要时需按后续方法进行进一步验证。注：可以进入谱图比较界面，打开混合标液测试的谱图和样品谱图，将谱图叠加，观察保留时间的偏离情况。以此判断是否含有混合标液中的几种邻苯二甲酸酯。4.12.8分析结果计算：可以在检测报告中输入标液的浓度、样品的称样量、标样中各组份的峰面积、样品中各组份的峰面积，软件自动计算样品中各个组份的含量。也可以按下面的计算公式计算样品中各个组份的含量。ωs=（Ais×Cs×V）/（As×m）式中：ωs指样品中待测组份的含量，单位为ppm；As指混合标液中待测组份的峰面积（mAu.s）；Ais指样品中待测组份的峰面积（mAu.s）；Cs指混合标液中待测组份的浓度（μg/mL）；V指样品萃取时中加入的甲醇的体积（mL）；m指样品的称样量（g）。根据计算结果判定是否合格（如果样品中任一组份的含量超过限定值，即为不合格；否则为合格）。4.12.9疑似超标样品的验证方法说明：对于样品检测时出现的疑似邻苯二甲酸酯的组份，如果该组份按邻苯二甲酸酯计算时的含量在限定值以下，可以不用验证；如果超过限定值，按下面的方法验证：a.将检测波长改为275nm；b.分别测试样品溶液和混合标液；c.计算混合标液中各种邻苯二甲酸酯在224nm和275nm下测试的峰面积比值；d.计算样品溶液中疑似组份在224nm和275nm下测试的峰面积比值，将该比值和上面标样中对应组份的比值进行比较（用224nm/275nm测试的峰面积的数值）。如果数值偏差在10%以内，则确定样品溶液中含有该邻苯二甲酸酯（具体含量以224nm下测试的数值为准）；如果数值偏差超过10%，则排除。注意：1、如果样品溶液中疑似超标的组份在224nm测试时的峰高低于500mAu时，直接在275nm下进样验证实验；如果峰高在500至2800mAu之间时，以峰高值除以200后的数值为稀释倍数，用甲醇稀释后再分别在224nm和275nm下测试；如果峰高在2800mAu以上时，建议稀释30倍后先在224nm下测试，峰高低于500mAu时再在275nm下测试（如果峰高仍然超过500mAu，按上面的方法继续稀释后分别在224nm和275nm进样测试）。4.13梯度程序：初始比例A：B（甲醇：水）=70：3010minA：B（甲醇：水）=90：1028minA：B（甲醇：水）=90：1028.001minA：B（甲醇：水）=70：304.14关机步骤：4.14.1将流动相比例设为A（甲醇）100%；输液30分钟以上。4.14.2关柱温箱的电源开关。4.14.2按“停止泵”，退出工作站软件。4.14.3如果仪器需要停机一段时间（超过叁天），需将B泵的流动相（水）也换为甲醇后按后面的方法操作：将保护柱与进样阀相连的一端管路旋开，按“设置”键7次进入冲洗设置，按向上或向下的方向键选择“是”，依次按两次“启动”键，此时泵以5毫升/分钟的流量输液，5分钟后，接上保护柱和色谱柱。注：工作站软件退出两分钟之后，泵的按键操作才能正常。4.14.4关仪器电源。如果客户所在地属于雷击高发区，建议拔下仪器的电源插头。说明：a、仪器停机期间，流动相吸滤头不能长时间泡在纯水中，防止长青苔（可以放入甲醇中浸泡）；b、如果仪器需要长时间停机，建议每隔一个月开机一次，用过滤并脱气的纯甲醇，以1毫升/分钟的流量冲洗色谱柱30分钟至60分钟。停止泵，关工作站软件和仪器电源。保护柱维护方法：先打开仪器B泵(水）的电源，按“设置”键7次进入冲洗设置，按向上或向下的方向键选择“是”，依次按两次“启动”键，此时泵以5毫升/分钟的流量输液（注：切记此时不可以连接保护柱和色谱柱，否则将冲坏保护柱和色谱柱）。观察与手动进样阀的3号位相接的PEEK管的另一端是否有连续的液体流出（如果没有液体流出，说明泵的两个输入单向阀都堵塞了；如果液体断续流出，说明泵的某一个输入单向阀堵塞了。请停泵后按单向阀的拆卸及清洗步骤进行），冲洗结束后自动停机。再冲洗管路A泵（甲醇），打开仪器A泵（甲醇）的电源，按上面的5.1步操作。待B、A泵冲洗完，在柱套上做好标记，确认保护柱芯的正反方向；取下保护柱，在不打开卡套的前提下将保护柱反方向连接（注意此时不能接色谱柱），打开电脑上的色谱工作站（LC液相采样）软件，进入测试界面，用甲醇：水＝10：90以1.6mL/min流速冲洗15～30min（见图十三），然后再用纯甲醇以1.6ml/min流速冲洗10～20min；（见图十四）（图十三：保护柱冲洗，注意图中红色方框部分的内容）（图十四：保护柱冲洗，注意图中红色方框部分内容）冲洗好后将保护柱正方向连接，启动泵除去保护柱和连接管内的空气，再连接好色谱柱，象平常一样使用。注意事项：观察柱压和紫外检测器的光强：在正常情况下，每天实验结束时的柱压与仪器开机稳定后的柱压相比不应该有比较大的差别。如果柱压变动较大（超过0.3或0.4MPa），一般都是因为样品的原因造成了保护柱堵塞，此时需要处理保护柱或直接更换保护柱柱芯。（保护柱的处理方法见：5.0保