全自动微生物定量分析仪校准规范

JJF1666—20171全自动微生物定量分析仪校准规范1范围本规范适用于采用荧光检测和最大可能数法原理的微生物定量分析仪的校准。其他相同原理的微生物定量分析仪,可参照本规范执行。2引用文件本规范引用了下列文件:JJF1071—2010国家计量校准规范编写规则GB4789.3食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB/T5750.12生活饮用水标准检验方法微生物指标凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。3术语GB4789.3和GB/T5750.12定义的及以下术语和定义适用于本规范。3.1泊松分布Poissondistribution泊松分布是一种统计与概率学里常见到的离散机率分布(discreteprobabilitydistri-bution),适合于描述单位时间(或空间)内随机事件发生的次数。3.2最大可能数法mostprobablenumbermethod,MPN基于泊松分布的一种间接计数方法,又称稀释培养计数,是微生物检测中计算各种样品微生物数目最常用的方法。4概述全自动微生物定量分析仪(以下简称仪器)是采用荧光检测和最大可能数法原理对微生物进行定量分析的仪器。仪器主要由样品准备系统和阅读系统组成。样品准备系统是将样本和特定的培养基加入到卡片内。阅读系统是通过检测荧光,根据阳性孔数目计算结果。5计量特性5.1进样压力稳定性5.2进样压力重复性5.3激发光波长5.4激发光强度均匀性5.5激发光强度稳定性JJF1666—201726校准条件6.1环境条件6.1.1环境温度:(15~30)℃;6.1.2环境相对湿度:环境相对湿度不超过75%;6.1.3电源:电压(220±22)V,频率(50±1)Hz,并具有良好的接地;6.1.4仪器工作环境应明亮、整洁、无腐蚀性气体、通风良好。6.2校准用设备6.2.1真空压力记录仪隔不103~105)Pa,相对扩展不确定度不大于0.9%(k=2)。记录时间间6.2.2光纤光谱仪量相8,(展不确定度不大于0.5nm(k=2),光强度测7校准项目和校准方法7.1一般检查各紧固件均应安装牢固,各调节旋钮、按键和开关均能正常工作。测试配件齐全,无影响使用性能的缺陷。7.2进样压力稳定性和重复性7.2.1进样压力稳定性分别将仪器压力设定为40kPa、53kPa。采用真空压力记录仪检测两个压力下进样舱内气压,待压力开始达到设定值后,每0.5s记录一次压力示值,连续测量10次。按照式(1)计算各压力在相应时间段的稳定性。式中:δP=Pmax-Pmin(1)δP—压力稳定性,kPa;Pmax—设定压力下真空压力记录仪测定得到的最大压力值,kPa;Pmin—设定压力下真空压力记录仪测定得到的最小压力值,kPa。7.2.2进样压力重复性选择设定压力值为40kPa进行进样压力重复性测量。运行仪器程序,当升压至40kPa稳定后,采用真空压力记录仪每0.5s记录一次压力示值,连续记录10个进样仓内气压,取其算术平均值作为该次压力测量值。重复运行仪器程序6次,测得6个进样仓压力,按照式(2)计算40kPa进样压力的相对标准偏差(RSD),作为进样压力重复性。RSD=×(Pi-)2×n-1×100%(2)JJF1666—20173式中:RSD—相对标准偏差,%;n—重复测量次数(n=6);Pi—第i次压力测量的结果,kPa;—P—6次测量结果的平均值,kPa。7.3激发光波长和激发光强度7.3.1激发光波长打开仪器光源,稳定10min后,将光纤光谱仪置于光照区域中心点,对光波长进行测量,重复测量3次,取3次测量结果的平均值作为仪器光波长λ测量值。7.3.2激发光强度均匀性待仪器光源稳定后,在激发光照区域水平中心线上选择均匀分布的5个测试点(包括激发光照区域中心点)进行激发光强度均匀性测量。外侧测试点位于仪器光照区域(卡槽)边缘内侧5cm处。采用光纤光谱仪对5个分布点的激发光强度分别测量3次,并取3次测量值的平均值作为该分布点的激发光强度值,按照式(3)计算激发光强度均匀性。ΔI=Imax-Imin(3)式中:ΔI—激发光强度均匀性,μW/cm2;Imax—激发光照区域内各分布点中激发光强度最大值,μW/cm2;Imin—激发光照区域内各分布点中激发光强度最小值,μW/cm2。7.3.3激发光强度稳定性选择激发光照区域中心点进行激发光强稳定性测量。待激发光源稳定后,采用光纤光谱仪对激发光强度进行连续测量10min,每1min记录1次数值,并按照式(4)计算激发光强度稳定性。δI=Imax-Imin(4)式中:δI—激发光强度稳定性,μW/cm2;Imax—激发光强度最大测量值,μW/cm2;Imin—激发光强度最小测量值,μW/cm2。8校准结果表达经校准后的全自动微生物定量分析仪应填发校准证书,校准证书应符合JJF1071—2010中5.12的要求。校准证书至少包括以下信息:a)标题,如“校准证书”或“b)实验室名称和地址;c)进行校准的地点(如果不在实验室内进行校准);d)证书或报告的唯一性标识(如编号),每页及总页数的标识;e)送校单位的名称和地址;JJF1666—20174f)被校对象的描述和明确标识;g)进行校准的日期,如果与被校结果的有效性和应用有关时,应说明被校对象的接受日期;h)如果与校准结果的有效性和应用有关时,应对抽样程序进行说明;i)对校准所依据的技术规范的标识,包括名称及代号;j)本次校准所用测量标准的溯源性及有效性说明;k)校准环境的描述;l)校准结果及测量不确定度的说明;m)校准证书或校准报告签发人的签名、职务或等效标识以及签发日期;n)校准结果仅对被校对象有效地声明;o)未经实验室书面批准,不得部分复制证书或报告的声明。9复校时间间隔全自动微生物定量分析仪复校时间间隔建议为1年。由于复校时间间隔的长短是由仪器的使用情况、使用者、仪器本身质量等诸因素所决定的,因此,送校单位可根据实际使用情况自主决定复校时间间隔。如果对仪器的检测数据有怀疑或仪器更换主要部件及修理后应对仪器重新校准。JJF1666—20175附录A校准证书(内页)参考格式校准环境条件温度:℃相对湿度:%地点:其他:序号校准项目校准结果1进样压力稳定性测量值:2进样压力重复性测量值:3激发光波长测量值:不确定度:(k=2)4激发光强均匀性测量值:5激发光强稳定性测量值:校准员:核验员:6附录B校准原始记录参考格式送检单位仪器名称地址仪器型号温度/相对湿度℃,%制造厂出厂编号测试日期委托书编号检测员核验员标准器名称型号规格出厂编号证书号技术特征真空压力记录仪光纤光谱仪1.一般检查:□符合;□不符合;□其他。2.进样压力稳定性进样压力40kPa53kPa12345678910平均值压力稳定性73.进样压力重复性测量次数进样压力/kPa平均值/kPa123456重复性4.激发光波长测量次数123平均值/nm激发光波长/nm5.激发光强度均匀性位置12345激发光强度μW/cm2平均值μW/cm2均匀性μW/cm26.激发光强度稳定性时间/min12345678910激发光强度μW/cm2校准员:核验员:JJF1666—20178附录C激发光波长校准不确定度示例C.1概述全自动微生物定量分析仪激发光波长校准操作步骤如下:将光纤光谱仪置于激发光照区域中心点,对激发光波长进行测量,重复测量3次,取3次测量结果的平均值作为仪器激发光波长测量值。C.2测量模型激发光波长平均值的公式表示为:λλi(C.1) λ— λ—激发光波长平均值,nm;λi—激发光波长测量值,nm。C.3不确定度来源与标准不确定度评定根据校准方法,激发光波长测量引入的不确定度主要包括光纤光谱仪波长校准引入的不确定度,激发光波长测量重复性引入的不确定度以及波长测量分辨力引入的不确定度。C.3.1光纤光谱仪波长测量引入的标准不确定度u1,λi光纤光谱仪的校准证书得到波长测量的不确定度为0.5nm,故波长测量引入的不确定度为:u1,λi=0.5/2=0.25(nm)C.3.2激发波长测量重复性引入的标准不确定度u2,λi将光纤光谱仪置于激发光照区域,测量结果见表C.1。表C.1激发光波长的10次测量结果测量次数12345λ/nm367.8367.5368.2367.4367.9测量次数678910λ/nm368.1367.4367.9367.2367.5根据测量结果,测量重复性引入的标准不确定度为:u2,λi=s/3=0.33/3=0.19(nm)C.3.3