G-杆菌检验 - 微生物学检验（医检资源库） 2讲解

2．熟练革兰染色技术的标准化操作3．掌握常见革兰阴性杆菌的鉴定要点1、学会革兰阴性杆菌的形态学鉴定。4.养成严谨仔细、精益求精的工作作风实训物品：菌种：伤寒沙门菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌试剂：革兰染液一套、氧化酶试剂培养基：血平板、MAC、SS平板、普通琼脂平板KIA、尿素培养基、蛋白胨水、枸橼酸盐培养基、半固体培养基、O/F培养基、葡萄糖蛋白胨水、非发酵菌生化鉴定编码管实训内容一、细菌分离培养二、伤寒沙门菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌菌落观察。三、细菌形态学鉴定——染色镜检。四、细菌生化鉴定（一）伤寒沙门菌、肺炎克雷伯杆菌——传统手工法（二）铜绿假单胞菌——微量编码管一、细菌的分离培养沙门：（2个BA、2个SS、2个MAC）/组肺克：（2个BA、2个MAC）/组铜绿：（2个普平、2个BA、2个MAC）/组菌种培养基接种技术培养条件伤寒沙门菌BA、SS、MAC

分区划线

35℃需氧培养18-20小时肺炎克雷伯

BA、MAC铜绿假单胞普平、BA、MAC二、伤寒沙门菌、肺炎克雷伯、铜绿假单胞菌菌落观察观察项目：大小、形态、边缘、表面（光滑、粗糙、粘液型）、透明、颜色、溶血性菌种普平BAMACSS伤寒沙门菌灰白色、不溶血、S型无色、半透明、乳（-）无色、半透明、乳（-）H2S(+)肺炎克雷伯灰白色、不溶血、M型乳（+）M型铜绿假单胞菌金属光泽、边缘呈波浪状的扁平S型；菌落、培养基成绿色灰绿色、有金属光泽、边缘不规则的扁平菌落，有透明溶血环半透明无色菌落三、革兰染色镜检1.操作：每个同学对一个菌种进行革兰染色镜检，2人次/菌种/组2.记录结果：形态、排列、颜色、染色性、特殊结构菌种/观察项目伤寒沙门菌肺炎克雷伯铜绿假单胞菌形态杆状杆状、较短杆状排列散在散在散在颜色红色红色红色染色性G-G-G-四、细菌生化鉴定（一）传统手工法

伤寒沙门菌、肺炎克雷伯菌（二）微量编码管

铜绿假单胞菌（一）伤寒沙门菌、肺炎克雷伯菌生化实验——接种氧化酶

1支/菌/组（试纸法）

生化实验培养基接种方法伤寒沙门菌肺炎克雷伯O/F试验O/F培养基液体接种4支/组4支/组吲哚蛋白胨水2支/组2支/组甲基红葡胨水2支/组2支/组VP葡胨水2支/组2支/组枸橼酸盐利用枸橼酸盐培养基2支/组2支/组脲酶试验尿素培养基2支/组2支/组动力试验半固体培养基穿刺接种2支/组2支/组

KIA试验KIA高层斜面接种2支/组2支/组其中两只加液体石蜡（一）伤寒沙门菌、肺炎克雷伯菌生化实验——结果观察生化实验培养基伤寒沙门菌肺炎克雷伯氧化酶

试验--吲哚蛋白胨水+吲哚试剂--甲基红葡胨水+甲基红试剂+-VP葡胨水+VP+a-萘酚-+枸橼酸盐利用枸橼酸盐培养基-+脲酶试验尿素培养基-+动力试验半固体培养基+-

KIA试验KIAKA-+AA+-O/F试验O/F培养基FF（二）铜绿假单胞菌微量编码管——接种非发酵菌生化鉴定编码管：

方法：穿刺接种

氧化酶（纸片法）OF：2支/菌一支滴石蜡麦芽糖精氨酸双水解（氨基酸对照管）甘露醇分解试验木糖分解硝酸盐还原酶试验DNA酶乙酰胺酶试验枸橼酸盐利用实验

O-F发酵管

4氧化酶

2枸橼酸盐

1麦芽糖

4

精氨酸双水解

2甘露醇

1木糖

4

硝酸盐还原

2DNA酶1乙酰胺试验项目结果+-++-+++-O总值

1655鉴定值：1655查表（二）铜绿假单胞菌微量编码管——结果观察、查表伤寒沙门菌肺炎克雷伯菌落BA：灰白色、不溶血、S型MAC：无色、半透明、乳糖（-）SS：无色、半透明、乳（-）H2S(+)BA：灰白色、不溶血、M型MAC：红色菌落、乳糖（+）、M型镜下G-杆菌，散在排列G-杆菌，较短小、散在排列IMViC-+----++MIU+----+KIAKA

-

+AA

+

-鉴定要点铜绿假单胞菌鉴定要点菌落普平：金属光泽、边缘呈波浪状的扁平S型；菌落、培