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文档简介

第二十三章

免疫细胞及其功能检验技术知识目标1.掌握：单个核细胞和淋巴细胞及其亚群的分离纯化；T细胞及其亚群的表面标志和功能检测方法；B细胞功能检测方法和原理；NK细胞的表面标志。2.熟悉：NK细胞功能的检测方法和原理。3.了解：中性粒细胞、巨噬细胞功能检测方法和原理。能力目标掌握密度梯度离心法分离外周血单个核细胞的操作流程；熟悉FCM和磁珠分离法分离淋巴细胞及其亚群的操作方法。思政-素质目标责任心、质控、生物安全意识、临床免疫学思维教学目标目录免疫细胞的分离与纯化一淋巴细胞数量及功能检测二吞噬细胞功能检测三一、中性粒细胞功能检测趋化功能检测：体内法（也称皮肤窗口法）体外法（滤膜渗透法/

Boyden小室法、琼脂糖平板法）吞噬功能检测：（吞噬金黄色葡萄球菌或白色念珠菌）杀伤功能检测：

溶菌法、硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验吞噬细胞功能检测三体内实验法--皮肤窗口法在受检者前臂屈侧中央3㎜范围内，搔刮皮肤后，用盖玻片压紧固定，在第2，5，8，12，24，36小时各取样一次，染色观察中性粒细胞聚集开始时间、聚集程度等。健康正常人一般2～3小时后开始聚集，达50～100个，6小时可达1000个以上。（一）中性粒细胞趋化功能检测体外法--Boyden小室法Boyden小室体外法--琼脂糖平板法原理及技术要点

在琼脂糖凝胶平板的中孔加白细胞悬液，左孔加趋化因子，右孔加对照液，温育4～8小时后，用显微镜测微器测定中性粒细胞向左孔的移动距离A和向右孔的移动距离B，计算趋化指数。趋化指数越大运动能力越强将细胞悬液与金黄色葡萄球菌或白色念珠菌悬液混合，温育后涂片、固定和染色。在油镜下观察中性粒细胞对细菌的吞噬情况，计数100个细胞中吞噬和未吞噬细菌的中性粒细胞数，并记录吞噬的细菌数。（二）中性粒细胞吞噬功能检测（三）中性粒细胞杀伤功能检测硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验

方法：1.抗凝血+硝基蓝四氮唑（NBT），温育25min；2.推片染色、镜检（含甲臜颗粒的中性粒细胞）。正常值：NBT阳性细胞率应7%~15%二、巨噬细胞功能检测炭粒廓清试验：主要用于动物实验吞噬功能检测：（吞噬鸡红细胞或白假丝酵母等）促凝血活性测定：正常小鼠肝中库普弗细胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10％炭粒。据此给小鼠静脉注射定量印度墨汁（炭粒悬液），间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。主要用于动物实验（一）炭粒廓清试验（二）巨噬细胞吞噬功能检测巨噬细胞鸡红细胞或白假丝酵母＋孵育涂片染色镜检计算吞噬率和吞噬指数小结Ficoll单次密度梯度离心法分离外周血单个核细胞；流式细胞术和磁珠分离法进行细胞分离和数量检测；淋巴细胞增殖试验：常用MTT法和3H-TdR掺入法；细胞功能检测：T细胞（增殖、杀伤、胞内细胞因子等），

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