26.4免疫缺陷病检验技术讲解

第二十六章

免疫缺陷病及检验教学目标1.掌握：

免疫缺陷病的概念、AIDS的免疫学特征及临床特点（重难点）；体液免疫缺陷及细胞免疫缺陷的检测。2.熟悉：AIDS的致病机制（难点）。3.了解：原发性免疫缺陷病的主要特征；吞噬细胞功能及补体系统的检测。知识目标技能目标思政-素质目标熟练进行AIDS检验技术的操作，正确判读HIV抗体的检测结果。责任心、质控及生物安全意识、临床免疫思维目录二原发性免疫缺陷病

三继发性免疫缺陷病四免疫缺陷病的检验技术一免疫缺陷病概述

免疫缺陷病的概念、分类和共同特点。原发性免疫缺陷病的概念及主要特征。继发性免疫缺陷病的概念及常见诱因。获得性免疫缺陷综合征的概念、致病机制、免疫学特征和临床特点。免疫缺陷病的检验技术。本章要点引起IDD的原因及临床表现多种多样，检测方法也具多样性，主要涉及淋巴细胞计数、外周血象检查、细胞免疫、体液免疫、吞噬细胞和补体等方面的检测。四免疫缺陷病的检验技术免疫缺陷病患者淋巴细胞数量正常或低下，吞噬细胞缺陷患者常伴有中性粒细胞数量减少。一、淋巴细胞计数和外周血象检查皮肤试验主要检测T细胞的迟发型超敏反应能力（DTH），如果皮肤试验显示有DTH能力，表明受试者细胞免疫功能是完善的。T细胞功能体外试验通常使用有丝分裂原刺激淋巴细胞的增殖、转化试验来判断T细胞的功能。二、T细胞免疫缺陷病检验（一）T细胞功能检测通常应用CD系统单克隆抗体，使用荧光显微技术或流式细胞术对T细胞总数和亚群进行检测。最常检测的CD标志为CD3、CD4、CD8、CD25等。（二）T细胞数量及亚群检测IgG、IgM和IgA可采用免疫比浊法和单向免疫扩散法。IgD和IgE由于含量甚微，可采用灵敏度较高的RIA和ELISA等技术测定。IgG亚类可用ELISA和免疫电泳法测定。三、B细胞免疫缺陷病检验（一）血清Ig的测定除婴儿和AB型血外，其它人均有1：8（抗A）或1：4（抗B）或更高的天然抗体滴度，这种天然抗体属IgM型。性联无丙种球蛋白血症、重症联合免疫缺陷和选择性IgM缺陷症患者可用此法进行判定。（二）同种血细胞凝集素（IgM）效价测定正常人接种疫苗后5～7天可产生特异性抗体（IgM），若再次免疫会使抗体滴度增高（IgG）。常用的抗原为伤寒菌苗和白喉类毒素，可在注射后2～4周测定抗体的滴度，了解抗体的反应性。（三）特异性抗体产生能力测定正常人包括新生儿，均可在注入噬菌体后5天内将其全部清除。抗体形成缺陷者，清除噬菌体的时间则明显延长。（四）噬菌体试验SmIg是B细胞表面的特征性标志，检测SmIg不但可以反映B细胞的数量，还可以根据SmIg的类别判断B细胞的成熟情况。所有体液免疫缺陷者都有不同程度的B细胞数量或成熟比例方面的异常。（五）B细胞表面膜免疫球蛋白的检测B细胞表面存在着CD10、CD19、CD20、CD22等抗原，这些CD抗原表达在B细胞发育成熟的不同阶段，检测这些B细胞表面标志可以了解B细胞数量、亚型及分化情况。（六）CD抗原检测当成年人外周血中性粒细胞＜1.8×109/L，儿童＜1.5×109/L，婴儿＜1.0×109/L时，若能排除外因的影响，应考虑遗传因素的作用。四、吞噬细胞免疫缺陷病检验（一）中性粒细胞计数包括体内试验与体外试验。体外试验如Boyden小室法和琼脂糖平板法，可用于判断白细胞的趋化功能，对吞噬细胞功能缺陷、家族性白细胞趋化缺陷症等有诊断价值。（二）趋化功能检测将白细胞悬液与一定量的细菌或胶乳粒子温育一定时间后，取样涂片、染色、镜检，根据其吞噬和杀菌情况判断白细胞的功能。慢性肉芽肿病患者由于吞噬细胞缺少过氧化物酶而无法杀菌，故其吞噬率基本正常，但杀菌率显著降低。（三）吞噬和杀伤功能检测是一种简便、敏感的检测吞噬细胞还原杀伤能力的试验。可用于检测儿童慢性肉芽肿病和严重的6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏症。（四）NBT还原试验总补体活性测定单个补体组分的测定五、补体免疫缺陷病检验常用ELISA法检测HIV的核心抗原p24。p24出现于急性感染期和AIDS晚期，其定量检测可作为早期或晚期病毒量的间接指标。在潜伏期，p24检测常为阴性。六、AIDS检验技术（一）HIV抗原检测HIV感染后2～3月可出现抗体，并可持续终身，此为艾滋病的常规检测指标。初筛试验

ELISA法胶乳凝集法胶体金免疫层析法确认试验免疫印迹法

（二）HIV抗体检测

ELISA法检测HIV抗体初筛最基本，最可靠的手段ELISA试剂敏感性和特异性越来越高与抗原检测同时进行

HIV抗体快速检测常用的方法有免疫斑点法、免疫层析法、硒标记法、金标记法和凝集试验等。

HIV抗体确认试验确认试验可使用免疫印迹法、条带免疫法及免疫荧光法。目前以免疫印迹法（WB试验）最为常用。确认试剂必须经国家食品药品监督管理局注册批准。HIV抗体确认试验判断标准HIV抗体阳性至少有两条膜带（gp41/gp120/gp160）或至少一条膜带与p24带同时出现；HIV抗体阴性无HIV抗体特异性条带出现；HIV抗体可疑出现HIV特异性条带，但带型不足以确认阳性者。CD4+T细胞计数是反映HIV感染患者免疫系统损害状态的最明确指标。当CD4+T细胞低于500/μl，则易机会性感染；低于200/μl，则发生AIDS。

（三）T细胞计数小结免疫缺陷病是免疫系统先天发育不全或后天损伤所致的疾病，分为原发性免疫缺陷性疾病和继发性免疫缺陷病两大类。免疫缺陷病主要临床表现有反复感染；高发恶性肿瘤和自身免疫病；有一定遗传倾向。AIDS是最常见的继发性免疫缺陷病。HIV主要侵犯CD4+T细胞以及表达CD4分子的巨噬细