海洋来源的龙须菜硫酸寡糖和Butyrolactone-Ⅰ的抗食物过敏活性研究

海洋来源的龙须菜硫酸寡糖和Butyrolactone-Ⅰ的抗食物过敏活性研究食物过敏性疾病症状严重且多样化,发病率不断攀升,然而至今还未有确切有效的食物过敏根治手段。海洋资源中含有丰富的具有多种生物活性的天然成分,前期研究发现来自浅海区的龙须菜硫酸多糖能够抑制原肌球蛋白诱导的食物过敏反应,但其分子量大且作用浓度较高;深海来源微生物种类繁多,代谢产物结构新颖,拥有多种生物活性,目前关于深海化合物抑制食物过敏作用研究少见报道。因此,以龙须菜和深海微生物为对象,筛选抗食物过敏活性物质,并探索其可能的抗食物过敏反应的作用机制,对于开发抗过敏功能食品及新型抗过敏药物具有重要的意义。本研究利用六种降解方法处理龙须菜硫酸多糖,发现高温压力结合维生素C处理能够将龙须菜硫酸多糖降解成为龙须菜硫酸寡糖（Gracilarialemaneiformissulfatedoligosaccharide,GLSO）,GLSO的平均分子量为2031Da,硫酸根含量为13.03%,粘度为0.002dL/g,还原糖含量是46.52%,主要由二糖、四糖、六糖和八糖四种寡糖组成,含量分别为64.57%、15.74%、9.21%和7.23%。降解得到的GLSO能够抑制大鼠嗜碱性粒细胞（Ratbasophils,RBL）-2H3和小鼠骨髓来源肥大细胞（Bonemarrow-derivedmastcells,BMMCs）的脱颗粒及组胺释放,抑制率显著高于龙须菜硫酸多糖;GLSO能够降低小鼠骨髓来源树突状细胞对卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）的吞噬,并影响其表面CD80的表达。通过OVA诱导的食物过敏小鼠模型发现,100mg/kg的GLSO能够显著缓解食物过敏反应,减弱小鼠肠道炎症,其抑制活性显著高于龙须菜硫酸多糖。GLSO能够影响过敏小鼠肠道菌群的结构及丰度,促使其趋向正常。此外,GLSO能够抑制IgE、组胺、肥大细胞蛋白酶（mousemastcellprotease,mMCP-1）、白细胞介素（interleukin,IL）-4、IL-6、IL-13、以及肿瘤坏死因子-α的水平,对IL-10与转化生长因子-β的产生有显著促进效果。脾脏淋巴细胞检测发现GLSO影响辅助性T（Thelper,TH）细胞和B细胞的数量,抑制TH2细胞的极化。GLSO抗食物过敏的作用机制是通过促进调节性T细胞的分化,抑制效应T细胞的增殖和肥大细胞的激活,发挥免疫抑制作用。本研究利用RBL-2H3细胞脱颗粒模型,从941个海洋微生物来源次级代谢产物中筛选得到12个抑制率大于50%的单体化合物,综合考虑抑制活性及产量因素,选择了其中Butyrolactone-Ⅰ（BTL-Ⅰ）进行抗食物过敏活性探究。BTL-Ⅰ是一种来源于深海真菌Aspergillussp.的丁烯酸内酯类化合物,其分子式是C₂₄H₂₄O₇,相对分子质量为424,能够显著抑制RBL-2H3细胞的脱颗粒,IC₅₀值为8.09μg/mL,也可降低RBL-2H3细胞释放组胺;此外,BTL-Ⅰ也可显著抑制BMMCs的激活。体内食物过敏小鼠模型结果表明,BTL-Ⅰ能够缓解OVA诱导的食物过敏反应症状、降低小鼠腹泻率、引发过敏小鼠体温回升,减弱肠道炎症;BTL-Ⅰ对OVA特异性IgE、组胺及mMCP-1有着明显的抑制作用;能够降低过敏小鼠脾脏和肠系膜淋巴细胞中B细胞及肥大细胞的数量;此外,BTL-Ⅰ能够减弱肥大细胞介导的小鼠被动皮肤过敏反应,影响肥大细胞表面c-KIT的表达。最终明确了BTL-Ⅰ发挥抗食物过敏活性的机制是与抑制性受体FcγRIIB发生相互作用,进而抑制肥大细胞的激活,缓解过敏反应。综上,本研究通过降解龙须菜硫酸多糖得到了低分子量的寡糖混合物,从941个化合物中筛选得到对肥大细胞脱颗粒具有高抑制活性的深海化合物BTL-Ⅰ。通过RBL-2H3和BMMCs模型确定GLSO与BTL-Ⅰ的体外抗过敏活性。利用OVA诱导的食物过敏小鼠模型,验证GLSO及BTL-Ⅰ机体内对食物过敏反应的抑制作用;通过检测过敏相关免疫细胞的增殖情况,发现GLSO在机体内作用的主要靶向细胞是Treg细胞,Treg细胞进一步抑制效应T细胞的增殖和肥大细胞的激活,从而发挥抗食物过敏作用;而BTL-Ⅰ在机体内作用的主要靶向细胞是肥大细胞,通过与抑制性受体