凤眼草和蓬子菜化学成分及生物活性研究

凤眼草和蓬子菜化学成分及生物活性研究1．凤眼草为苦木科臭椿属臭椿（Ailanthusaltissima（Mill）Swingle）的果实，我国南北均有分布。中医认为凤眼草味苦、涩，性凉。用于清热燥湿，止痢，止血。主治痢疾，白浊，带下，便血，尿血，崩漏。本论文对凤眼草的95％乙醇提取物和水提取物进行了研究，利用系统溶剂萃取法、重结晶法、硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、制备性TLC和HPLC等手段分离得到41个化合物。通过理化性质和波谱数据分析鉴定了它们的结构。分别属于甾体类：豆甾烷-3，6-二酮（stigmastane-3，6-dione，1），豆甾烷-3β，6β-二醇（stigmastane-3β，6β-diol，2），豆甾-4-烯-3，6-二酮（stigmast-4-ene-3，6-dione，3），6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮（6β-hydroxystigmast-4-en-3-one，4），6α-羟基-豆甾-4-烯-3-酮（6α-hydroxystigmast-4-en-3-one，5），豆甾-4-烯-3β，6β-二醇（stigmast-4-ene-3β，6β-diol，6），豆甾-4-烯-3β，6α-二醇（stigmast-4-ene-3β，6α-diol，7），豆甾-4-烯-3-酮（stigmast-4-en-3-one，8），β-谷甾醇（β-sitosterol，9），胡萝卜苷（daucosterol，10），3β-羟基-豆甾-5-烯-7-酮（3β-hydroxystigmast-5-en-7-one，11），豆甾-5-烯-3β，7α-二醇（stigmast-5-ene-3β，7α-diol，12），豆甾-5-烯-3β，7α，20ξ-三醇（stigmast-5-ene-3β，7α，20ξ-triol，13），麦角甾-4，6，8（14），22-四烯-3-酮（ergesta-4，6，8（14），22-tetraen-3-one，14），5α，8α-表二氧化麦角甾-6，22-二烯-3β-醇（5α，8α-epidioxyergesta-6，22-dien-3β-ol，15），5α，8α-表二氧化麦角甾-6，9（11），22-三烯-3β-醇（5α，8α-epidioxyergesta-6，9（11），22-trien-3β-ol，16）。三萜类：9，19-环阿尔廷-23（Z）-烯-3β，25-二醇（9，19-cyclolanost-23（Z）-ene-3β，25-diol，17），环阿尔廷-25-烯-3β，24ξ-二醇（cycloart-25-ene-3β，24ξ-diol，18/19），2β，20（S）-二羟基-达玛烷-24-烯-3-酮（2β，20（S）-dihydroxydammar-24-en-3-one，20），β-香树脂醇（β-amyin，21），齐敦果烷-9（11），12-二烯-3β-醇（olean-9（11），12-dien-3β-ol，22），异齐敦果烷-14-烯-3-酮（D-friedoolean-14-en-3-one，23），熊果酸（ursolicacid，24），22-羟基-何伯烷-3-酮（22-hydroxyhopan-3-one，25），臭椿苦酮A（11β，20-epoxy-1β，2α，12α-pentahydroxypicrasa-3，13（21）-dien-16-one，26）。神经鞘苷类：1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（2S，3R，4E，9E）-2-（2′R-羟基十六烷酰胺基）-4，9-二烯十八烷-1，3-二醇（1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3R，4E，9E）-2-（2′R-hydroxyhexadecenoylamino）-4，9-octadecadiene-1，3-diol，27）。黄酮类：山柰酚（kaempferol，32），槲皮素（quercetin，33），槲皮素3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（quercetin3-O-β-D-glucopyranoside，34），山柰酚3，7-O-二α-L-吡喃鼠李糖苷（kaempferol3，7-O-bis-α-L-rhamnopyranoside，35），3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-山柰酚7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（3-O-α-L-arabinofuranosylkaempferol7-O-α-L-rhamnopyranoside，36）。木脂素类：（+）-异落叶松树脂醇[（+）-isolariciresinol，40]，（+）-异落叶松树脂醇9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷[（+）-isolariciresinol9-O-β-D-glucopyranoside，41]。酚酸类：香草醛（vanillin，37），没食子酸（gallicacid，38），七叶内酯（6，7-dihydroxycoumarin，39）。其他类：正三十四烷（n-tetratriacontane，28），卫矛醇（L-evonymitol，29），甘露醇（D-mannitol，30），山梨醇（D-sorbitol，31）。其中，化合物27为未见文献报道的新化合物；化合物2为新天然产物；化合物1-8，11-25，28-31，34-41均是首次从该属分离得到。化合物10，26，32，33均是首次从凤眼草中分离得到。本文利用文献，从结构类型、植物分布、生物活性、生合成途径及人工合成方法、结构研究方法等方面对苦味苦素类化合物的研究进展进行了综述。2．蓬子菜为茜草科拉拉藤属（Galium）植物药用全草，我国南北均有分布。中医认为蓬子菜味微辛、苦，性微寒。用于清热解毒、活血通经、祛风止痒。主治肝炎、腹水、咽喉肿痛、疮疔肿毒、妇女闭经、带下、荨麻疹。本论文对蓬子菜的95％乙醇回流提取物进行研究，利用系统溶剂萃取法、硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、制备性TLC和HPLC等手段分离得到34个化合物。通过理化性质和波谱数据分析鉴定了他们的结构。分别属于黄酮类：异鼠李素（isorhamnetin，1），异鼠李素3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1-6）-β-D-吡喃葡萄苷（isorhamnetin3-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1-6）-β-D-glucopyranoside，2），香叶木素（diosmetin，3），香叶木素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（diosmetin7-O-β-D-glucopyranoside，4），香叶木素7-O-β-D-吡喃木糖基-（1-6）-β-D-吡喃葡萄糖苷（diosmetin7-O-β-D-xylopyranosyl-（1-6）-β-D-glucopyranoside，5），香叶木素7-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1-2）[β-D-吡喃木糖基-（1-6）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（diosmetin7-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1-2）-[β-D-xylopyranosyl-（1-6）]-β-D-glucopyranoside，6），山柰酚（kaempferol，7），槲皮素（quercetin，8），3，5，7，3′，4′，3″，5″，7″，3′″，4′″-十羟基-[8-亚甲基-8″]-双黄酮（3，5，7，3′，4′，3″，5″，7″，3′″，4′″-decahydroxyl-[8-CH₂-8″]-biflavone，9）。蒽醌类：2，5-二羟基-1，3-二甲氧基-蒽醌（2，5-dihydroxy-1，3-dimethoxy-anthra-quinone，10），2-羟基-1，3-二甲氧基-蒽醌（2-hydroxy-1，3-dimethoxy-anthraquinone，11），大黄素甲醚（physcione，12），1，3-二羟基-2-甲基-蒽醌（1，3-dihydroxy-2-methyl-anth-raquinone，13），2，8-二羟基-1-甲氧基-蒽醌（2，8-dihydroxy-1-methoxy-anthraquinone，14），1-羟基-2-羟甲基-3-甲氧基-蒽醌（1-hydroxy-2-hydroxymethy-3-methoxy-anthraquinine，15）。木脂素类：（+）-松脂素4，4′-O-二β-D-吡喃葡萄苷[（+）-pinoresinol4，4′-O-bis-β-D-glucopyranoside，16]，（+）-表松脂素[（+）-epipinoresinol，17]，松脂素【（+）-medioresinol，18]。环烯醚萜类：morindolide（19），水晶兰苷（monotropein，20），去乙酰车叶草甙酸（deacetyl-asperulosidicacid，21），6α-羟基-京尼平苷（6α-hydroxygeniposide，22），车叶草甙（deacetyl-asperuloside，23）。三萜类：熊果酸（ursolicacid，29），rubifolicacid（30），熊果醛（ursolicaldehyde，31）。酚酸类：东莨菪素（scopoletin，24），阿魏酸（ferulicacid，25），phthalicacidbis-（2-ethyl-hexyl）ester（26），对羟基-苯丙酸（p-hydroxy-phenylpropionicacid，27），香豆酸三十二酯（trans-dotriacontyl-coumarate，28）。其它类：正三十二烷醇（n-dotriacontanol，32），β-谷甾醇（β-sitosterol，33），胡萝卜苷（daucosterol，34）。其中，化合物6，9，10为未见文献报道的新化合物；化合物1，2，11，14-19，23，25-32为首次从该属分离得到。化合物12，24为首次从蓬子菜中分离得到。本论文以E．coli，S．aureus，P．aeruginosa和S．typhiuriun为受试菌，采用琼脂扩散纸片法对凤眼草和蓬子菜抗菌活性成分进行追踪，测定凤眼草水提大孔树脂洗脱物、95％乙醇提取物乙酸乙酯萃取部分和正丁醇萃取部分均有不同程度的抗菌活性，有效成分的分离鉴定表明，黄酮类化合物和木脂素类物质是主要的抗菌活性物质。蓬子菜的95％乙醇回流提取液的正丁醇层具有抗菌作用，所得单体化合物中，黄酮类化合物活性最强，部分蒽醌、环烯醚萜和木脂素类化合物具有较好的抗菌活性。利用二倍稀释法测定抗菌活性化合物的最小抑菌浓度（MIC）。借助超氧化歧化酶（SOD）测试盒，对2