庆大霉素鼓室给药进入内耳的途径及对内耳功能影响的研究

庆大霉素鼓室给药进入内耳的途径及对内耳功能影响的研究第一部分庆大霉素-德克萨斯红局部给药后内耳药代动力学的研究目的：鼓室内局部给药(GTTR)后通过水平半规管外淋巴液采样了解药物在外淋巴液中的药代动力学变化,探究GTTR进入内耳的途径。方法：成年豚鼠中耳内给予50u1不同溶剂配制的GTTRt(0.2mg/ml)溶液,一小时后外半规管造瘘,从瘘口连续采集外淋巴液；检测不同样本光密度来计算药物浓度,观察药物代谢情况,并通过模型模拟内耳淋巴液流动的生理过程比较药物进入途径,并观察不同试剂对药物浓度的影响。结果：1)中耳局部给药后药物可通过圆窗膜和卵圆窗即镫骨区进入内耳,59.8%的GTTR通过圆窗膜渗透进入,而从镫骨区直接到达内耳的占40.2%。2)二甲基亚砜(DMSO)和苯甲醇(Benzyl)均使更多的药物进入内耳,提高了内耳药物浓度。DMSO组圆窗进入占56.0%,镫骨区44.0%；Benzyl组89.4%药物通过圆窗径路,镫骨区10.6%。结论：1)圆窗膜、镫骨区均为药物进入内耳的途径,其中圆窗膜为主要途径；2)不同药物进入途径有差别,具有药物选择性,且通透性受不同药物的影响很大。对于GTTR圆窗进入占59.8%,镫骨区为40.2%。二甲基亚砜对圆窗膜和镫骨区均有影响,对镫骨区的影响更大,而苯甲醇对圆窗膜渗透性影响更大。第二部分庆大霉素-德克萨斯红圆窗或卵圆窗给药后在内耳分布的的研究目的：通过圆窗、卵圆窗分别给药,观察GTTR在内耳不同器官的分布,探究药物进入内耳的途径。方法：成年豚鼠耳后入路,分别在圆窗、镫骨区给予浸有4ulGTTR(0.4mg/ml)的胶原海绵,给药后7天处死,多聚甲醛蜗尖灌注固定、取材,行免疫荧光染色(AlexaFluor(?)488Phalloidin标记毛细胞,DAPI标记细胞核),了解GTTR的在内耳不同部位的分布情况；激光共聚焦荧光显微镜观察并采集图像,AdobephotoshopCS5处理图片,ImageJ软件对共聚焦显微镜图像进行荧光半定量分析,SPSS19.0进行统计分析。结果：圆窗组及卵圆窗组GTTR在球囊斑的聚集均最高。圆窗组中基底膜底圈毛细胞中GTTR荧光强度高于椭圆囊斑和壶腹嵴；而卵圆窗组中壶腹嵴GTTR的分布要多于基底膜和椭圆囊。通过荧光半定量分析各器官整体铺片中GTTR荧光强度,圆窗组各终末器官中的GTTR分布均高于卵圆窗组。结论：GTTR在圆窗或卵圆窗局部给药后,在内耳终末器官的分布存在差异性。两种给药方式在内耳各终末器官均有分布,且圆窗组药物进入多于卵圆窗组。GTTR在球囊斑的聚集最高。第三部分庆大霉素圆窗或卵圆窗给药后在耳蜗的分布及对听力影响的研究目的：探索庆大霉素鼓室给药后进入内耳的途径,比较圆窗、卵圆窗(镫骨区)分别给药对听力的影响,指导临床用药。方法：成年豚鼠术前行ABR测试后耳后入路暴露圆窗、镫骨区,分别在圆窗、镫骨区给予浸有4u1庆大霉素((GT)(30mg/ml)的胶原海绵,给药后1天、7天分别行ABR测试,并在7天后处死,多聚甲醛蜗尖灌注固定、取材,行免疫荧光染色(anti-gentamicin标记庆大霉素,AlexaFluor(?)488Phalloidin标记毛细胞,DAPI标记细胞核),了解庆大霉素的在耳蜗的分布情况；激光共聚焦荧光显微镜观察并拍照,AdobephotoshopCS5处理图片,ImageJ软件测对共聚焦显微镜图像进行荧光半定量分析,SPSS19.0进行统计分析。结果：1庆大霉素圆窗、卵圆窗局部给药后7天,圆窗组8kHz-32kHz阂值均不同程度地升高,以高频听力损失较为显著,与术前相比差异有统计学意义。卵圆窗组听力在8kHz-32kHz基本无改变,32kHz出现听力出现损失,与术前相比差异不显著。圆窗组较卵圆窗组相比听力损失较为严重,8kHz两组无统计学差异,16kHz,24kHz,32kHz两组有显著性差异(P<0.01)。2)GT局部给药7天后圆窗组及卵圆窗组在耳蜗基底膜均有分布,主要分布在外毛细胞,底圈分布多于中圈,且可见毛细胞的缺失。结论：1)庆大霉素圆窗给药对听力的影响较镫骨区给药显著,以高频听力损失为主；2)药物进入内耳后对耳蜗毛细胞毒性作用受药物浓度影响。第四部分小剂量庆大霉素鼓室内注射治疗难治性眩晕对听力及球囊功能影响的临床研究目的：从动物实验和临床研究两方面探究庆大霉素局部给药后对听力和前庭功能的影响,指导临床用药。方法：回顾性分析我科2012年5月-2013年5月年行显微镜下鼓室内注射庆大霉素(30mg/m1)治疗的17例单侧难治性眩晕患者,于术前及术后3周分别行纯音测听检查及cVEMP检查。比较术前术后患者听力及cVEMP结果。结果：17例难治性眩晕患者随访12个月-24个月,术后随访至今未诉眩晕复发。2例迟发型膜迷路积水患者患侧耳全聋,15例梅尼埃病患者中术前患耳平均气导听阈为63.8dBHL,术后患侧耳平均气导为64.4dBHL,手术前后听力差异无统计学意义(P>0.05)。cVEMP检查结果,2例术前VEMP未引出,15例术前VEMP患侧平均阈值为(82.5±5.59)dBnHL,P1平均潜伏期为(16.64±2.38)ms。术后7例(41.2%)VEMP未引出,其他10例VEMP患侧平均阈值为(89±4.90)dBnHL,P1平均潜伏期为(18.52±1.62)ms。可