版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
利用CRISPR/Cas9基因编辑技术定向改良水稻稻瘟病抗性水稻作为世界上食用人口最多的农作物,其产量每年都会因稻瘟病的流行而减产。目前,控制稻瘟病爆发的有效策略就是使用抗性品种。近年来,CRISPR/Cas9基因编辑技术的诞生解决了传统育种过程中育种年限及连锁累赘等问题,为作物遗传改良提供了新的育种平台。本研究利用CRISPR/Cas9系统对水稻Pita,Pi21和ERF922稻瘟病相关基因进行定点编辑,以期获得能够稳定遗传的抗抗稻瘟病水稻材料。本研究主要结果如下:1.Pi21基因是在隐性状态下发挥对稻瘟病菌的抗性,而ERF922则负调控稻瘟病菌的抗性,Pita对稻瘟病的抗感差异是由于第918位氨基酸位点的变化而引起。我们选择3个基因的第一外显子靠近ATG附近的序列作为靶序列构建共编辑载体pC1300-2×35S::Cas9-g<sup>Pita</sup>-g<sup>Pi21</sup>-g<sup>ERF922</sup>,用农杆菌转化长粒粳稻恢复系L1014。在T<sub>0</sub>代转基因阳性株中,Pita,Pi21和ERF922三个基因发生突变的频率分别为75%,85%和75%,Pita发生突变的基因型多为双等位突变(47.1%),其次,纯合基因型的频率为41.2%,无杂合基因型的出现,但有2株阳性苗在Pita靶点处未发生突变(11.7%),在基因突变类型中有73.5%是碱基的插入,14.7%为碱基的缺失,有11.8%的频率是碱基未发生改变;Pi21突变基因型的情况与Pita类似,双等位突变频率为58.8%,其次纯合基因型频率为35.3%,而杂合基因型频率为5.9%,但基因突变类型以碱基缺失为主,频率高达85.3%,另外,有8.8%、2.9%和2.9%分别为碱基插入、替换和无突变的类型;ERF922的突变类型较为丰富,包括碱基的插入、缺失、替换及替换缺失同时发生这四种类型,其中碱基缺失频率最大(50%)。通过农杆菌将Pita、Pi21和ERF922三基因共转化长粒粳稻恢复系L1014,随着Pi21和ERF922的突变Pita往往也发生突变,三基因的诱导事件趋向于同时发生突变,因此,该转化实验中只出现Pi21的单突基因型和Pita、Pi21和ERF922的三突基因型。通过对T<sub>1</sub>代分离群体的筛选,得到了2种Pi21单基因突变和1种PitaPi21和ERF922三基因突变不含T-DNA成分的纯合突变株系,并以此分别构建3个T<sub>2</sub>代纯合突变系群体(D2101、D2102和D0301)。2.对三种纯合突变株系的苗期进行稻瘟菌接种鉴定,并在接种后0h、12h、24h分别取样。结果表明,纯合突变株系的抗性相比于野生有显著的提高。对接种后的纯合株系和野生型的防卫相关基因的表达量进行分析,相较于野生型,突变株系增强了水杨酸,茉莉酸和乙烯的信号转导途径相关基因的表达,因此,我们推测这些防御相关基因的高表达增强了突变株系对稻瘟病的抗性。同时对纯合突变株系的主要农艺性状进行考察,其株高、剑叶长、剑叶宽、穗长、有效穗数、每穗粒数、结实率及千粒重与野生型
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 合集根鸟读后感9篇
- 消防燃烧学 第2版 和丽秋 习题及答案 第3-5章 可燃气体的燃烧-可燃固体燃烧
- 2024届天津市南开区南开中学高三第四次模拟考试语文试卷含解析
- 房屋建筑学(第3版)课件 第3章装配式建筑
- 2024年江苏省南京市程桥高级中学高考考前模拟语文试题含解析
- 2024-转让琴行合同范本
- 上海市12校2024年高考冲刺押题(最后一卷)语文试卷含解析
- 浙江省鄞州区余姚市2023-2024学年高三第六次模拟考试语文试卷含解析
- 筋瘤病人的护理查房课件
- 火锅店确定目标客户类型分析
- 精神病人监护人协议书
- 血透中心PDCA质量改进项目记录表
- 17.第8课第一框课件《科学立法、严格执法、公正司法、全民守法》
- 合伙薪资分配方案
- 计划财务部岗位轮换制度内部审计制度医院价格管理制度三甲医院管理制度
- 统编高中语文教材使用建议
- 行为经济学练习及答案
- 基于DSP的数字逆变电源的设计(毕业设计)
- 高中班主任带班育人方略【6篇】
- 2023年云南省临沧社区(村)基层治理专干招聘考试预测卷(含答案)
- 核泄露事故应急处理
评论
0/150
提交评论