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红景天苷抑制小鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞增殖的研究的中期报告中期报告：研究背景：红景天（Rhodiolarosea）是一种自然草药，具有多种药物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗疲劳等作用。红景天苷是其主要化学成分，被认为是红景天中引起多种药理作用的重要成分之一。已有文献报道红景天苷具有抑制肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖并减少肺动脉高压的作用，但其作用机制尚不明确。研究目的：本研究旨在探讨红景天苷对低氧性PASMCs增殖的影响及其可能的作用机制，为红景天苷在肺动脉高压的治疗研究提供新思路。研究方法：1.药物和试剂：红景天苷（纯度：98%）购自某化学试剂公司。其它试剂包括：3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazoliumbromide（MTT）；乙酰胆碱酯酶（AChE）；胡萝卜素；哌嗪（PMA）；硫酸锌；人血浆纤维蛋白原（Fg）等。2.细胞培养及处理：2.1低氧诱导去氧核糖核酸/HIF-1α通路激活PASMCs模型的构建：PASMCs获自新生大鼠；细胞培养基包括DMEM、10%FBS和1%P/S；细胞在5%CO2环境下于37℃培养；低氧处理条件为：细胞在一个依据合适浓度的硫酸锌水溶液经至少1h的处理后，再在3%气体（93%N2、4%CO2和3%O2）环境中培养24h。2.2红景天苷的处理：在低氧环境下，细胞分为：对照组（细胞培养基中不添加红景天苷），低浓度组（添加5μmol/L红景天苷），高浓度组（添加10μmol/L红景天苷）。2.3细胞增殖实验：2.3.1细胞计数法：细胞培养后，将各组细胞提取并计数。2.3.2MTT实验：将MTT试剂加入各组细胞，并在37℃下孵育4h，加入DMSO后在492nm的波长下读取吸光度，用于分析细胞增殖程度。2.4分子生物学实验：2.4.1蛋白质表达：用Westernblotting分析下列蛋白质的表达：cyclinD1、p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3等。2.4.2mPNA原位杂交（ISH）实验：mPNAISH检测细胞凋亡率。2.5统计分析：用SPSS17.0软件进行实验数据处理，采用方差分析及双边t检验分析数据差异的显著性。研究进展：1.已完成红景天苷的纯化与鉴定，以及各试剂的购进及处理方法优化。2.已成功构建低氧处理PASMCs细胞模型。3.MTT实验发现，低氧处理可促进PASMCs增殖，但红景天苷处理可抑制低氧诱导的PASMCs增殖，并具有剂量依赖性。4.Westernblotting结果显示，在低氧环境下，红景天苷可抑制cyclinD1及Bcl-2等增殖相关的蛋白质的表达，同时提高p53、Bax及Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达，说明红景天苷可能通过调节增殖相关蛋白的表达及促进细胞凋亡的方式来抑制PASMCs增殖

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