34单元八 微生物的常规检验技术 项目一 微生物的常规检验技术（四、乳酸菌的检验）

微生物学基础单元十一微生物的常规检验技术

１乳酸菌检验的意义四、乳酸菌的检验

项目一微生物的常规检验技术乳酸菌检验的意义：乳酸菌不是分类学名词，是指能够利用发酵性糖类产生大量乳酸的细菌的统称。乳酸菌因具有重要的生理功能、有助于人体健康而应用广泛。因而有些国家将活性发酵乳制品中乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和检测质量的依据。乳杆菌双歧杆菌链球菌

２乳酸菌检验的目的要求、基本原理四、乳酸菌的检验

目的要求：

✔学习并掌握乳酸菌的检验技术；

✔了解乳酸菌的鉴定方法；基本原理：

✔乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸,需氧和兼性厌氧,多数无动力,过氧化氢酶阴性,革兰阳性的无芽孢杆菌和球菌。此方法中乳酸菌主要为乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属。

✔乳酸菌菌落数指检样在一定条件下培养后,所得1g或1mL检样中所含乳酸菌菌落的总数；

３实训用品四、乳酸菌的检验

培养基和试剂：MRS培养基、莫匹罗星锂盐改良MRS培养基、MC培养基（ModifiedChalmers培养基)、革兰染色液、莫匹罗星锂盐（化学纯)；

仪器和材料：恒温培养箱（36℃±1℃)、冰箱（2~5℃)、恒温水浴箱(46℃±1℃)、天平(感量为0.1g)、均质器、振荡器、吸管（1mL和10mL)、锥形瓶(容量250mL、500mL)、培养皿(直径90mm)、试管（18mm×180mm、15mm×100mm)。

４检验程序四、乳酸菌的检验

５操作步骤--样品制备四、乳酸菌的检验

样品制备无菌操作程序：第一步：冷冻样品

可先使其在2~5℃条件下解冻，时间不超过18h,也可在温度不超过45℃的条件下解冻，解冻时间不超过15min；第二步：固体和半固体食品

以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的无菌均质杯内，8000~10000r/min均质1~2min，制成1:10样品匀液；第三步：液体样品

应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇,制成1:10的样品匀液；第四步：用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液；第五步：另取1mL无菌吸管，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液,每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管。

５操作步骤--培养四、乳酸菌的检验

乳酸菌培养：根据待检样品活菌总数的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度，每个稀释度

吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板，用L形棒进行表面涂布。36℃±1℃，

厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在15min内

完成；双歧杆菌培养:根据待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度，每个稀

释度吸取0.1mL样品匀液于莫匹罗星锂盐改良MRS琼脂平板，表面涂布，每稀释度做

两个平板。36℃±1℃，厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释

到平板涂布要求在15min内完成；嗜热链球菌培养:根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度,每

个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MC琼脂平板，表面涂布。36℃±1℃,需氧

培养48h±2h后计数。嗜热链球菌在MC琼脂平板上的菌落特征为:菌落中等偏小,边缘

整齐光滑的红色菌落，直径2mm±1mm、菌落背面为粉红色。从样品稀释到平板涂布

要求在15min内完成；

5操作步骤--菌落计数与计算四、乳酸菌的检验

乳酸菌菌落计数方法同实验“细菌总数的测定”；乳酸菌菌落总数的计算方法同实验“细菌总数的测定”；乳酸菌菌落总数的报告原则同实验“细菌总数的测定”；

6结果与报告四、乳酸菌的检验

将各稀释度的乳酸菌总数、双歧杆菌数、嗜热链球菌数填入下表中；培养皿号乳酸菌总数双歧杆菌数嗜热链球菌数稀释度稀释度稀释度培养皿1培养皿2平均数

结果报告：该样品的乳酸菌总数是_______________cfu/g(mL);双歧杆菌数是_______________cfu/g(mL);嗜热链球菌数是_______________cfu/g(mL);

7注意事项四、乳酸菌的检验

注意事项：乳酸菌检验时，如果是冷冻样品，可