【生物】微生物的培养技术及应用课件 2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第一节体液调节是通过化学信号实现的调节第二节神经系统通过下丘脑控制内分泌系统第二节神经系统通过下丘脑控制内分泌系统第二节

纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化1.接种方法接种：微生物进入培养基质的过程。自然接种：牛奶暴露在空气中，会由于微生物落入、生长、繁殖而变质。人为接种：挑取目标微生物的纯种将其转移到液体培养基中培养，或在培养基斜面连续划线用于保存菌种（接种环）。单菌落：在固体培养基上通过接种、培养获得的由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团。2.单菌落分离意义：单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一.单菌落分离或接种的方法：通过平板划线法和稀释涂布平板法等方法获得单菌落3．平板划线法：（1）原理：接种环划线的过程中，菌液被逐渐稀释，最终出现单个细菌，培养后形成单菌落。(2)方法：通常用___________蘸取液体培养物或挑取固体表面的微生物后，在固体培养基表面进行连续平行划线、______________或其他形式的划线，以实现接种的目的。

(3)划线方式的比较扇形划线接种环①②③④⑤平板划线法的过程⑥平板划线法平板划线法第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌12345多次平行划线思考：若完成图示操作，共做了五次划线，接种环灼烧灭菌了几次？连续划线法

1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？思考：

操作的第一步灼烧接种环：是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环：是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后仍灼烧接种环：能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。1.微生物接种的方法很多,平板划线法是常用的一种。下图是平板划线示意图,划线的顺序为①②③④。下列相关叙述错误的是(

)A.划线操作时,将蘸有菌种的接种环插入培养基B.平板划线后,培养微生物时要倒置培养C.不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连D.在第②~④区域中划线前都要对接种环进行灭菌A划线时不能将接种环插入培养基,而是在培养基表面划线2：在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种

（甲）、培养结果（乙）如图所示。

有关叙述错误的是

（

）Ａ．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌Ｂ．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落Ｃ．接种过程中至少需要对接种环灼烧

５

次Ｄ．甲中

ａ

区域为划线的起始位置3．下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是

（

）Ａ．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染Ｂ．单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法Ｃ．培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌Ｄ．倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落DC4。要筛选得到纯

净的菌种，通常在固体培养基上划线分离，下列操作正确的是（

）Ａ．每次划线时，接种环都需蘸菌液一次Ｂ．划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种Ｃ．在超净台中接种时要在酒精灯火焰旁进行Ｄ．划线分离后将培养皿正放在恒温培养箱中培养c5.若实验室为分离纯化优良菌种进

行如下操作，排序最合理的是

（

）Ａ．②①④③Ｂ．②①④①③②Ｃ．②①④②③②Ｄ．①④①③②B4．稀释涂布平板法接种时，通常需要先将菌液进行_____________，并在培养皿侧面或底面做好标记后，将稀释度不同的菌液各取0.1mL，（移液管或枪）加在固体培养基表面，然后用___________将菌液均匀地涂布在培养基表面上进行培养。这样在稀释度适当的固体培养基表面也能得到单个细胞生长繁殖成的单菌落。根据菌落的形状，大小、颜色、边缘或表面光滑与否等特征可以选取目标微生物继续培养。梯度稀释涂布器a.原理：用无菌水将菌液进行一系列的梯度稀释，在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的单菌落。分离、计数微生物——稀释涂布平板法无法计数1591720无法计数1411310无法计数15011319ml无菌水加入0.1ml稀释液（移液管）例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？（159+141+150）÷3×10×105=1.5×108个/g③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。⑦待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，30-37℃恒温培养1-2天，可观察到单菌落。稀释涂布平板法的操作过程微量移液器稀释涂布平板法涂布分离：单菌落更易分开，可用于计数，但操作复杂。划线分离：方法简单，但单菌落较难分开，不能计数。1.图甲、图乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：（１）图甲是利用

法进行微生物接种，图乙是利用

法进行微生物接种。（２）这两种方法所用的接种工具分别是

和

；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是灼烧和酒精消毒。（３）下图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是

（填“图甲”或“图乙”）。（4）下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是（

）

。Ａ．利用图乙所示接种法可以分离微生物但不能对微生物进行计数Ｂ．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落Ｃ．以尿素为唯一氮源的培养基可分离出能利用尿素的细菌Ｄ．图乙所示接种法中使用的接种工具须保存在

７5％的酒精中平板划线分离稀释涂布平板接种环涂布器图乙A思考回答1、如何从混杂的微生物中获得纯种？2、具体的方法的原理、操作过程、注意事项。1．目的要求(1)用平板划线法或____________________接种酵母菌。(2)用_________培养基大量扩增酵母菌。2．方法步骤(1)制作平板：对两个直径为90mm的培养皿进行_________，分别向其中倒入未凝固的固体培养基，使培养基铺满培养皿底部，厚度约2mm。标记：班级、姓名、日期、接种稀释度、LB或尿素。稀释涂布平板法液体标记二、活动：接种、培养并分离酵母菌(3)将菌种接种到液体培养基中。在无菌条件下用接种环将菌液接种到液体培养基中，同时以不接种菌液的液体培养基作为对照。(4)培养。将所有培养容器置于______℃恒温培养箱下培养24h。(5)观察培养结果。获得__________后，可挑取菌落，并利用平板划线法接种至斜面培养基中。25单菌落(2)接种方法：平板划线法接种：稀释涂布平板法接种分离酵母菌二、采用稀释涂布平板法和显微镜计数法可测定微生物的数量1.稀释涂布平板法可对微生物进行计数(2)原则：在保证能准确计数的前提下，减小稀释度。在实际操作中，适于计算的平板上菌落数的数目通常为30到300。统计的菌落数往往比活菌的实际数目要少，因为当两个或多个细胞，连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。(3)计数要求：在同一稀释度下涂布3个(或3个以上)平板，取平均值。(4)公式：每毫升菌液中微生物细胞的数量＝某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数。（1）原理：当样品稀释度足够高时,平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时,通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。分离、计数微生物——稀释涂布平板法无法计数1591720无法计数1411310无法计数15011319ml无菌水加入0.1ml稀释液（移液管）例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？（159+141+150）÷3×10×105=1.5×108个/g(1)原理：利用特定_________________，在显微镜下计算一定体积的样品中微生物的数量。(2)方法：用血细胞计数板计数（显微镜计数法）。(3)显微镜下观察：血细胞计数板2.显微镜计数法可直接对菌液中的微生物进行计数1.每个血细胞计数板的正中央有2个计数区（图上红圈内），任选一个区。每个计数区分9个大方格，中央为红细胞计数区，4个角为白细胞计数区。认识血细胞计数板:2.中间的红细胞计数区共25个中方格（蓝色圈内），每个中方格又分为16个小方格，小方格共400个小方格（黑点）。上下玻璃片间距0.1mm1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3上下玻璃片间距0.1mm盖玻片认识血细胞计数板:①大方格：_____个。长、宽各1mm。1个大方格液体体积＝1mm2×0.1mm＝0.1mm3。计数区正中间的大方格为___________计数区。四角的四个大方格是_________计数区。②中方格：红细胞计数区又用双线分成______(或16)个中方格。③小方格：每个中方格再用单线划分为______(或25)个小方格。红细胞白细胞25169血细胞计数板的使用某中菌体的培养液充分混匀，取液滴加菌液要避免菌液滴到盖玻片上并防止______________，以免影响计数结果。先盖盖玻片再滴加菌液，让菌液自行渗入产生气泡②对有25个中方格的红细胞计数区可采用______________对酵母细胞进行计数。③在计数每一小方格中的细胞数时，为了避免重复计数压在小方格边缘线上细胞的数目，应_______________________________________________。④为了保证结果的可信度，消除误差，应对同一红细胞计数区中的细胞数进行_____次计数后取平均值，再按比例进行换算“五点取样”“数上不数下”“数左不数右”3计数1个小方格一个中格12个1mm2×0.1mm=0.1mm3上下玻璃片间距0.1mmM/80×400×10×10001dm=10cm=102mm1升(dm3)=103毫升（cm3）=106微升（mm3）盖玻片计数后，数值计算:“五点取样法”要求我们一个计数_____个中方格，______个小方格，12个菌体580若80个个小方格中细菌共计M个，该培养液中细菌浓度是________个/ml影响实验结果的误差分析及改进办法

例10：回答下列相关问题。（1）用血细胞计数板对酵母菌计数时，吸取培养液前要轻轻振荡几次试管的目的是_________________________________。（2）若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多,难以计数,应先_______后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有________个。计数微生物——显微镜计数法使酵母菌分布均匀，计数准确稀释2×108

（1）稀释涂布平板法：

同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求平均值。统计菌落数比活菌实际数目少：因为当两个或多个细胞连在一起时，

平板上观察到的只是一个菌落。

（2）显微镜直接计数：

利用特定的细菌计数板或血细胞计数板在显微镜下观察、计数，然后计算。统计结果一般比活菌数目大：统计结果为活菌数和死菌数的总和。小思考：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法有什么缺点吗？调整培养基配方和培养方式可有目的地培养某种微生物一、不同微生物具有不同的代谢特点调整培养基配方和培养方式可有目的地培养某种微生物1.不同自然环境中生活着的微生物代谢类型不尽相同。自养型微生物(蓝细菌和藻类或者硝化细菌)异养型微生物(大多数细菌、真菌和原生动物)需氧型微生物(醋酸杆菌)；厌氧型微生物(乳酸菌)兼性厌氧型微生物(酵母菌)固氮菌(以氮气作为氮源)；非固氮菌(大多数微生物不能以氮气作为氮源)常规微生物与营养(某种氨基酸)依赖型微生物2.许多微生物的代谢方式并不唯一。3.培养基中营养物质的浓度及比例都会影响微生物的生长。紫色非硫细菌光照,无氧条件：CO2作为碳源；黑暗,有氧：利用有机物生长提高微生物环境生存能力①蔗糖浓度②培养基C/N比及N/P比二、选择培养基在培养基中添加（或减去）某种化学成分，使得只有某些特定的微生物能够生长，其它微生物均不能生长，这样的培养基称为选择培养基。添加青霉素的培养基(筛选抗青霉素的超级细菌)无氮培养基(筛选固氮菌)以淀粉为唯一碳源的培养基(筛选淀粉分解菌)以尿素为唯一氮源的培养基？(筛选尿素分解菌)三、能分解尿素的微生物的分离与计数1、实验原理当培养基中只有尿素作为氮源时，只有能分泌_________的微生物才能在该培养基中生长。脲酶尿素中性碱性氨酚红指示剂颜色:(酸性：黄色；碱性：红色)2、实验目的要求尿素培