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课题2多聚酶链式反应(PCR)扩增DNA片段1/15温故知新1组成DNA分子基本单位是什么?这些基本单位是怎样连接成DNA分子?DNA分子结构有什么特点?2/15脱氧核苷酸脱氧核苷磷酸脱氧核糖含氮碱基嘌呤嘧啶腺嘌呤(A)鸟嘌呤(G)胞嘧啶(C)胸腺嘧啶(T)3/15123454/15碱基OHOOPOHOOHOOPOHO碱基OHOH5/15OOPOHO碱基OOHOOPOHOOH碱基碱基脱氧核糖磷酸基团碱基脱氧核糖碱基脱氧核糖5’3’脱氧核苷酸链结构简图磷酸二酯键6/155’5’3’3’7/15DNA分子复制需要哪些条件?DNA分子复制过程是怎样?温故知新28/15DNA母链:提供复制模板解旋酶:打开DNA双链4种脱氧核苷酸:合成子链原料DNA聚合酶:催化合成DNA子链ATP:为复制过程提供能量引物:使DNA聚合酶从引物3′端开始连接脱氧核苷酸DNA复制条件9/1510/15一、PCR原理:PCR(多聚酶链式反应)技术是一个体外快速扩增DNA片段技术,它能以极少许DNA为模板,在几小时内复制出上百万份DNA拷贝。利用了DNA热变性原理,经过控制温度来控制双链解聚与结合。11/15DNA母链:提供复制模板解旋酶:打开DNA双链4种脱氧核苷酸:合成子链原料DNA聚合酶:催化合成DNA子链ATP:为复制过程提供能量引物:使DNA聚合酶从引物3′端开始连接脱氧核苷酸PCR反应条件80—100℃耐热DNA聚合酶缓冲溶液:维持反应pH值不变12/15二、PCR反应过程1、变性:温度上升到90℃以上时,双链DNA解聚成为单链。2、复性(退火): 温度下降到50℃左右,引物与模板DNA单链互补序列配对结合。3、延伸: 温度上升到72℃左右,溶液中4种脱氧核苷酸在TaqDNA聚合酶作用下,依据碱基互补配正确标准合成新DNA链。13/1514/15;/北京拓展基地北京拓展训练北京拓展培训企业ory19msq么;也梦过几次我们和爹在汉口镇上开店,在娘娘家吃饭,大家一起说话,还有小青姐姐又撒小性子了。就是没有梦见过爹给咱们说过什么,就是人常说托梦什么。”耿正说:“我也是啊,总是做一些没有什么特殊意义梦。”耿直说:“咱俩今儿个晚上又睡在这个屋子里了。若在天有灵,希望爹爹能回来告诉我们,他在哪里,我们回去了也……”听着耿直已经带着哭腔了,耿正伸手给弟弟掖掖被角,说:“睡吧。说不准等我们睡着了,爹真得就回来给我们托梦了呢!”耿直不再说话,过一会儿也就沉沉地睡着了。耿正却辗转难眠,眼前总是在晃动着当年父子四人一同住在这个屋子里情景……耿英进了西边屋里时,看到娘娘已经将两床被褥都铺好了,正坐在桌子边上等她呢。再一看,洗脚盆、干毛巾也都放在那里。耿英说:“娘娘,您洗了?”乔氏说:“娘娘洗了。你快洗洗睡吧,明儿个一早还要赶路呢!”耿英说:“娘娘您先睡,我马上就好!”乔氏说:“那我先睡了。你洗完了什么也不要收拾,赶快上来睡觉!”“唔!”耿英答应着急忙洗罢,快速脱了外衣钻进松软舒适被窝里。乔氏伸出手来给她掖掖被角,说:“我吹灯了啊!你闭眼睡吧,不早了!”耿英又听话地“唔”一声。灯熄灭了。在黑暗中,耿英也是久久不能入睡。她假装睡着了,一动不动地侧卧在娘娘身边。但她很显著地感觉到,娘娘也并没有很快睡着了。她时不时地尽可能轻轻动一动,但一直再没有和耿英说话。耿英知道,娘娘不是没有想说话,而是将许多想说话都藏在心里了……后午夜了,在窗外一阵阵“呼呼啦啦”风声中,耿英终于沉沉地睡着了。第二天醒来,天已经大亮了。听见东伢子在过厅里压低嗓音儿说:“姆妈,我买是刚宰好鱼!”乔氏说:“这么更加好,我简单清洗一下就能够上笼蒸了!没你事儿了,去看小伢子吧!”东伢子说:“小伢子还没醒呢。我先去给大白骡再加点儿草料吧!”耿英赶快起床收拾,发觉乔氏母女俩已经将早饭准备大半了……饱餐了香喷喷清蒸武昌鱼拌新蒸米饭后,东伢子对乔氏说:“姆妈,我将骡车也套上,咱们送耿弟兄他们去码头吧!”乔氏还未说话,耿正赶快说:“千万不能够!你们看,外面风很大呢,这一大早天儿很冷呢。都不要远送,就送门口!”耿英和耿直也说:“是,千万不要远送。送到门口就好了!”乔氏想一想,说:“后午夜就起风了呢。也好,就听你们吧!”随即吩咐东伢子:“你记着把干粮袋子和酱菜放到车上啊
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