细胞生物学实验及细胞生物学试题

实验室规则和要求一般规定上课第一天请先熟悉环境，牢记“安全”是进行任何实验最重要的事项。在实验室内请穿著实验衣（最好长及膝盖下），避免穿著凉鞋、拖鞋（脚趾不要裸露）。留有长发者，需以橡皮圈束于后，以防止引火危险或污染实验。在实验室内禁止吸烟、吃东西、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服外套及杂物等。所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得携出实验室外。每组分配之仪器、耗材请在课程开始前确定清点与保管，课程结束后如数清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用。实验前后，请把工作区域清理擦拭，并随时保持环境清洁。实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作，注意上课所告知的注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，适切记下自己的结果，严禁抄袭，确实关闭不用之电源、水、酒精灯及瓦斯等。身体不适、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验室。实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及冷气，离开实验室前记得洗手。任何意外事件应立即报告教师或实验室管理人员，并应熟知相关之应变措施。药品使用任何药品，请先看清楚标示说明、注意事项，翻阅物质安全资料，查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。新配制的试剂请清楚注明内容物、浓度、注意事项及配制日期，为避免污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、-巯基乙醇、甲醛、酚等）要在排烟柜中戴手套量取配制，取用完应随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。有毒、致癌药剂例如丙稀酰胺（神经毒）、溴化乙啶（突变剂）、SDS（粉尘）请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，养成洗手的好习惯。使用后的实验试剂和材料，应放在专用的收集桶内。固体培养基、琼脂糖或有毒物品不得倒入水槽或下水道中。使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或吸耳球。

仪器使用仪器前先了解其性能、配备及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸，勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，离心机未停下不得打开盖子。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。电源供应器有高电压，切勿触摸电极或电泳槽内溶液，手湿切勿开启电源。使用微波炉加热，不可有铝箔等金属物品，瓶盖必须松开，以免爆炸。加热后戴防热手套取出瓶子，务必轻摇晃，确认不会突沸。水浴锅、干燥器等，使用前熟悉操作手续，严防烫伤。操作台上有酒精等有机溶剂及易燃物（如甲醇、乙醇、乙醚、瓦斯等）要远离火苗，不可留置火焰燃烧，万一着火，应力持镇定，沉着处理。酒精或乙醚等着火时，应使用泡沫灭火剂或湿毛巾覆盖，勿使用水冲泼。实验完毕后需清理实验台，除需收回共用物品外，不留任何器皿。倾倒的试剂、水渍应擦干净，保证实验台和实验前同样清洁。值日组协助实验室管理人员收回共用物品，清洁仪器，清理实验台，打扫实验室。

第一部分基础实验实验1显微技术概述实验目的：使学生了解基本的细胞生物学实验操作，熟悉常规和常用的实验方法。锻炼学生动手能力，增强学生基本科研技能和科研思路；了解目前常用细胞生物学研究方法。任务：细胞生物学作为高校生命科学的主干课程之一，从本质上讲是一门实验科学，因此设置实验课程十分重要，学生可以通过这一教学环节掌握细胞生物学的基本研究手段和方法，并更深入理解理论课的各方面内容。进一步讲，细胞是生物构成的基本单位，是理解一切生命现象的基础，许多细胞生物学实验方法也用于遗传学，分子生物学，生物化学等科学实验研究，在将来的各项工作中将会有广泛的实际用途。培养目标：使学生掌握细胞生物学实验技术，提高学生分析问题和解决问题的能力，为了今后独立进行科研工作打下坚实的基础。实验2细胞膜的渗透性一、实验目的了解细胞膜的渗透性质及各种物质跨膜进入细胞的不同速度二、实验原理将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的渗透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质则不能渗入；渗入的溶质能够提高红细胞膜的渗透压，所以水分进入细胞引起溶血。由于溶质渗入速度不同，因此溶血的时间也不相同。三、实验器材与试剂器材：50ml小烧杯，10ml移液管，试管（1～10ml），试管架。试剂：0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化铵，0.17mol/L醋酸胺，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/L草酸铵，0.12mol/L硫酸钠，0.32mol/L葡萄糖，0.32mol/L甘油，0.32mol/L乙醇，0.32mol/L丙酮。实验材料：动物血液（如羊血）四、实验步骤1、羊血细胞悬浮液取50ml小烧杯一只，加一份羊血和10份0.17mol/L氯化钠溶液，形成一种不透明的红色溶液，即稀释的羊血。2、低渗溶液取试管一只，加入5ml蒸馏水，再加0.5ml稀释的羊血，注意观察溶液颜色变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成溶血，全部红细胞溶血后光线比较容易透过溶液。3、羊红细胞渗透性（1）取试管一支，加入0.17mol/L氯化钠溶液5ml，再加入0.5ml稀释的羊血，轻轻摇动，观察颜色变化及溶血现象，说明原因。（2）取试管一支，加入0.17mol/L氯化铵溶液5ml，再加入0.5ml稀释的羊血，轻轻摇动，观察颜色变化及溶血现象，说明原因。（3）另外8种等渗溶液进行同上实验记录实验结果并简单分析表1不同低渗溶液中红细胞溶血现象溶液种类溶血与否时间结果分析0.17mol/L氯化钠0.17mol/L氯化铵0.17mol/L醋酸胺0.17mol/L硝酸钠0.12mol/L草酸铵0.12mol/L硫酸钠0.32mol/L葡萄糖0.32mol/L甘油0.32mol/L乙醇0.32mol/L丙酮五、注意事项（或实验特别提示）六、实验报告结果与讨论思考题实验3细胞器线粒体的分离与观察一、实验目的用差速离心法分离动、植物细胞线粒体二、实验原理线粒体是真核细胞特有的，司能量转换的重要细胞器。细胞种的能源物质——糖、脂肪、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸华生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体的结构和功能的研究通常是在离体线粒体上进行的。制备线粒体用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心的方法。在一给定的离心场中（对于所使用的离心机，就是选用一定的转速），球形颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。在一均匀悬浮介质中离心某一时间内，组织匀降中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同而停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间，就能使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。细胞器中最先沉降的是细胞核，其次是线粒体，其他更轻的细胞器和大分子可依次再分离。悬浮介质通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。整个操作过程应注意样品保持4，避免酶失活。线粒体的鉴定用詹纳斯绿活染法。詹纳斯绿B（janusgreenB）是对线粒体专一的活细胞染料，毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由电性吸引而堆积在线粒体膜上。线粒体的细胞色素氧化酶使该染料保持在氧化状态呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而胞质中的染料被还原成无色。本实验介绍大鼠（动物）肝脏和玉米（植物）线粒体的分离。三、实验器材与试剂四、实验步骤大鼠肝脏线粒体的分离实验用品材料：大鼠肝脏试剂：生理盐水1％詹纳斯绿B染液，生理盐水配制蔗糖－Tris盐酸缓冲液（pH7.4）0.25mol/L蔗糖＋0.01mol/LTris-盐酸缓冲液（pH7.4）0.1mol/LTris10ml0.1mol/L盐酸8.4ml加重蒸水到100ml加蔗糖到0.25mol/L。蔗糖为密度梯度离心用D(+)蔗糖0.34mol/L蔗糖＋0.01mol/LTris-盐酸缓冲液（pH7.4）配制如上，加蔗糖到0.34mol/L。固定液：甲醇－冰醋酸（9：1）Giemsa染液：Giemsa粉0.5g，甘油33ml。先往Giemsa粉中加少量甘油在研钵内，研磨至无颗粒，再将剩余甘油倒入混匀，56左右保温2h，令其充分溶解，最后加甲醇混匀，成为Giemsa原液，保存于棕色瓶中。用时吸出少量用1/15mol/L磷酸缓冲液作10～20倍稀释。1/15mol/L磷酸缓冲液（pH6.8）：1/15mol/LKH2PO450ml1/15mol/LNa2HPO450ml器材高速离心机，解剖刀剪，小烧杯，冰浴盘，漏斗，尼龙织物，玻璃均浆器。实验方法制备大鼠肝细胞匀浆。实验前大鼠空腹12h，击头处死，剖腹取肝，迅速用生理盐水洗净血水，用滤纸吸干。称取肝组织1g，剪碎，用预冷到0～4°C的0.25mol/L缓冲蔗糖溶液洗涤数次。然后在0~4°C条件下，按每克肝加9ml冷的0.25mol/L缓冲蔗糖溶液将肝组织匀浆，蔗糖溶液分数次添加，匀浆用双层尼龙织物过滤备用。注意尽可能先充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。差速离心先将9ml0.34mol/L缓冲蔗糖溶液放入离心管，然后沿管壁小心的加入9ml肝匀浆使其覆盖在上层。用冷冻控温高速离心机按照图1顺序进行差速离心。鼠肝匀浆鼠肝匀浆700g，离心10min沉淀上清洗涤（可省略）10ml预冷的0.25mol/L缓冲蔗糖溶液，2次，每次1000g，离心15min。沉淀I细胞核及质膜碎片上清合并10000g，离心10min沉淀洗涤（可省略）加10ml预冷的0.25mol/L缓冲蔗糖溶液，1000g，15min。沉淀II（线粒体）图1差速离心顺序图分离物鉴定细胞核：取细胞核沉淀一滴涂片，在甲醇－冰醋酸溶液中固定15min，充分吹干，滴Giemsa染液（原液10～20倍稀释）染色10分钟。自来水冲洗，吹干，镜检。观察结果。线粒体：取线粒体沉淀涂片，注意勿太浓密，不待干即滴加1％詹纳斯绿B染液染色20min，盖上盖玻片镜检。观察结果。玉米线粒体的分离从植物细胞中分离线粒体，除了做线粒体功能测定之外，在植物细胞遗传工程中，常用于分离核外基因——线粒体DNA等目的。分离线粒体的方法仍采用均匀介质中的差速离心法。介质中0.25mol/L蔗糖也可以用0.3mol/L甘露醇代替。EDTA螯合二价阳离子，Ca2+除去后细胞间粘着解体，促使组织分散成单个细胞。牛血清白蛋白（BSA）能包在细胞外面，并作为竞争性底物削弱蛋白酶的作用。实验用品材料玉米黄化幼苗（水稻、高梁等幼苗均可）试剂分离介质：0.25mol/L蔗糖，50mmol/LTris-盐酸缓冲液（pH7.4），3mmol/LEDTA，0.75mg/mlBSA。50mmol/L的Tris-盐酸缓冲液（pH7.4）配法：50ml0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与42ml0.1mol/L盐酸混匀后，加水稀释至100ml。保存液：0.3mol/L甘露醇（pH7.4）20％次氯酸钠（NaClO）溶液1％詹纳斯绿B染液，生理盐水配制。器材温箱，冰箱，纱布，瓷研钵，冷冻控温高速离心机实验方法玉米种子用20％次氯酸钠溶液浸泡10min消毒，清水冲洗30min，再浸泡清水15h。将种子平铺在放有湿纱布的盘内，保持温度，置温箱28于暗处培育2～3d。待芽长到1～2cm长时剪下约5g，放0～41h。加3倍体积分离介质，在瓷研钵内快速研磨成匀浆。用多层纱布过滤，滤液经700g离心10min。除去核和杂质沉淀。取上清液10000g离心10min，沉淀为线粒体。再同上离心洗涤一次。沉淀为线粒体，可存于0.3mol/L甘露醇中。注意以上匀浆及离心均控制在0~4进行。取线粒体沉淀涂片在清洁载玻片上，不待干即滴加1％詹纳斯绿B染色20min，镜下观察，线粒体为蓝绿色圆形颗粒。五、注意事项（或实验特别提示）六、实验报告结果与讨论思考题实验4RNA的细胞化学（Brachet反应）一、实验目的了解Brachet反应原理，掌握有关的操作方法。二、实验原理甲基绿—派洛宁（methylgreen-pyronin）为碱性染料，它分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核酸分子都是多聚体，而其聚合程度有所不同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色（但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色）。即RNA对派洛宁亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成绿色。三、实验器材与试剂仪器、用具：显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸。材料：洋葱鳞茎内表皮。试剂：Unna试剂：甲基绿－派洛宁染色液甲液：5％派洛宁水溶液6ml2％甲基绿水溶液6ml蒸馏水16ml乙液：1mol/L乙酸缓冲液（pH4.8）16ml甲液与乙液分别置于4冰箱备用，使用时两溶液混匀即可。1mol/L乙酸缓冲液（pH4.8）配方：A液：冰醋酸6ml加蒸馏水至100ml。B液：乙酸钠13.5g加蒸馏水至100ml。取A液40ml＋B液60ml混匀即为pH4.8乙酸缓冲液。四、实验步骤用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置于载玻片上。滴一滴Unna试剂，染色30min。蒸馏水洗两次，吸水纸吸去多余水分。盖上盖玻片，镜检。五、注意事项（或实验特别提示）CK对照：撕取洋葱鳞茎内表皮，经5％三氯乙酸90水浴处理15min。再经70％乙醇洗片刻，然后按照步骤（1）～（4）制片观察。六、实验报告结果与讨论思考题实验5DNA的细胞化学（Feulgen反应）一、实验目的了解Feulgen反应的原理，掌握有关的操作方法。二、实验原理DNA是由许多单核苷酸聚合成的多核甘酸，每个单核苷酸又由磷酸、脱氧核糖和碱基构成。DNA经1mol/L盐酸水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的双键打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基，这些醛基与Schiff试剂反应。Schiff试剂是碱性品红和偏重亚硫酸钠作用，形成无色的品红液，当无色品红与醛基结合则形成紫红色的化合物。因此凡是有DNA的地方，都能显示紫红色。紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜色。材料不经过水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的，从而证明了Feulgen反应的专一性。三、实验器材与试剂仪器、用具：显微镜，恒温水浴箱、温度计、解剖针、酒精灯、试管、烧杯、载玻片、盖玻片、吸水纸。材料：洋葱鳞茎。试剂：1mol/L盐酸的配制：取82.5ml密度1.19g/ml的浓盐酸加蒸馏水至1000ml。Schiff试剂的配制和保存：称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶），时时振荡，继续煮5min（勿使其沸腾），使之充分溶解。然后冷却至50℃时用滤纸过滤，滤液中就加入10ml1mol/LHCl，冷却至25℃时，加入0.5gNa2S2O5（偏重亚硫酸钠），充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h（有时需2～3d），使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活性炭，用力振荡1min，最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封严瓶塞，外包黑纸。滤液应为无色无沉淀，贮于4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不能再使用，如颜色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾，使之再转变为无色时，仍可使用。亚硫酸水：取200ml自来水，加入10ml10％偏重亚硫酸钠（或钾）水溶液和10ml1mol/LHCl，三者于使用前混匀。四、实验步骤将洋葱鳞茎内表皮放在1mol/LHCl中，加热到60℃水解8～10min。蒸馏水水洗。Schiff试剂遮光染色30min。用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次1min。水洗5min。显微镜观察。细胞中有DNA的部位应呈现紫红色阳性反应。五、注意事项（或实验特别提示）CK对照：另取同样材料一份，不经1mol/LHCl水解，直接在Schiff试剂中染色，然后按照步骤（4）～（6）制片观察。六、实验报告结果与讨论思考题实验6考马斯亮蓝R250（CoomassieblueR250）染色法观察细胞骨架一、实验目的掌握动植物细胞内微丝的染色方法。二、实验原理真核细胞质中有错综复杂的纤维网，称为细胞骨架（cytoskeleton）。根据纤维的直径分为微丝（microfilament,MF,7nm）、微管（microtubule,MT,25nm）、中间纤维（intermediatedfilament,IF,10nm）。此外，还散布着一些比微丝还细的纤维（3～6nm）。目前观察细胞骨架的主要手段有电镜、间接免疫荧光技术、酶标、组织化学等。微丝是肌动蛋白构成的纤维，称为F-actin。单根微丝直径约7nm，在光学显微镜下看不到。本实验观察到的是由微丝平行排列组成的纤维束，在动物细胞里称为“应力纤维”（stressfiber）应力纤维在体外培养的贴壁细胞中尤为发达。一般当细胞充分铺展时，经考马斯亮蓝R250染色，可看到沿细胞长轴伸展的粗大纤维束，即应力纤维。应力纤维上还周期性地分布着微丝结合蛋白，包括-辅肌动蛋白、肌球蛋白、原肌球蛋白、类肌钙蛋白等。应力纤维的端部连接着质膜上的粘着斑，与加强细胞对基质的附着、铺展及维持细胞特定形状有关。考马斯亮蓝R250可以染各种蛋白，并非特异染色微丝，实验中用1％TritonX－100抽提掉胞质中除骨架蛋白外的其他蛋白，能清晰地显示微丝束。三、实验器材与试剂四、实验步骤考马斯亮蓝R-250染动物细胞微丝仪器光学显微镜、温箱、细胞培养设备材料平皿，直径30mm小染缸，载波片，盖玻片条（剪掉一角以区别细胞正反面）。体外培养的贴壁生长的HeLa细胞试剂细胞培养基（DMEM、RPMI－1640等），磷酸缓冲盐溶液（PBS，pH7.4），0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH7.3），M－缓冲液，1％TritonX-100（用M－缓冲液配制），0.2%考马斯亮蓝R250，3.0%戊二醛（用0.2mol/L磷酸盐缓冲液配制）。实验步骤细胞培养在平皿中的盖玻片上，尚未致密时即可使用。取出盖玻片，用PBS洗3次。用1％TritonX-100处理25～30min，室温或37度均可。立即用M-缓冲液轻轻洗细胞3次。略晾干后，用3.0%戊二醛固定细胞5～15min。PBS洗数次，滤纸吸干。用0.2%考马斯亮蓝R250染色1小时，然后用水小心冲洗，蒸馏水冲洗，空气中略干燥。普通光学显微镜下用40×物镜或油镜观察。考马斯亮蓝R-250染植物细胞微丝实验步骤：取洋葱鳞茎表皮，大小约1cm2，放入盛有0.2mol/L磷酸盐缓冲液（6.8）的小烧杯中。吸去缓冲液，用1％TritonX-100处理洋葱表皮20～30min。除去TritonX-100，用M-缓冲液充分洗3次，每次约10min。加3.0%戊二醛（用0.2mol/L磷酸盐缓冲液配制，pH6.8）固定0.5~1h。用PBS洗3次，滤纸吸去残液。0.2%考马斯亮蓝R250染色30min。蒸馏水洗数遍。将样品置于载玻片上，加盖玻片，光学显微镜下观察。五、注意事项（或实验特别提示）六、实验报告结果与讨论思考题实验7动物细胞传代培养与观察实验一、实验目的熟练掌握细胞的传代培养法。二、实验原理传代培养是组织培养常规保种方法之一。也是几乎所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。传代培养可获得大量细胞供实验所需。传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。三、实验器材与试剂材料：培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75％酒精棉球，酒精灯，培养细胞。药品：培养基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清或胎牛血清，0.25％胰蛋白酶。仪器：C02培养箱，倒置显微镜，超净工作台。四、实验步骤1．人进入无菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒双手。2．倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置37℃下预热。3．超净台台面应整洁，用0.1％新洁尔灭溶液擦净。4．打开超净台的紫外灯照射台面20min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧。5．点燃酒精灯；取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮头；过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。6．将培养用液瓶口用75％酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。7．倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2—3mLHanks液洗去残留的旧培养基，或用少量胰酶涮洗一下。8．每个大培养瓶加入1mL胰酶，小瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中。9．加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7～10mL／大瓶，3～5mL／小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖上瓶盖，适度拧紧后再稍回转，以利于CO2气体的进入，将培养瓶放回CO2培养箱。10．对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。可将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。五、注意事项（或实验特别提示）1．传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。2．每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折旋光性好，生长致密时即可传代。3．如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等。六、实验报告1、结果与讨论2、思考题第二部分综合实验实验8MTT法检测化学药物对体外培养细胞增殖及存活的影响一、实验目的了解掌握MTA法的基本原理及基本过程。二、实验原理测试药物对细胞增殖的影响，对细胞的杀伤作用，一般采用集落形成法，生长曲线法等。这些方法作用量大，费时对于处理大量样品和受试对象，则更为繁琐。1983年，T.Mosmann结合微空培养方法，利用细胞对tetrazolium(简称MTT)的还原作用，建立了比色检测法。经过以后的改进，特别是M.C.Alley(1988)的研究，逐渐成熟，称为MicrocultureTetrazoliumAssay，简称MTA。该法快速、简便、使用面广。在适当的实验条件下，结果重复性好，敏感性高。对于大规模筛选药物，可在短时间内处理大量样品。MTA法是利用活细胞线粒体中呼吸链对tetrazolium的还原作用而生成有色的MTTforrmazan，其生成量与活细胞数量、细胞的种类、作用时间等相关。当细胞种类、作用时间一定时，则MTTformazan的生成量与细胞数量呈直线相关。比色测定MTTformazan的量就可测知活细胞数量。此法与集落形成法、生长曲线法等的测定结果有良好的相关性。三、实验器材与试剂器材微孔细胞培养板、微量加样器、酶联免疫检测仪、显微镜、细胞计数板。材料HeLa细胞株。试剂1．培养液2％RPMI164085ml小牛血清15ml青霉素10000IU链霉素10mg2mg/mlMTTMTT200mg，加入培养液100ml溶解后，用黑纸包好贮存于4℃。3％小牛血清－磷酸缓冲盐水（3％FCS-PBS）PBS:NaCl7.6gKCl0.15gNa2HPO4.12H2O2.9gKH2PO40.15g加蒸馏水至1000ml取PBS970ml加灭活小牛血清30ml。四、实验步骤1.细胞接种：将处于对数生长期的细胞用培养基制成2×105细胞/ml的悬液。用微量加样器接种于微孔板中，每孔100ul，边缘孔中不加细胞，仅加培养基作为无细胞空白。37±0.5℃过夜或5％CO2培养箱中4h，使细胞贴壁。2.加药：弃去培养液，于相应实验孔中加入一定浓度的H2O2，每孔100ul，留CK孔不加药，而加入等体积培养液作空白对照。继续培养24h。3.加MTT，倾弃药液，每孔中加入200ul培养基洗一次，3min后倾弃，每孔加入MTT溶液50ul，继续培养3-4h。洗板：倾去MTT，以3％FCS-PBS洗二次，每次每孔约加入200ul。最后倾干孔内液体。溶解：每孔加入DMSO（二甲基亚砜）200ul，室温放置30min，并不时摇动。测量：以无细胞空白孔为零点，测量OD550或OD570，做好记录。以空白对照为100％，按下式计算细胞的存活率：存活率%=×100%五、注意事项（或实验特别提示）六、实验报告结果与讨论思考题细生大礼包第三弹.线粒体与细胞的能量转换PART1教学大纲1.教学内容第一节线粒体的基本特征第二节细胞呼吸与能量转换第三节线粒体与疾病2.教学基本要求掌握：线粒体是由双层单位膜套叠而成的封闭性膜囊结构，线粒体的化学组成（尤其是各区间标志酶），细胞呼吸的概念和特点，细胞能量的转换分子——ATP，丙酮酸在线粒体内生成乙酰辅酶A，三羧酸循环是各种有机物进行最后氧化的过程，也是各类有机物相互转化的枢纽，呼吸链概念，氧化过程中伴随磷酸化的藕联，1分子葡萄糖完全氧化释放的能量，化学渗透假说。熟悉：线粒体的形态数量与细胞的类型和生理状态有关，线粒体的遗传体系，核编码蛋白质向线粒体的转运，葡萄糖在细胞质中的糖酵解，三羧酸循环，一分子葡萄糖经过三羧酸循环的总反应式，呼吸链和ATP合酶复合体是氧化磷酸化的结构基础，根据结合变构机制ATP的合成。了解：线粒体的起源与发生，NADH+H+通过线粒体内膜的穿梭机制，F0基片在ATP合成中的作用，与细胞死亡有关的线粒体机制，线粒体控制细胞死亡的假说，疾病过程中的线粒体变化，mtDNA突变与疾病。3.重点与难点重点：线粒体的组成结构，细胞呼吸与能量转换。难点：电子传递链，氧化磷酸化，ATP生成。Part2题库一．填空题线粒体是细胞的基地，其主要功能是。（七）线粒体的嵴由向内腔突起而成，其上面的带柄结构是，由、和三部分组成，该结构具有活性。功能是。（七）线粒体各部分结构中有各自特殊的标记酶，它们分别在外膜是________，外腔是___________，内膜是__________，膜间腔是______________。（七）线粒体基因组共由个碱基组成，含个基因，可分别编码rRNA、tRNA和蛋白质。（七）细胞氧化的过程包括三个步骤：①；②；③。（七）答案：1.生物氧化和能量转换营养物质在线粒体内氧化并与磷酸化藕联生成ATP内膜基粒头部炳部基片酶催化ADP磷酸化生成ATP单胺氧化酶细胞色素氧化酶腺苷酸激酶1656937糖酵解三羧酸循环氧化磷酸化单项选择1,可在光学显微镜下见到的结构是A．微粒体B．基粒C．溶酶体D．线粒体E．受体2由两层单位膜围成的细胞器是A．高尔基复合体B．溶酶体C。线粒体D．微体E．内质网3线粒体的主要功能是A．贮存Ca2+B．DNA复制C．合成蛋白质D．合成糖原E．以上都不是4糖的有氧氧化过程中丙酮酸、CO2＋H2O发生在A．核蛋白体B．内质网C．溶酶体D．细胞质基质E．线粒体5细胞内线粒体在氧化磷酸化过程中生成A．GTPB．cAMPC．AMPD．ATPE．cGMP6线粒体中三羧酸循环反应进行的场所是A．基质B．内膜C．基粒D．嵴膜E．膜间腔7线粒体中ADP—ATP发生在A．基质B．内膜C．膜间腔D．基粒E．嵴膜8在光镜下可见线粒体的形状为A．分技状B．棒状、线状或颗粒状C．星状D．卵圆形E．以上形状都有9在电镜下观察线粒体的形状呈A短杆状B．环形C．哑吟形D．星形E．以上形状都有可能10线粒体嵴的形状是A．板层状峪B．纵行嵴C．管状嵴D．锯齿状嵴E．以上形状都有可能11真核细胞的核膜外DNA存在于A．核膜B．线粒体C．内质网D．核糖体E．高尔基复合体12细胞消耗游离氧的代谢发生在A．线粒体B．染色体C．溶酶体D．高尔基复合体E．中心体13下列哪一种说法描述线粒体DNA较为确切A．线状DNAB．环状DNAC．是与核DNA密码略有不同的环状DNAD．与核DNA密码略有不同的线状DNAE．mtDNA含线粒体全部蛋白的遗传信息14动物细胞中含有DNA分子并能产生ATP的细胞器是A．中心体B．溶酶体C．核糖体D．线粒体E．高尔基复合体15细胞氧化过程中，乙酰辅酶A的生成发生在A．线粒体基质B．线粒体内膜C．线粒体外膜D．细胞基质E．核基质16关于线粒体的主要功能叙述A．由丙酮酸形成乙酰辅酶AB．进行三羧酸循环C．进行电子传递、释放能量并形成ATPD．B＋C最确切E．A＋B＋C最确切17线粒体内三羧酸循环的特点是A．脱羧产生CO。、放出电子B．脱羧产生CO。、放出氢原子C．放出氢原子和电子D．脱羧产生CO。、放出ADPE．脱羧放出ATP18葡萄糖分解的三个阶段的顺序是A．糖酵解一丙酮酸脱氢、三羧酸循环一电子传递和氧化磷酸化B．糖酵解一电子传递和氧化磷酸化一丙酮酸脱氢、三羧酸循环C．丙酮酸脱氢、三羧酸循环一糖酵解一电子传递和氧化磷酸化D．丙酮酸脱氢、三羧酸循环一电子传递和氧化磷酸化一糖酵解E．电子传递和氧化磷酸化一丙酮酸脱氢、三羧酸循环一糖酵解19一分子葡萄糖彻底氧化后可以产生的能量有A．34个ATPB．36个ATPC、38个ATPD．40个ATPE．42个ATP20线粒体半自主性的一个重要方面体现于下列哪一事实A．线粒体DNA（mtDNA）能独立复制B．线粒体含有核糖体C．在遗传上由线粒体基因组和细胞核基因组共同控制D．mtDNA与细胞核DNA的遗传密码有所不同E．mtDNA在G。期合成答案：1-5DCEED6-10ADBEE11-15BACDA16-20EEACC多项选择1关于线粒体的结构和功能哪些说法不正确A．不同生物的线粒体的峪形态相同B．细胞内形成ATP的中心C．可完成细胞氧化的全过程D．是双层膜结构的细胞器2细胞内物质氧化的特点是A．氧化产生的能量主要以热能形式传给细胞B．在常温常压下进行，既不冒烟也不燃烧C．不同代谢过程需要不同的酶催化D．氧化放能是分步、小量和逐渐进行的3线粒体的特征有A．细胞内分解各种物质的场所B．细胞内供能中心C．具双层膜结构D．光镜下呈线状或颗粒状4线粒体的超微结构有A．外膜B．内膜C．膜间腔D．基质腔5发生在线粒体内的生物化学反应有A．三羧酸循环B．丙酮酸一乙酰辅酶AC．ADP—ATPD．糖酵解6线粒体常分布于细胞中的部位有A．细胞需能区域B．高尔基体四周C．粗面内质网附近D．核周围7线粒体是细胞的动力工厂在于A．含有DNAB．含有产能有关的酶C．是产生能量的场所D．是蛋白质合成的场所8在线粒体膜上进行的代谢过程有A．三羧酸循环B．糖酵解C．丙酮酸一乙酰辅酶AD．氧化磷酸化9光镜下线粒体的形状可能是A．颗粒状B．分枝状C．棒状D．线状10清除衰老的线粒体是通过A．溶酶体的粒溶作用B．溶酶体的异溶作用C．溶酶体的自溶作用D．细胞膜的外吐11线粒体的基粒结构可分为A．头部B．囊腔C．柄部D．基部12含核酸成分的细胞器有A．染色体B．核糖体C．高尔基复合体D．线粒体13识别线粒体有关部位的标志酶是A．单胺氧化酶B．腺苷酸激酶C．细胞色素氧化酶D．mtDNA复制的酶14属膜相结构的细胞器是细胞核B．溶酶体C．线粒体D．中心体答案ACBCDBCDABCDABCABCDBCDACDCACDABDABCDABC名词解释1线粒体2线粒体嵴3基本微粒4半自主性细胞器5F1偶联因子6呼吸链7mtDNA8细胞呼吸9三羧酸循环10氧化磷酸化答案1线粒体（mitochondria）——是存在于细胞质内的一个重要的细胞器，由内外二层单位膜围成的膜相结构，内膜向内凸起形成峪，峪上的颗粒为基本微粒，它是氧化磷酸化的关键装置。线粒体内室是进行三羧酸循环的场所，线粒体是细胞内能量转换的系统，其主要功能是产生ATP，提供细胞生命活动所需要的能量。线粒体嵴（mitochondriacristae）——是指线粒体内膜向内凹陷结构，峪可增加细胞内线粒体内膜面积，有利于线粒体内外的物质交换。在线粒体嵴膜上，有许多有柄小球体，称为基本微粒（基粒），它是偶联磷酸化的关键装置，即ATP的产生部位。基本微粒（elementaryparticle）——简称为基粒，是线粒体峪膜上的有柄小球体，也称ATP酶复合体，是偶联磷酸化的关键装置。它由3部分组成：即头部，为可溶性ATP酶（F1）；柄部，有对寡霉素敏感的蛋白（OSCP）；基部，有疏水蛋白（HP或F。），为质子通道，并将头柄部连结整合到线粒体的内膜上。半自主性细胞器（semiautonomousorganelle）——线粒体能自我增殖，有mtDNA以及转录蛋白质的mtRNA、mt核糖体等。似乎线粒体是细胞内一个独立、自主的细胞器，但实际上它自身的遗传系统贮存信息很少，不能为自己编码全部蛋白质，构建线粒体的信息大部分来自细胞核DNA。因此，线粒体只能是一个半自主的细胞器，其遗传上由线粒体基因组和细胞核基因组共同控制。F1偶联因子（F1factor）——线粒体的基粒头、柄部为F1偶联因子，尤其是头部的主要蛋白组成了DNA合成酶结构，它使ADP磷酸化为ATP。头部还有抑制ATP水解的酶蛋白，保护产生的ATP不被水解，因此F1因子是实现线粒体的氧化磷酸化功能的结构基础。呼吸链(respiratorychain)---线粒体内膜上由多个酶复合体组成的电子传递链叫呼吸链。呼吸链的成分有辅酶1（NAD）→黄酶（FAD）→辅酶Q→细胞色素b→c1→c→a等，它们按一定顺序排列，可逆地接受和释放电子和质子，电子在逐级传递过程中释放出能量，这些能量帮助质子泵出内膜外面，在膜间腔形成质子浓度差透入基部，并通到柄、头部，质子的流动动力可以使ADP磷酸化为ATP。mtDNA（mitochondrialDNA）——即线粒体DNA，指存在于线粒体内的DNA，mtDNA呈高度扭曲的双股环状。mtDNA能转录自身的mRNA、rRNA和tRNA，线粒体的蛋白质约有10％是由mtDNA编码的。如果没有mtDNA编码的mRNA、tRNA及核糖体，细胞核DNA也无法指令构建线粒体。细胞呼吸（ellularrespiration）——细胞呼吸是指细胞利用氧气氧化糖类或脂肪产生二氧化碳和水，同时放出能量形成ATP的生物氧化过程。细胞呼吸的主要步骤可简单归纳为①糖酵解；②由丙酮酸形成乙酰辅酶A；③进行三羧酸循环；④电子传递和化学渗透偶联磷酸化。三羧酸循环（tricarboxylicacidcycle）——三羧酸循环发生在线粒体基质中，是细胞呼吸的一个重要阶段，由一系列的酶促反应构成。循环是从乙酰辅酶A与草酰乙酸结合成柠檬酸开始，经过多次脱氢、脱羧作用，最后转化成草酸乙酸，草酰乙酸又和乙酰辅酶A结合生成柠檬酸再进入循环。脱下的氢经呼吸链递氢递电子体系偶联氧化过程生成ATP。氧化磷酸化（oxidativephosphorylation）——在有氧代谢的三羧酸循环等反应中，脱下的氢首先与NAD或FAD结合成NADH和FADH2，经呼吸链中其他成分的传递，NAD+和FAD从氧化底物中取得的电子与O2分子结合，提供的能量用以驱动ADP＋Pi转变成为ATP的反应，这就是氧化磷酸化作用，把NADH的氧化能转换成ATP高能磷酸键的能。Part3拓展阅读三羧酸循环的故事从前有个女孩柠檬（1），因为重男轻女，母亲又生了个弟弟叫苹果，十岁时父母就把她遗弃，带着弟弟远赴美国，留给她一笔抚养费，她是在福利院度过了八年的孤苦日子。十八岁后她离开了福利院，有天在海边游玩，爱上了一只乌贼（2），可是乌贼并不喜欢她，于是她费尽心机改变自己，终于有天，她变得与先前的自己完全相异（3），可乌贼还是不喜欢她。心灰意冷之际，她选择了离开，不再做一个可怜的付出者而得不到丝毫的回报，整整几天坐在梧桐树下（4）默默流泪，黯然神伤。美丽的琥珀路过，心生怜悯，走到柠檬边上坐下。时间在缓慢流逝，柠檬把先前发生的点点滴滴都倾诉给善良的琥珀听，琥珀不停安慰着她，并鼓励她忘掉过去，重新开始。两人如此投机，决定结为姐妹，从此以后柠檬就成了琥珀的妹妹（5），她再也不是一个无依无靠的人，也算琥珀家人了（6）。后来她和琥珀一同到盐湖城（7）游玩，命运总是如此捉弄人，在那个城市的街头，她遇见了她的家人，在茫茫人海中，她一眼就认出了苹果（8）。就在她准备转身离开的时候，她的父亲草酰乙酸（9）和母亲辅酶A（10）也认出了自己的亲生女儿，也许是随着年龄的增长，他们越发觉得对不起自己的亲生骨肉，希望以后能给柠檬创造优越的生活条件弥补当年遗弃她的过错。可倔强的柠檬拒绝了，她不愿意原谅当年绝情遗弃她的父母，她选择自食其力。琥珀轻轻拭干柠檬眼角的泪珠，告诉她说：“我们的柠檬不是没有眼泪的柠檬，而是喊着泪奔跑的柠檬！”

（1）柠檬酸（2）顺乌头酸（3）异柠檬酸（4）α-酮戊二酸（5）琥珀酰辅酶A（6）琥珀酸（7）延胡索酸（8）苹果酸（9）草酰乙酸（10）乙酰辅酶A.细胞骨架与细胞的运动Part1教学大纲1.教学内容第一节微管第二节微丝第三节中间纤维第四节细胞的运动第五节细胞骨架与疾病2.教学基本要求掌握：细胞骨架概念，细胞骨架分布，微管蛋白与微管的结构，微管组织中心概念，γ-微管蛋白环形复合体概念，微管的动态不稳定性，中心体概念，微管的“踏车运动”，微管的功能，马达蛋白分为哪3个家族，微管的驱动蛋白与动力蛋白的运输方向及特点，肌动蛋白与微丝的结构，微丝的功能，中间纤维的结构和类型，中间纤维的功能。熟悉：微管结合蛋白的概念、种类、分布、功能，微管装配的3个时期，微管的体外装配，微管的体内装配，微丝的组装过程分为、成核、聚合和稳定三个阶段，微丝的组装可用踏车模型和非稳态动力学模型来解释，微丝结合蛋白及其功能，中间纤维的组装特点，中间纤维的装配与调节。了解：影响微管的组装和解聚的因素，影响微丝组装的因素，肌肉收缩的分子基础，中间纤维的发现和命名，微管与细胞运动，微丝与细胞运动，细胞运动的调节机制，细胞骨架与肿瘤，细胞骨架蛋白与神经系统疾病，细胞骨架与遗传性疾病。3.重点与难点重点：微管及微丝的组成、组装和功能。难点：微管的组装，踏车模型。Part2题库填空题1.真核细胞的细胞骨架有、和组成。（六）2.微管的组装是由________和_________首先形成二聚体，进一步由二聚体组装成_____根_________呈纵向排列而成。一些药物如___________和___________可以引起微管分解。（六）3构成微管的蛋白有两类：________和________。（六）4微管共有种类型。其中具有根原纤维，具有根原纤维，具有根原纤维。（六）5微管的主要成分是，；微丝的主要成分是。（六）6在细胞骨架系统中较为稳定的一种骨架纤维是____，其直径约为____。（六）7细胞中微管组织中心包括鞭毛的、染色体的和位于细胞质中的。（六）8中间纤维是由中间纤维蛋白单体组成，每个蛋白单体由三个区域组成：_____________、____________和____________。在横切面上中间纤维有个蛋白单体。（六）答案：1.微管微丝中间纤维αβ13原纤维秋水仙素紫杉醇α管蛋白β管蛋白3单管13二联管23三联管33微管蛋白肌动蛋白丝中间纤维10nm头部杆状区尾部32单项选择1下列哪种结构不由微管构成A．纤毛B．纺锤体C．鞭毛D．染色体E．中心体2细胞骨架系统的主要化学成分是A．多糖B．脂类C．蛋白质D．核酸E．磷酸3电镜下中心粒的超微结构微管排列是A．9组单管B．9组二联管C．9组三联管D．6组二联管E．6组三联管4关于微管的化学组成哪项是错误的A．a微管蛋白B．b微管蛋白C．MAPD．tau蛋白E．组蛋白5微管的形态一般是A．中空圆柱体B．中空长方体C．中空圆球形D．实心纤维状E．以上都是6微管蛋白的异二聚体上具有哪种三磷酸核苷的结合位点A．UTPB．CTPC．GTPD．ATPE．TTP7纤毛、鞭毛的基体由下列哪种微管构成A．二联管B．三联管C．单管D．四联管E．以上都不是8关于微管的超微结构，下列哪项是错误的A．外径25urnB．呈中空圆柱状C．管壁厚10nmD．管壁由13条原纤维组成E．原纤维由微管蛋白组成9关于微管组装下列哪项叙述不对A．微管的组装是分步骤进行的B．微管两端的增长速度相同C．微管的极性对微管的增长具有重要作用D．微管蛋白的聚合和解聚是可逆的E．微管可以随细胞的生命活动不断地组装和去组装10下列哪项与微管的功能无关A．受体作用B．支持功能C．细胞运动D．物质运输E．信息传递11微丝中最主要的化学成分是A．原肌球蛋白B．肌钙蛋白C．动力蛋白D．肌动蛋白E．稳定因子结合蛋白12有关肌肉收缩原理，下列哪项叙述不对A．当Ca2+浓度下降时，原肌球蛋白构型改变，触发肌丝滑行B．肌肉放松时，细肌丝中的原肌球蛋白隔在肌动蛋白与横桥之间C．肌肉放松时，细肌丝不与粗肌丝结合在一起D．横纹肌收缩是肌原纤维的细肌丝和粗肌丝相互滑动造成的E．横纹肌收缩过程需要ATP提供能量13关于肌动蛋白的叙述错误的是A．G一肌动蛋白与F一肌动蛋白可互相转变B．肌动蛋白上有肌球蛋白结合位点，但无二价阳离子的结合位点C．F一肌动蛋白的聚合过程不需能量D．肌动蛋白是微丝的基础蛋白质E．微丝受到肌动蛋白一结合蛋白的调节14能特异性阻止微管蛋白聚合的物质是A．Na+B．Mg2+C．秋水仙素D．细胞松弛素BE．鬼笔环肽15微丝在非肌细胞中与下列哪种功能无关A．变形运动B．支架作用C．变皱膜运动D．吞噬活动E．氧化磷酸化16对微丝有专一性抑制作用的物质是A．秋水仙素B．细胞松弛素BC．长春新碱D．Mg2+E．K+17下列哪项叙述不符合肌球蛋白A．细胞中的肌球蛋白一般由6条多肽链组成B．肌球蛋白分子的2条轻链形成杆状部C．肌球蛋白分子头部聚集在肌球蛋白纤维的两极D．肌球蛋白的头部具有ATP酶活性E．肌球蛋白头部存在肌动蛋白结合位点18在微丝组分中起调节作用的是A．肌动蛋白B．肌球蛋白C．a一辅肌球蛋白D．纽带蛋白E．原肌球蛋白19秋水仙素对纺锤丝的抑制作用可使细胞分裂停于A．G。期B．前期C．中期D．后期E．末期20关于非肌细胞分裂时缢缩环，下列哪种叙述不对A．缢缩环由肌球蛋白和肌动蛋白构成B．缢缩环含微丝成分C．抗肌动蛋白抗体可加快缢缩环的产生D．在胞质分割开始时产生缢缩环E．胞质分裂完成时缢缩环解聚消失答案：DCCAACBCBADABCEBBECC多项选择1.关于微管的叙述正确的是A．呈中空圆柱体B．外径25nmC．13条原纤维包围而成D．主要存在溶酶体内2.微管蛋白的聚合所需的三磷酸核苷是A．TTPB．GTPC．ATPD．UTP3.属于细胞骨架结构的是A．微管B．微丝C．中等纤维D．微梁网格4.微管的功能包括A．支持功能B．细胞运动C．物质运输D．信息传递5.微管在细胞中的存在形式有A．单管B．二联管C．三联管D．四联管6.下列哪些因素促进微管的组装A．GTPB．Mg2+C．MAPD．高Ca2+7.核骨架可能与下列哪些方面有关A．蛋白质的加工B．蛋白质翻译C．DNA复制D．染色质包装8.微丝的功能主要包括A．参与肌细胞收缩B．参与胞质环流C．参与细胞膜运动D．参与构成细胞骨架9.下列哪些纤维属中等纤维A．肌原纤维B．波形蛋白纤维C．神经蛋白纤维D．角质蛋白纤维10.下列哪些细胞中常含有波形蛋白纤维A．骨骼肌细胞B．平滑肌细胞C．淋巴细胞D．成纤维细胞11含有动力蛋白的是A．线粒体B．溶酶体C．纤毛D．鞭毛12下列属微管结合蛋白的是A．稳定因子结合蛋白B．MAPC．tau蛋白D．盖帽因子结合蛋白13.参与