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第第页土壤植酸酶（phytase）试剂盒说明书土壤植酸酶（phytase）试剂盒说明书微量法100T/48S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。测定意义：植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸取和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。测定原理：植酸酶在确定温度和pH值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在700nm处有特征吸取峰，依据700nm处吸光值更改可计算得植酸酶活性。自备试验用品及仪器：天平、低温离心机、酶标仪、96孔板、恒温水浴锅，甲苯（不允许快递）。试剂的构成和配制：缓冲液：液体60mL×1瓶，4℃保管。试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保管，临用前加缓冲液30mL配制，现用现配；用不完的试剂4℃保管一个月。试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保管。显色剂：粉剂×6管，4℃避光保管，临用前依据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解，再加1.6mL试剂二混匀。样本处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30～50目筛。测定操作表：对照管测定管样本（g）0.030.03甲苯2020振荡混匀，室温放置15min缓冲液（L）500试剂一（L）500混匀，37℃孵育24h，10000g，4℃离心5min，取上清上清100100显色剂（L）100100混匀，静置15min，测定700nm处吸光值，△A=A测定管A对照管。每个测定管设一个对照管。酶活性计算公式：标准曲线：y=0.8795x+0.0084，R2=0.9977；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值△A。酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每克土样每小时从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。植酸酶活性（μmol/h/g土样）=（△A0.0084）÷0.8795×V反总÷W÷T=0.82×（△A0.0084）V反总：反应总体积，0.52mL；T：反应时间，24h；W：样本质量，0.03g。注意事项：1、显色剂需要临用前依据用量配制，每一瓶是10个样本

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