中药制剂的含量测定专家讲座

暖了，花开了，碧水庭院，该买了！工作在繁荣城市，居住，我更喜欢平静点地方．喜欢那种离尘不离城悠然空间，那种繁荣之外宁静生活．在春暖花开日子，在民心河畔邂逅碧水庭院，多年居住理想，从此，有了清楚图象．第四章

中药制剂含量测定中药制剂的含量测定专家讲座第1页目录§2供试品溶液制备§3惯用定量分析方法§1概述中药制剂的含量测定专家讲座第2页§1概述二、特点：单一成份

君药、珍贵药、有毒药一、目标：控制制剂质量，确保临床用药安全、有效中药制剂的含量测定专家讲座第3页§2供试品溶液制备最大程度地保留被测定组分，除去干扰物质，将被测组分浓缩至最小检测限标准中药制剂的含量测定专家讲座第4页粉碎：目标：①样品均匀；②充分提取提取：关键是提取完全除杂：关键是不损失待测成份浓缩：到达检测限衍生化：定量反应步骤供试品溶液制备中药制剂的含量测定专家讲座第5页关键两步供试品溶液制备样品提取冷浸、回流提取、索氏提取、升华、超声提取、超临界流体萃取样品净化液-液萃取法、色谱法、沉淀法、升华法、消化法、盐析法、水蒸汽蒸馏法中药制剂的含量测定专家讲座第6页索氏提取回流提取特点：无需过滤、提取效率高、所需溶剂少、提取杂质少。但费时、提取不完全特点：对热不稳定或含有挥发性成份不宜使用。提取完全，快速。提取方法回流瓶，0.5~2h索氏提取器，5~8h中药制剂的含量测定专家讲座第7页浸泡过夜挥发性成份20min特点：快速、低温、省时，提取完全特点：操作简单，适于热不稳定样品，且提取杂质少。少有于定量分析。提取方法冷浸水蒸气蒸馏超声提取中药制剂的含量测定专家讲座第8页例：P90~91（本科教材）精密称取…，…，准确加入甲醇50ml，称重，超声提取30min，放冷并再次称重，用甲醇补足其重量特点：计量关系准确※注明超声波频率、功率，以确保重现性最惯用提取方法（HPLC）供试品溶液制备中药制剂的含量测定专家讲座第9页惯用溶剂：正丁醇、氯仿、EtOAc、乙醚屡次萃取（3-5次）调整水相酸度，提取有机酸、有机碱利用盐析作用，降低乳化净化方法液-液萃取法例：P69中药制剂的含量测定专家讲座第10页离子对萃取法：生物碱P125溴百里酚蓝净化方法液-液萃取法溴甲酚绿中药制剂的含量测定专家讲座第11页中药制剂分析惯用方法净化方法色谱法柱大小：长～10cm，内径～10mm步骤：装柱、上样、洗脱、搜集装柱方法：湿法装柱、干法装柱装柱要求：填装均匀、紧密，表面平整中药制剂的含量测定专家讲座第12页色谱柱净化方法柱填料：硅胶、氧化铝、活性炭、键合相硅胶、大孔树脂、离子交换树脂、聚酰胺中药制剂的含量测定专家讲座第13页色谱柱净化方法例：P124生物碱甲醇提→氧化铝→乙醇洗脱氧化铝硅胶酸性吸附剂，强烈保留碱性化合物适合用于中性或酸性成份洗脱次序：极性小→大（正相洗脱）碱性吸附剂，适合用于碱性成份洗脱次序：同硅胶中药制剂的含量测定专家讲座第14页例：三七皂苷甲醇提取→蒸干→水溶解→上样→水洗→70%乙醇洗→搜集色谱柱净化方法大孔树脂分为极性、非极性非极性型（D101等）惯用使用前需要用有机溶剂除去杂质洗脱次序：极性大→小（反相洗脱）中药制剂的含量测定专家讲座第15页例益母草流浸膏中盐酸水苏碱判别取本品10ml，水浴蒸干，残渣加水10ml使溶解，加稀盐酸调整pH值至1～2，…加在强酸性阳离子交换树脂柱（732Na-型，内径0.9cm，柱长12cm）上，以水洗至流出液近无色，弃去水液，再以2mol/L氨溶液40ml洗脱，搜集洗脱液…作为供试品溶液。色谱柱净化方法离子型化合物离子交换树脂中药制剂的含量测定专家讲座第16页洗脱次序：极性大→小（反相洗脱）聚酰胺活性炭非极性吸附剂，除色素P72惯用于黄酮类色谱柱净化方法中药制剂的含量测定专家讲座第17页固相萃取法净化方法C18小柱分开脂溶性和水溶性成份例：P204操作：①柱活化②上样③清洗④洗脱洗脱次序：极性大→小（反相洗脱）P194中药制剂的含量测定专家讲座第18页蒸馏法沉淀法例六味地黄颗粒中丹皮酚含量测定

取本品约2g，研细，精密称定，用水蒸汽蒸馏，搜集馏出液约450ml，置500ml量瓶中，加水稀释至刻度。…274nm波优点测定吸收度…。净化方法用于挥发性成份加入沉淀剂中药制剂的含量测定专家讲座第19页消化法湿法消化：强酸腐蚀干法消化：高温炽灼测定中药制剂中无机元素净化方法中药制剂的含量测定专家讲座第20页注意：各剂型样品预处理标准：应依据被测成份理化性质和存在状态以及各类成份之间相互干扰程度及制备工艺与剂型不一样、赋形剂特点等进行综合考虑

固体制剂：丸剂、片剂、颗粒剂、栓剂、胶囊

半固体制剂：流浸膏、浸膏、糖浆、煎膏

液体制剂：合剂、口服液、酊剂、注射剂中药制剂的含量测定专家讲座第21页片剂：淀粉、糊精、滑石粉、糖精散剂：注意取样代表性蜜丸、糖浆剂、煎膏剂：消除粘性颗粒剂：糖、糊精固体制剂：排除赋形剂影响注意：各剂型样品预处理固体稀释剂：硅藻土P144中药制剂的含量测定专家讲座第22页栓剂：基质（油脂性基质和亲水性基质）滴丸：基质（水溶性基质和水不溶性基质）复方丹参滴丸中三七测定

取本品40丸，加甲醇10ml，振摇10分钟，于4℃放置24小时，使聚乙二醇析出完全，滤过，取滤液作为供试品溶液

注意：各剂型样品预处理中药制剂的含量测定专家讲座第23页注射剂：直接取样合剂、口服液：直接取样或经过分离净化液体制剂：摇匀后再取样西洋参精口服液中人参总皂甙含量测定精密移取待测样品10ml，加入处处理好大孔树脂柱上，加蒸馏水80ml洗柱，洗液弃去，再用70%乙醇100ml洗柱，搜集洗脱液，……酒剂、酊剂：加热蒸去乙醇，然后再用 有机溶剂萃取或柱层析注意：各剂型样品预处理中药制剂的含量测定专家讲座第24页HPLC475GC35UV-vis41TLCS49化学法51其它41§3惯用定量分析方法中药制剂的含量测定专家讲座第25页化学分析法挥发法：如水分测定、灰分测定萃取法：昆明山海棠片药典P492乙醇回流→蒸干→盐酸溶解→氨 →乙醚萃取沉淀法：西瓜霜含量测定适合用于：含量较高成份重量分析中药制剂的含量测定专家讲座第26页化学分析法

酸碱滴定：生物碱、有机酸

沉淀滴定：含Cl-制剂络合滴定：朱砂→硫氰酸铵石膏、白矾→EDTA

氧化还原：雄黄→I2

磁石、赭石→重铬酸钾滴定分析中药制剂的含量测定专家讲座第27页紫外－可见分光光度法（一）基本原理：A=Ecl仪器：紫外-可见分光光度计光源单色器比色皿检测器中药制剂的含量测定专家讲座第28页（二）用途：总成份测定（三）定量方法：①吸收系数法②标准曲线法③对照品比较法紫外－可见分光光度法中药制剂的含量测定专家讲座第29页取本品粉末…，精密称定，…加盐酸-甲醇（1:100）…，回流……置氧化铝柱……用乙醇洗脱，搜集洗脱液，……。……在345nm波长测定吸光度，按盐酸小檗碱（C20H18Cl16NO4）吸收系数（）为728计算※注意：对仪器进行波长校正计算公式：吸收系数法中药制剂的含量测定专家讲座第30页吸收系数法A=0.358w=0.9926gH2O%=8.0%中药制剂的含量测定专家讲座第31页标准曲线法12345cA回归求方程

A=kc

+m注意：供试品浓度应在线性范围内cxAx相关系数r>0.999中药制剂的含量测定专家讲座第32页排石颗粒中总黄酮含量测定对照品溶液制备每1ml含无水芦丁0.2mg测定取本品…照标准曲线…依法测定标准曲线制备精量对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶中，…加5%亚硝酸钠…硝酸铝…氢氧化钠…再加50%甲醇至刻度，摇匀。在510nm下测定A，以A为纵坐标，c为横坐标，绘制标准曲线标准曲线法中药制剂的含量测定专家讲座第33页1、某同学欲用吸收系数法测定三黄片中总生物碱，请设计一个合理供试品溶液制备试验方案2、某同学欲用分光光度法测定冠心丹参片中总皂苷，为除去杂质干扰，请设计一个有效供试品溶液制备方法中药制剂的含量测定专家讲座第34页（一）基本原理A=kw仪器：薄层扫描仪薄层扫描法（TLCS）中药制剂的含量测定专家讲座第35页（二）试验条件λ例：熊果酸薄层扫描法

吸收扫描法光源：氘灯、钨灯扫描方式：锯齿式测光方式：透射、反射

设定散射系数SX双波长扫描法λRλSA中药制剂的含量测定专家讲座第36页例：小檗碱特点：灵敏度高荧光扫描法薄层扫描法光源：汞灯直线式扫描无需曲线校直中药制剂的含量测定专家讲座第37页（三）定量方法Aww1wxw2A1A2Axﭭ

点样量在线性范围内ﭭ

交叉点样：每一样品≥2个点样点ﭭ

市售预制板外标二点法例：P80薄层扫描法中药制剂的含量测定专家讲座第38页气相色谱法（GC）载气色谱柱进样检测器（一）基本原理中药制剂的含量测定专家讲座第39页（二）试验条件

◆固定相：硅氧烷类固定液

◆色谱柱：弹性交联石英毛细管柱◆检测器：FID◆进样量：1~2μl，分流进样，分流比※

特点：适合用于挥发性及易气化成份不一样成份灵敏度不一样进样量重复性差气相色谱法中药制剂的含量测定专家讲座第40页（三）定量方法：内标法选择某纯物质作为内标物，准确称量，加入待测液中，比较待测组分与内标物峰面积相对校正因子：Sx气相色谱法中药制剂的含量测定专家讲座第41页例1马应龙麝香痔疮膏中龙脑含量测定（P84）【校正因子测定】内标：水杨酸甲酯3.0mg/ml对照品：龙脑2.0mg/ml吸收1μl，注入气相色谱仪，计算校正因子【测定法】取本品约1g，……，精密加入内标溶 液10ml，超声……滤过，吸收续滤液1μl，注入气相色谱仪…。气相色谱法中药制剂的含量测定专家讲座第42页iSR【对照品溶液】

iS：3.0mg/mlAs=882R：2.0mg/mlAR=600气相色谱法中药制剂的含量测定专家讲座第43页iSx特点：定量准确度与进样量无关【供试品溶液】

m：1.050g

iS：3.0mg/mlAs=980

Ax

=700气相色谱法中药制剂的含量测定专家讲座第44页系统适用性试验P81◆理论塔板数：n◆分离度：R≥1.5◆拖尾因子：0.95≤T≤1.05◆重复性：n≥5，RSD≤2.0%气相色谱法中药制剂的含量测定专家讲座第45页（一）试验条件色谱柱：ODS（5μm，4.6mm×250mm）流动相：色谱纯，脱气，水相过0.45μm膜检测器：UVD，ELSD高效液相色谱法（HPLC）中药制剂的含量测定专家讲座第46页（二）方法分类1、反相键合相色谱固定相：C18、C8流动相：甲醇-水、乙腈-水洗脱次序：极性大→小对象：低极性成份例：药典P126辛夷木兰脂素固定相：C8流动相：乙腈-四氢呋喃-水高效液相色谱法中药制剂的含量测定专家讲座第47页离子抑制色谱法3.0≤

pKa≤7.