蜜柑大实蝇鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准Methodsforidentificationofjapaneseor[Bactrocera(Tetradacus)tsuneonis(Miyake)]2004-06-01发布国家质量监督检验检疫总局本标准的附录C为规范性附录，附录A.附录B和附录D为资料性附录。本标准由国家认证认可监督委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国广东出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：吴佳教、梁广勤、梁帆、杨国海、胡学难、张志红。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。本标准规定了蜜柑大实蝇的鉴定方法。本标准适用于进口蜜柑大实蝇寄主植物(参见附录A)及其果实时对蜜柑大实蝇的鉴定。蜜柑大实蝇Bactrocera(Tetradacus)tsuneonis(Miyake),属双翅目(Diptera),实蝇科(Tephritid-ae)、寡毛实蝇亚科(Dacinae)、离腹寡毛实蝇属(Bactracera),大实蝇亚属(Tetradacus),主要以幼虫随被害果实(有时也能随被害种子)作远距离传播，其卵也可随果实传播，围蛹则可随果实的包装物或寄主植物所附土壤传播。蜜柑大实蝇的形态特征、寄主植物、传播途径及生物学特性为制定鉴定方法提供了依据。3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。位于额区靠头顶的一对或二对梨的绕称。下额眶景inferiorfronto-orbitalbristles位于额区上额眶繁之下的数对聚的统称。位于头顶，两复跟之间，单眼三角区周田的二对鬃(分别称内顶聚和外顶聚)的统称。中胸盾片的前侧方略为隆出的区域。府胛与翅基之间的背侧板上三角形隆起。小盾前鬃prescutellarbristles小盾片前方，近盾片后缘的一对鬃。小盾片上的一对或二对槃。中胸背板侧缘，前翅翅基正上方的一对躲。后翅上鬃posterlorsuppa-alarbrlstles中胸青板后侧角，翅基之上的一对聚。中侧板聚mesopleuralbristles中胸侧板上，在背侧板胛之下的鬃。背侧区上的二对梨，分别位于三角形背侧板甲之端部和肩胖与背侧板胛之间。肩板鬃scapularbrlstles位于中胸背板前缘的槃的统称。中胸侧板条mesopleuralstripes位于胸部侧面，盖住中胸上前侧片后缘和上后侧片前缘，并常延伸到下前侧片上缘的一对黄色条带。中胸背板缝mesomotalsuture中胸背板上由背侧板胛内缘至中胸背板中央的一条凹线。始于中胸缝或其之前，沿中胸背板侧缘的一对黄色带或黄色条。位于中胸背板中线上的一条黄色带。4仪器、用具和试剂4.1仪器与用具体视显微镜、测微尺、干燥箱、冰箱、温湿度计、量简(50mL,500mL)、烧杯数个(大号、小号》、培养皿、小型干燥器、剪刀、解剖刀、解剖针、昆虫针(00号、四号)、载玻片、盖玻片、标签纸、三级台、三角纸、酒精灯、玻璃棉、养虫杯、养虫盒、养虫箱、防虫网罩《用40月纱网做村底)、白瓷盘(大号、小号)。10%氧氧化钠(或10%氢氧化钾)溶液、封片胶、苯酚、二甲苯，75%乙醇、丙三醇、水合三氯乙醛、阿拉伯树胶粉、燕馏水。4.3试剂的配制4.3.110%氯氧化钠(或10%氯氧化钾)溶液的配制称取氢氧化钠(或氮氧化钾)10g,加入100mL.蒸馏水，溶解后即可。4.3.2封片胶的配制称取阿拉伯树胶粉30g于烧杯中，加入50mL蒸馏水(最好是温水以加速溶解)。溶解后，加入200mL水合三氯乙醛及20mL丙三醇，置于55℃~60℃的干燥箱内。一天后，用玻璃棉过滤(过滤时仍置于55℃~60℃的干燥箱内进行)。4.3.3保存液的配制量取75%乙醇100mL,加入1mL丙三醇。5实验室鉴定5.1鉴定前的培养方法5.1.1即或幼虫的培养将现场采取的卵和幼虫部分个体制成鉴定标本，其余个体继续用原寄主果实培养。具体的培养方法是；将带有卵或幼虫的寄主果实故在小号白瓷盘里，然后将小号白瓷盘故在装有自来水的大号白瓷盘内，再用防虫网罩盖住小号白瓷盘，罩的下方边缘浸没于大号白瓷盘内的水中，置于温度为22℃~28℃,湿度为50%～90%的环境中培养5d～10d。在样品培养过程中，感染在果实中的卵或幼虫发育至老熟幼虫时将会弹跳入大号白瓷盘的水中，易于发现。5.1.2围蛹的培养取一盛有半干湿(含水量约5%)洁净细砂的养虫杯，将现场检疫收集的或室内培养得到的围蛹埋入距细砂表面3cm～5cm处(若是老熟幼虫则可直接将其置于细砂表面，幼虫将钻入砂中化蛹),然后置于养虫箱中培养，待成虫羽化。培养环境温度为22℃~28℃,湿度为50%～90%,培养过程中注意保湿。5.1.3初羽化成虫的饲养成虫羽化后，悬挂相应寄主果实切片于养虫箱内供其取食，待成虫班纹的色泽和大小稳定后(约需5d),收集成虫并置于冰箱冷冻层0.5h～1h,杀死，待鉴定。5.2标本的预处理5.2.1成虫还软处理如果成虫虫体已干硬，在制作标本前应进行还软处理。具体方法是：取一小型干燥器，加入干净细砂约2cm,加水至漫过细砂表面约1em,并滴加数滴苯酚以防标本腐烂，上层故待还软的成虫标本，密闭一天即可。5.2.2成虫标本制备取00号昆虫针，借助三级台插入三角纸尖角近处，然后将针尖端从成虫中胸的腹面插人，再用四号昆虫针插入三角纸另两个角中央近边缘处，固定，插上相应的标签。5.2.3成虫外生殖器封片标本的制作用解剖刀取成虫标本腹节，置于预先配制好的10%氢氧化钠(或10%氢氧化钾)溶液的小烧杯中，浸泡12h(或煮沸3min)后取出，用燕馏水法净，在体视显微镜下，用解剖针挑取所需的部位(阳茎或产卵器)并置于载玻片上，滴上封片胶，再用解剖针将所需的结构展开，然后盖上盖玻片，附上相应的标签。5.2.4幼虫封片标本制备用昆虫针在幼虫体壁上刺截数个小孔，置于10%氢氧化钠(或10%氢氧化钾)溶液中浸泡12h(或意沸3min)后取出，用解剖针将幼虫体中的残留物挤压出并用蒸馏水洗净、在体视显微镜下挑取口钩、前气门和后气门等部位，置于载玻片上，滴上封片胶，用解剖针将所挑取部位展开，最上盖玻片并附上相应的标签，5.3鉴定特征(见附录B、附录C和附录D)体大型，黄褐色。雌虫体长(不包括产卵器)10.0mm～12.0mm,翅长8.8mm～10.1mm。雄虫体长9.9mm~11.0mm,翅长8.2mm~10.1mm。头部黄色或黄褐色，单眼三角区黑色，颜面班棱形或长椭圆形，黑色；触角黄褐色，触角芒暗褐色，其基部近黄色。具一对上额距聚和二对下额眶聚，内、外顶聚各一对。5.3.1.3.1中胸背板中胸背板红褐色，中央有“人”字形的褐色纵纹，肩肝和背侧板胛以及中胸侧板条均为黄色，中胸侧板条宽，几乎伸抵肩胛的后缘，避后侧黄色条始于中胸背板缝并终于翅内聚之后，呈内弧形弯曲，具缝后中黄色条。5.3.1.3.2小盾片小盾片黄色。翅膜质透明，前缘带宽，与R脉汇合，并在翅端R,脉的下方和M₁脉之间略扩展；在R₂脉与R₁:脉之间的暗褐色前缘带上有一空白透明长形条，无臀条。是近红褐色，胫节色较深。5.3.1.3.5胸部的梨序小盾聚一对，无小盾前暴。后翅上熙及翅内躲各一对，前翅上躲两对(有时一对，或有时一侧二根而另一侧仅具一根),中侧板梨缺，背侧梨网对，肩板梨两对(内对常较外对弱小)。腹部椭圆形，黄褐色至红褐色，背面具一暗褐色到黑色中横带，自腹基部延伸到腹部末端或在末端之前终止；第三腹节背板前缘有一暗褐色到黑色横带，与上述中纵带相交呈“十”字形；第一节呈长方形，第四和第五节背板两侧各有一对暗褐色到黑色短带，第二至四节背板侧缘均有照色短条斑纹。雌虫第六节背板陷于第五节的下方，第七至九节形成产卵器。产卵器的组成是，第七节为基节，形如瓶状，暗褐色；第八节为中节，具缝区；第九节为产卵管节，端呈三叶状，长度在2.5mm以下，具端前刚毛四对。产卵器基节长度约等于腹部第二至五节长度之和，其后端狭小部分短于腹部第五背板长。雄虫第三腹节背板具栉毛，第五腹板后缘向内凹陷的深度达此腹板长度的五分之一。阳茎端暗褐色，其上透明的蘑菇状物痛半部密生透明小刺。5.3.2.1三龄幼虫体长5.0mm~15.5mm。口钩发达，黑色，长0.21mm～0.38mm。前气门丁字形，外缘呈较平直，略弯曲，有指突33个～35个。体节第二至四节前端有小刺带，腹面仅第二至三节有刺带。后气门具气门裂三个，气门毛五丛。5.3.2.2二龄幼虫体长3.4mm～8.0mm。口钩长0.16mm～0.17mm。前气门外综中央深凹，有指突28个~30个。后气门具气门裂三个，气门毛五丛。5.3.2.3一龄幼虫体长1.25mm～3.50mm。口钩小形，长0.04mm～0.07mm,前气门尚未发现，后气门甚小，由二片气门裂组成，裂孔呈马踏形，气门毛四丛。卵长1.33mm～1,60围蛹长8.0mm～9.8mm,桶圆形，黄褐色至淡黄色。6鉴定结果判定6.1亚科的判定翅Sc脉突然朝前弯曲成近90°,外弯段变弱，终于前缘脉的断裂处，R₁脉的背侧有小鬃；cup室具一尖角延伸。单眼后槃均细长且通常为黑色。中胸背板具肩板祭，上前侧片的后区为一顶缝将上前侧片的其余部分清楚地分离。翅通常沿R,+。脉背而远至rm横脉处具小聚。6.2属的判定触角第三节长至少为其宽的三倍；翅cup室狭，其延伸部分甚长，翅上斑纹通常汇合成前缘带和臀条。腹部各节背板分离。6.3亚属的判定体大型(长10.0mm以上);中胸背板缝侧黄色条前方向内弯，无小盾前躲，具一对小盾聚。腹部第一节背板近长方形，第三至五节背板呈圆形，产卵器基节呈球状。雄虫第三节背板具栉毛，加翅叶不明显。6.4种的判定以成虫形态特征为依据，符合上述形态特征的个体可确定为蜜柑大实蝇。成虫以外虫态的形态特征描述仅做参考。7.1成虫标本及玻片标本的保存将制好的成虫标本或相应的玻片标本，置于干燥箱中干燥数日，然后移入标本柜中保存，保存过程中注重防虫和防潮。7.2幼虫、围蛹标本的保存将采集到的