液相色谱仪柱压问题处理方法 液相色谱解决方案

第第页液相色谱仪柱压问题处理方法液相色谱解决方案液相色谱仪是一种常见的液相色谱仪，这种仪器具有“四高一广”的特点，既高压、高速、、高灵敏、应用范围广。作为常见的科研分析仪器，在确保检验的准确性的同时，液相色谱做到了色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，是科研人员进行研究的有利工具。当然作为一款精密仪器，液相色谱仪对于操作具有一定的要求，而在使用时，难免可能发生一定的问题，今天我们就来讲讲面对柱压问题，使用液相色谱仪应该注意的要点。对于液相色谱仪来说，柱压的稳定与色谱图峰的好坏、柱效、分离效果及保留时间等都有所关联。一般来说，柱压问题主要集中在压力过高、压力过低两方面。压力过高压力过高一般指液相色谱仪使用时压力突然升高的问题。原因1：流路中存在堵塞解决方法：进行分段检查。首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。处理方法用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。处理方法将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI以下，过滤白头正常。把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。问题无法解决可考虑更换色谱柱。原因2：流速设定不正确解决方法：重新设定正确流量。原因3：流动相配比不正确解决方法：不同配比的流动相其黏度系数不相同，较高黏度的流动相相应的系统压力也大，如果可能可更换黏度较小的溶剂或重新设定配比。原因4：系统压力零点漂移解决方法：调节压力传感器的零点。压力过低原因1：系统泄漏解决方法：寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。拆下柱子加适当力拧紧或衬四氟薄膜。原因2：泵里进混入空气，此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体解决方法：打开Purge阀，用3~5ml/min的流速冲洗，如果不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。原因3：无流动相流出解决方法：检查储液瓶中有无流动相，沉子是否浸在流动相中，泵是否运行。原因4：参比阀未关闭解决方法：将流速降低后关闭参比阀。一般降至0.1～0.2mL/min后关闭参比阀。液相色谱柱的安装

液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工获得正确可靠的实验数据的必经之路。

液相色谱柱的安装：

1、液相色谱柱的结构：

a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。

柱接头采用低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3／16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。7／16英寸外螺纹与1／4英寸柱管(Φ6.35mm)连接，中间放置压坏用于密封。3／16英寸的内螺纹与1／16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接，中间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量减少柱外死体积，在安装色谱柱时，用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底，然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2．5mm长或其他固定尺寸)。

在两端柱接头内，柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网)，用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。

b、柱填料：

液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。

正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10?m的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。

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