临床检验基础学知识点

临床检验基础学知识点临床检验学临床检验医学clinicallaboratorymedicine血液三大尿液常粪便规体液脱落细胞学血型与血库临床检验医学的定义及研究范围临床检验医学的发展史及现状临床检验基础教学的目的学好临床检验基础的要求临床检验基础的发展史①古代最早是检测尿液开始的。②17世纪的显微镜的发明推动了临床检验的发展。AntonyvanLeeuwenhoek③上世纪50年代，库尔特（Coulter）电阻抗原理的提出，使临床检验从手工步入自动化、电脑化，使得检验变得简便、快速、精密度高更。⑤目前，试剂更加批量化、配套化、专业化和多样化⑥检验液更加重视检验方法的标准化和质量控制，实施全面的质量控制和质量管理。⑦试剂和仪器的更新使得检验更便捷：如床边检测(pointofcaretest，POCT），使检测标本更新鲜、交叉污染率低、更接近病人的生理和病理情况。临床检验基础的现状（二）：实施与保证全面质量管理1.分析前：生理变化、饮食因素、药物因素、标本采集与保存等。2.分析中：检测方法、仪器设备性能与质量、试剂质量等。3.分析后：发报告的把关。复核其信息内容如姓名、性别、年龄、住院号、与疾病符合度等。临床检验的特点：1.操作的自动化2.方法的标准化3.技术的现代化4.试剂的商品化5.计量单位的国际化6.质量管理的全程化7.生物安全的严格化8.检验人员的合格化绪论临床检验医学的定义及研究范围临床检验医学的发展史及现状临床检验基础教学的目的学好临床检验基础的要求临检的基础教学目的:1.疾病诊断和鉴别诊断2.疾病疗效监测和预后观察3.疾病预防4.科学研究教学目标：掌握：皮肤采血方法，Hb成分、种类及测定临床意义。熟悉：血液的组成、理化性质和功能，Hb的结构，参考范围。第一章chapter1血液标本采集和血涂片制备bloodcollectionandbloodsmearpreparation血液组成离心后(写)血液主要理化性质①颜色：动脉血——鲜红色静脉血——暗红色血浆——浅黄色高脂膳食——乳白色溶血——血浆呈不同程度红色②量：成人约占体重的7%～9%，平均血量5L左右。③pH：7.35～7.45④比密：1.05～1.06⑤渗透压：290～310mosm/Kg·H2O第一节血液标本采集bloodcollection血液标本的采集是分析前质量控制的重要环节一、标本采集的一般要求1.检验申请单：患者、临床信息完整2.标本采集和处理具体要求：标本种类标识、采集时间、急诊和危重患者信息、3.标本信息完整性：标本的防腐、保温等。4.标本拒收：根据标本接收的文件不符合者。二、血液标本类型1.全血(wholeblood)：静脉、动脉、毛细血管2.血浆(Plasma)：全血加入抗凝剂离心后的上清液。3.血清(serum)：血液凝固后离心所得上清液。4.分离或浓缩的血细胞成分：如血小板、白细胞、单个核细胞等。三、血液标本采集方法（一）皮肤采血（二）静脉采血（三）动脉采血（一）皮肤采血法适用于血量＜0.1ml的检验项目如RBC计数、WBC计数、Plt计数、Hb、ESR微量法等的测定等。器材：采血针专用的“采血针”或三棱针，用前应高压灭菌，一人一针。专用采血针三棱针采血部位（1）手指采血：WHO推荐采取外周血以左手无名指或中指指采血部位尖内侧优点：方便、获较多血量结果比较恒定缺点：与静脉血仍存在某些差异。（2）耳垂采血：优点：痛感轻、方便、适用于反复采集缺点：血循环差受气温影响大、检查结果不恒定、RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高，特别是冬季。（3）其他拇指、拇趾或足跟采血——半岁以下婴幼儿皮肤完整处——严重烧伤者采血操作1、准备：2、采血部位按摩：3、消毒皮肤：4、针刺：5、擦去第一滴血后吸血：6、压住伤口片刻：注意事项（1）采血部位皮肤完整。（2）无菌技术操作：防采血部位感染，一人一针。（3）采血针刺入皮肤应深浅适中。（4）多项检查时，采血次序为：Plt计数→RBC计数、Hb→WBC计数与分类。（5）取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入堵塞仪器。第二章chapter2血液一般检验bloodgeneralexamination第一节红细胞检查Redbloodcell(erythrocyte)examination红细胞检查内容：RBC是血液中最多的一种血细胞，其检查包括红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞形态观察、红细胞平均指数计算、网织红细胞计数、红细胞沉降率等。形态：无核，双凹圆盘形不染色：呈草黄色RBC的生成及破坏：（见PPT）早幼红细胞中幼红细胞干细胞原始红细胞晚幼红细胞网织红细胞成熟红细胞一、红细胞计数（redbloodcellcount）【原理（principle）】血液用等渗稀释液稀释一定倍数→滴入血细胞计数盘→显微镜下计数一定范围内的RBC数→换算得每升血液中的RBC数。【参考范围（range）】成年女性:（3.5～5.0）×1012/L成年男性:（4.0～5.5）×1012/L新生儿：（6.0～7.0）×1012/L婴儿：（4.0～4.3）×1012/L儿童：（4.0～4.5）×1012/L【临床意义（clinicalmeaning）】一、生理性变化(一)生理性增多1.机体缺氧而使RBC代偿性↑：新生儿、高原生活、强烈的体力劳动2.成年男性比女性高：男性在6～7岁时最低，25～30岁时达高峰。女性21～35岁维持最低水平。3.其他：抽烟、肾上腺素及糖皮质激素的应用等(二)生理性减少1.生长发育造血原料相对不足：从6个月至2岁婴幼儿2.造血功能减退：部分老年人生理性贫血3.血容量增加：妊娠中晚期二、病理性变化(一)病理性增多1.相对增多：血液浓缩2.绝对性增多：①继发性增多：如心肺疾病②原发性增多：如真性RBC增多症高于6.8×1012/L应采取治疗措施(二)病理性减少1.RBC生成减少：※骨髓功能衰竭：AA※造血物质缺乏或利用障碍：IDA、MA2.RBC破坏过多：※内在缺陷※外在异常3.RBC丢失过多：低于1.5×1012/L应考虑输血二、血红蛋白测定Hemoglobinmeasurement(一)Hb分子结构及成分：血红蛋白(hemoglobin，Hb或HGB)是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质，由珠蛋白和亚铁血红素组成。0.347g铁相当于100gHb;每克Hb可携带1.34ml氧。4.其它：①还原Hb：Fe2+②氧合Hb：与O2结合的Hb③Hb衍生物：HbCO、SHb④高铁Hb：Fe3+2014年6月17日59P24(二)Hb的测定：ICSH(Internationalcouncilforstandardizationhaematology)推荐氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN）1.原理:Hb是色素蛋白，在血液中以多种形式存在，利用高铁氰化钾将Hb氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi可与CNˉ结合成氰化高铁血红蛋白，在540nm处有一吸收峰，用分光光度计测定其吸光度，换算成每升血液中血红蛋白的含量。方法学评价（1）氰化高铁血红蛋白测定法优点：①操作简单、显色稳定，便于推广。②转化液较稳定，易保存。③除SHb外各Hb均可测读A后直接计数。④HiCN参考品可长期保存，便于质控。缺点：①KCN剧毒，易污染环境。②不能测SHb，HbCO转化慢。③浊度高引起Hb浓度假性增高：高球蛋白血症，脂血，试剂混浊，WBC和Plt高。（2）十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS－Hb）测定法SDS能破坏WBC，摩尔消光系数未定。（3）碱羟血红蛋白测定法：HbF不能转化，最大吸收峰在575nm。（4）叠氮高铁Hb测定法：具有与HiCN法相似的优点，但仍存在试剂污染。（5）溴代十六烷基三甲铵血红蛋白测定法：不破坏WBC，精密度、准确性略低。2014年6月17日65P254.参考值新生儿：170～200g/L女：110～150g/L男：120～160g/L70岁以上老年人：男：94～122g/L女：87～112g/L质量控制（1）血清浊度：（2）器材及试剂质量：（3）技术与操作：（4）废弃物的处理：临床意义与RBC计数相似（1）鉴别贫血类型：IDA：RBC↓Hb↓↓MA：RBC↓↓Hb↓（2）影响检验结果的因素：血液总容量改变全身血浆容量改变教学目标：掌握：血红蛋白测定的原理、Hb成分、种类及测定临床意义；网织红细胞的形态、计数方法及测定的临床意义。熟悉：血涂片制备与染色、红细胞的形态学改变。了解：Hb测定的方法学评价。血红蛋白测定Hemoglobinmeasurement(一)Hb分子结构及成分：血红蛋白(hemoglobin，Hb或HGB)是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质，由珠蛋白和亚铁血红素组成。第三节血涂片制备与染色preparationandstainingofbloodsmears血涂片的制备（一）载玻片和推片：载玻片推片载玻片：清洁、干燥、中性、无油腻。推片：边缘光滑。（二）血涂片制作：良好血涂片：①血膜至少长25mm。②边缘整齐，两侧、两端留有空隙。③头体尾分明：细胞从厚区到薄区逐步均匀分布。④血膜末端无粒状、画线或裂隙。(三)制备血涂片的影响因素推制适当的血膜角度大，速度快→太厚，太短推片边缘不光整→刷尖用力不均→厚薄不匀血量过多、血液粘度高→无尾载玻片有油腻血涂片染色染色就是染料透入被染物并存留其内部的过程。1..瑞氏染色法是血液染色最经典和最常用的染色法。2.吉姆萨染色法3.瑞氏吉姆萨复合染色法4.细胞活体染色法5.巴氏染色法6.苏木素-伊红染色法（一）瑞氏染色法（WrightStain）1.瑞氏染料成分：⑴美蓝（又称亚甲蓝，methyleneblue，M+）通常为氯盐，氯化美蓝(MCl)，阳离子，一种碱性染料。⑵伊红（eosinEˉ）：通常为钠盐(NaE)，阴离子，一种酸性染料。⑶Wright染料MCl+NaEME+NaCl⑷甲醇（溶剂、固定剂）：①MEM++Eˉ②具有强大的脱水力。可将细胞固定为一定形态；使蛋白沉淀为颗粒状、网状等结构；增强染色效果；染色原理：物理的吸附作用和化学的亲和作用正常情况染色结果：外观：淡紫红色镜下：①RBC呈粉红色，略有碟状感。②WBC浆中颗粒清楚，并显示各种细胞特有的色彩。③细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。RBC嗜碱性颗粒中性颗粒嗜酸性颗粒3.PH对细胞染色的影响：PH↓→正电荷增多→易与伊红结合→染色偏红PH↑→负电荷增多→易与美蓝结合→偏蓝染色的质量保证染液质量染色时间与染液浓度染色过程染液的冲洗脱色与复染4.方法学评价：瑞氏染色法：优点：对于细胞质成分及中性颗粒等的染色可获得很好的染色效果，缺点：对细胞核的染色不如吉姆萨染色吉姆萨染色：原理：同瑞氏染色。优点：本法对细胞核染色较好，结构更清晰。缺点：胞质和中性颗粒染色较差。瑞-吉复合染色：取长补短。chapter2血液一般检查bloodgeneralexamination第一节红细胞检查Redblloodcellll(erythrocyte)examiinatiion红细胞形态检查Redblloodcellllmorphollogyexamiinatiion正常红细胞形态正常色素性normochromatic异常红细胞形态红细胞大小异常红细胞形态异常红细胞血红蛋白含量异常红细胞结构及排列异常1.RBC大小异常小RBC大RBC巨红细胞RBC大小不均d<6umd>10umd>15um直径相差一倍以上2.RBC形态异常：球形RBC椭圆形RBC靶形RBC口形RBC镰形RBC棘形RBC裂片RBC缗钱状RBC泪滴形RBC3.红细胞内血红蛋白含量改变正常色素性normochromatic低色素性高色素性嗜多色性hypochromaticHyperchromaticpolychromaticRBC中出现异常结构：嗜碱点彩RBC染色质小体basophilicstipplingcellHowell-Jolly’sbody有核RBC疟原虫卡波环cabotringnucleatederythrocyteplasmodium六、网织红细胞计数Retiicullocytecount1.定义介于晚幼红和成熟红细胞之间未完全成熟的RBC。胞质内含尚存留多少不等的嗜碱性物质RNA，经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成颗粒，其颗粒又可联缀成线而构成网状。原红早幼红中幼红晚幼红网织红RBC2.分级：I型丝球型：仅存于骨髓II型网型III型破网型：外周血少量IV型点粒型：多见于外周血3.Ret计数法（1）显微镜计数法【原理】阳离子染料进行活体染色，在显微镜下计数。【试剂】①新亚甲蓝N溶液：②煌焦油蓝溶液：【参考值】成人：0.008～0.02或（25～75）×109/L新生儿：0.02～0.06【方法（method）和质量控制】1混匀1制成薄血涂片染液新鲜2d血液2d染15~20min数1000Ret绝对值个RBC中计算出分数=Ret分数×RBC/L的Ret（2）Ret计数仪法（3）血液分析仪计数法（4）流式细胞仪计数法4.临床意义（1）Ret增高：表示BM红系生成旺盛①溶血性贫血：可高达0.20以上，急性失血后5－10天Ret达高峰，2周后恢复正常。②放、化疗后，造血恢复时：Ret可短暂而迅速增高。③Ret可作为贫血治疗疗效观察指标：※抗贫血药物治疗后1－2天开始高，1周左右达高峰，贫血愈严重，Ret升高超高，且Ret先于RBC和Hb增高。※抗贫血药物治疗后，Ret不升高，说明治疗无效或骨髓造血功能有障碍。④骨髓移植后监测造血功能受抑或恢复：移植后21天，如＞15×109/L，表示无移植并发症。如＜15×109/L，且Plt、WBC增高，可能移植失败。Ret减少：表示骨髓造血机能减弱。常见再生障碍性贫血：Ret＜0.005绝对值＜15×109/L，为其诊断标准之一。※掌握内容：静脉采血的部位、抗凝剂的使用范围、HCT定义、临床意义,ESR定义、影响因素、临床意义,红细胞三个平均指数的计算及意义。※熟悉内容：静脉采血,抗凝剂,ESR、HCT测定的方法,参考值。※了解内容：采血操作对检验结果的影响，血液标本运送、保存与处理。静脉采血法Veinpunctureforbloodcollection凡需血量较多的检查＞0.2ml如：ESR、Hct、凝血因子的测定等。1.普通静脉采血法2.真空采血法1.普通静脉采血法[准备器材][部位]体表浅静脉常用：肘部静脉幼儿可用：颈外静脉[采血操作和注意事项]真空采血法(负压采血法)主要原理是将有胶塞头盖的采血管抽成不同的真空度，利用针头、试管和针筒组合成全封闭的真空采血系统，实现自动定量采血。[主要器材]①双向采血针②真空采血管穿刺针刺塞针[主要器材]双向采血针、真空采血管[真空采血法的优点]①计量准确②传送方便③封闭无菌④标识醒目⑤刻度清晰⑥容易保存等。[采血方法]※硬接式双向采血针的采血操作※软接式双向采血针的采血操作穿刺针刺塞针四、血液标本抗凝bloodspecimensanticoagulation抗凝：用物理或化学的方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固。抗凝剂：能够阻止血液凝固的物质。1.乙二胺四乙酸（EDTA）盐（ethylenediaminetetraceticacid）①原理：与血钙离子形成螯合物。②用量：15g/LEDTA水溶液0.4ml：5ml血液③适用于：血常规检查、Hct、Plt计数④不适用于：凝血象检查和血小板功能试验2.枸橼酸钠（trisodiumcitrate）①原理：与血中钙离子形成可溶性螯合物②用法：109mmol/L与血1：9或1：4③适用于：血栓与止血检验、ESR、输血保养液。④不适用于：血细胞计数，Hct(不能干燥)3.肝素（heparin）：①原理：加强AT-III灭活丝氨酸蛋白酶，从而具有阻止凝血酶形成②用量：1g/L水溶液，0.5ml干燥后可抗凝5ml血液。③适用于：RBC脆性试验、Hct及细胞培养等。④不适用于：WBC和Plt计数、血涂片检查、凝血象检验。4.草酸盐（oxalate）：①原理：草酸根与血液中钙离子生成草酸钙沉淀。②用法：0.1mol/L浓度与血液之比1：9③适用于：制备正吸浆。④不适用于：对凝血因子V保护功能差，影响PT测定；沉淀物影响自动凝血仪的使用。第一节红细胞检查Redblloodcellll(erythrocyte)examiinatiion四、红细胞比容测定红细胞比容（hematocrit，Hct或packedcellvolume，PCV）是指在一定体积全血中RBC所占容积的相对比例，与RBC数量和平均体积有关。（一）检测方法1.离心沉淀法：温氏法、微量血细胞比容法2.血液分析仪法：（二）温氏法的试剂、器材和质量控制长毛细滴管温氏管血浆层白色乳糜层灰红色层暗红色层含还原HbHct含氧RBC层(三）方法学评价]（四）参考值男：0.380～0.508女：0.335～0.450（五）临床意义1.HCT降低：①各种贫血②稀释血症2.HCT增高：①血浆丢失②RBC量增加3.临床补液量的参考：4.用于计算MCV和MCHC五、红细胞平均指数1.平均红细胞容积：(meancorpuscularvolume，MCV)RBC群体中各个RBC体积的平均值。MCV＝×10（fL）1fL=10ˉLRBC/L2.平均红细胞血红蛋白含量：（meancorpuscularhemoglobinMCH)RBC群体中各个RBC血红蛋白含量的平均值。Hb(g/L)MCH=RBC/L×10pg1pg=10g3.平均红细胞血红蛋白浓度：(meancorpuscularhemoglobinconcentrationMCHC)平均每升RBC中含有的Hb浓度Hb(g/L)MCHC=Hct4.参考值:MCV(fL)MCH(pg)MCHC(g/L)成人80－10026－34320－3601～3岁79－10425－32280－350新生儿86－12027－36250－3702014-6-17335.临床意义贫血的形态学分类MCV(fL)MCH(pg)MCHC(g/L)病因正常细胞性贫血80－10027－34320－360急HA、AA单纯小细胞性贫血＜80＜27320－360慢性炎症小细胞低色素性贫血＜80＜27＜320IDA大细胞性贫血＞100＞34320－360MA八、红细胞沉降率测定erythrocytesedimentationrateESR（一）定义：指在一定条件下，离体抗全血中的RBC自然下沉的速率。（二）魏氏法的试剂、器材和质量控制ESR1h后1.6ml血0.4ml抗凝剂三、ESR影响因素血浆或RBC本身发生改变则使血沉发生变化。1.血浆因素：纤维蛋白原球蛋白增高↑ESR加快+-胆固醇白蛋白↓—糖蛋白ESR减慢卵磷脂2.红细胞因素：①RBC数量②RBC形态ESR快正常数量数量减少ESR慢3.抗凝剂影响实验温度血沉测定值校正值4.温度的影响温度升高，ESR增快5.血沉管因素：血沉管倾斜30，血沉加快30%(四)参考值<50岁男：0~15mm/h女：0~20mm/h（五）方法学评价(六)临床意义：对疾病的鉴别和动态观察具有一定的参考价值1.生理性增快：①女比男快②妊娠＞3月③＞50岁④妇女月经期2.病理性增快：①组织损伤、坏死和大手术：心肌梗塞和心绞痛鉴别。②恶性肿瘤：良、恶性肿瘤的鉴别。③各种炎症：急性细菌感染、风湿病活动期、结核病活动期等。④高球蛋白血症：MM、SLE、肝硬化、慢性肾炎等。⑤高胆固醇血症：动脉粥样硬化、糖尿病等。3.ESR减慢:真性红细胞增多症、RBC形态异常、低纤维蛋白原血症等。★白细胞检验Whitebloodcell(WBC)orLeukocyte(LEC)外周血WBC：RBC＝1：(500～750)（一）白细胞的组成：WBC单核细胞monocyte淋巴细胞lymphocyte粒细胞granulocyte（中性粒细胞neutrocyte，NC嗜酸性粒细胞eosinophil，Eos嗜碱性粒细胞basophil，Bas）（二）WBC起源及分布粒细胞的发育过程如何计数WBC？白细胞计数whitebloodcellcount测定单位体积的外周血（循环池）中各种白细胞的总数。【检测原理】血液经一定倍数稀释并破坏红细胞→计数→换算【试剂】白细胞稀释液：2%冰醋酸冰醋酸：溶解红细胞，同时固定核蛋白10g/L美蓝：数滴→可使核略为着色。2014-6-176【器材（equipment）】1、微量吸管：2、血细胞计数盘：0.1mm【方法和质量控制】11混匀稀释液血20ul充池0.38ml计数计算WBC/L＝N/4×10×106×20＝N/20×109血涂片WBC密度与WBC的总数的关系WBC血涂片WBC个数/HP(4～7)×109/L2～4(7～9)×109/L4～6(10～12)×109/L6～10(13～18)×109/L10～124.减少计数域误差的措施WBC措施＜3×109/L扩大计数范围、缩小稀释倍数＞15×109/L增加稀释倍数、适当减少加血量参考值：成人：（4－10）×109/L儿童：（5－12）×109/L6个月－2岁：（11－12）×109/L新生儿：（15－20）×109/L5.方法学评价：显微镜法血液分析仪法二、白细胞分类计数Diifferentiialllleukocytecount，DLC(一)定义及方法：根据白细胞的形态进行分类计数，求得各种白细胞的百分比和绝对值。采血制备良好血涂片染色观察（二）外周血五种常见白细胞的形态①中性粒细胞②嗜酸性粒细胞③嗜碱性粒细胞④单核细胞⑤淋巴细胞细胞胞体胞浆胞核Neud:10～15um较多细小均匀的杆状、分2～5叶，染色淡粉红中性颗粒质小块状染成深紫红色Eosd:13～15um充满粗大、紧密排列的桔红色嗜酸性颗粒分两叶，呈八字形也有3～4叶者Basd:10～12um少量粗大小不均，紫黑色嗜碱性颗粒常被颗粒遮盖，分叶不明显，模糊不清感CellLymphocyte胞体小d：6－10um大d：10－15um胞浆透明蓝色，有少量粗大，但大小不等的紫红色颗粒胞核粗糙致密，排列均匀，常隐约成块。CellMonocyte胞体d：14－20um胞浆淡蓝或灰蓝，毛玻璃样半透明，含有细小、粉尘状紫红色颗粒胞核大，不规则,染色质细致、疏松如网状(三)WBC分类计数法和质量保证：①血涂片制备和染色：②低倍镜：③油镜：数100－200个WBC分类计数，求出各种WBC所占比值。⑤若有幼稚或异常WBC应分类鉴定，包括在WBC百分率中。⑥若有幼稚红细胞，应逐个计数，但不包括在WBC总数中。⑦有寄生虫和细胞形态有异常改变应报告。（(四)WBC分类计数参考值(成人)：WBC百分率(%)中性杆状核1～5分叶核50～70Eos0.5～5Bas0～1LC20～40MC3～8（五）白细胞计数与分类的临床意义(1)生理变化①年龄：Neu和Lym两次交叉②日间变化：安静、休息＜活动、进食，早晨＜下午③运动、疼痛和情绪的影响：④妊娠与分娩：↑，NC比值正常。分娩2－5天内恢复正常，如再次升高，有产后感染的可能性。（2）中性粒细胞病理性增多1).反应性增多★①急性感染：最常见原因。a.急性化脓性胆囊炎：WBC＞20×109/Lb.急性胰腺炎：WBC＞10×109/Lc.肠缺血、坏死：WBC＞10×109/L，肠坏死的指标。d.局限性感染：轻度感染：WBC可正常；中度感染：WBC（10~20）×109/L；重度感染：WBC（20~30）×109/L②严重的组织损伤：③大量血细胞破坏和急性内出血：④非造血系统恶性肿瘤⑤急性中毒：2异常增生性增多：白血病：急性：WBC（10~50）×109/L；慢性：WBC（100~300）×109/L；类白：WBC＜100×109/L。恶性肿瘤：肝癌、胃癌其他：骨髓增殖性疾病、类风关、自身免疫性疾病、缺氧等。类白血病反应：机体对某些刺激因素所产生的类似白血病表现的血象反映。数量增多，并可出现幼稚细胞，但红细胞和血小板一般无变化，病因去除后逐渐消失。(3)中性粒细胞减少①某些感染：伤寒、副伤寒等②某些血液病：③慢性理化损伤：药物、射线等④脾功能亢进：⑤自身免疫性疾病：ITP(六)异常白细胞形态1.中性粒细胞毒性变化：①大小不均②中毒颗粒③空泡形成④杜勒氏体⑤核变性2.棒状小体（Auerbody)中性粒细胞毒性变化中性粒细胞的核象变化①核左移(shifttoleft)：再生性的、退行性的核左移②核右移(shifttoright)中性粒细胞胞核异常形态：多分叶核中性粒细胞双核中性粒细胞胞环形杆状核中性粒细胞巨多分叶核中性粒细胞巨杆状核中性粒细胞淋巴细胞计数1、淋巴细胞数量变化：增多：⑴某些病毒或细菌所致的急性传染病⑵某些慢性感染：⑶肾移植术后：⑷LC性白血病：⑸再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症：减少：主要见于接触放射线及应用肾上腺皮质激素。2、淋巴细胞形态学变化：⑴异型LC：在传染性单核细胞增多症、病毒性肺炎、流行性出血热、湿疹、过敏性疾病等病毒性感染或过敏原刺激下，可使淋巴细胞增生，并出现某些形态变化。I型浆细胞型→胞浆中含有小空泡或呈泡沬状。II型单核细胞型→胞核不规则似单核。III型未成熟细胞型→染色质细致呈网状排列，可见1－2个核仁。异形淋巴细胞⑵受放射线损伤后LC形态变化：卫星核⑶LC性白血病时形态学变化：课程要求：A.掌握：EOS和PLT计数的原理、方法、临床意义B.熟悉：质量控制、参考值C.了解：EOS和PLT的来源、功能、计数方法学评价※嗜酸性粒细胞(eosinophil)计数㈢EOS的功能A.趋化、吞噬作用B.抑制Bas和肥大细胞活性物质的合成与释放C.分泌组胺酶破坏组胺，限制超敏反应D.参与寄生虫感染的病理过程㈣EOS计数方法【原理】用EOS稀释液将血液稀释一定倍数，同时破坏RBC和大部分其它WBC，并将EOS着色，然后滴入细胞计数盘中，计数一定范围内EOS数，即可求得每升血液中EOS数。【计数方法】1.显微镜计数法2.血液分析仪法【试剂】EOS稀释液：伊红-丙酮稀释液、乙醇-伊红稀释液、溴甲酚紫稀释液、固绿稀释液①EOS保护剂(如丙酮、乙醇）②破坏RBC和大部分其它WBC(如碳酸钾、草酸铵或低渗状态)③将EOS着色(如伊红、溴甲酚紫、固绿)【显微镜计数法操作方法】1混匀1充池计数：10个大方稀释液血20μl0.38ml格内的Eos计算：Eos=N×20×106/L【质量控制】尽量减少人为误差保护剂用量混匀不宜太过用力；适当延长混匀时间计数应在血液稀释后1h内完成注意与残留的中性粒细胞区别【参考值】（0.05~0.5）×109/L【临床意义】1．生理变化：①劳动、饥饿、寒冷、精神刺激等Eos减低②日间变化正常人Eos白天较低，夜间较高上午波动较大，下午比较恒定下丘脑垂体前叶促肾上腺皮质激素肾上腺皮质抑制骨髓释放EOS肾上腺皮质激素EOS减少EOS减少2.病理性变化：⑴EOS增多：＞0.5×109/L①寄生虫病：蛔虫、钩虫、绦虫等②过敏性疾病：次于寄生虫病的另一病因，Eos常（1~2）×109/L如：支气管哮喘、荨麻疹、药物或食物过敏、血管神经性水肿、过敏性肺炎等③某些皮肤病：湿疹、剥脱性皮炎、银屑病等④.血液病：慢粒、嗜酸性粒细胞性白血病等⑤.某些恶性肿瘤：胃癌、肺癌、结肠癌、何杰金淋巴瘤⑥.某些传染病：猩红热(乙型溶血性链球菌)⑦.某些内分泌疾病：脑垂体功能低下及原发性肾上腺皮质功能不全等(2).EOS减少：传染病急性期：伤寒、副伤寒严重组织损伤：手术后应用肾上腺皮质激素或促肾上腺皮质激素后垂体或肾上腺皮质功能亢进时3.嗜酸性粒细胞计数的其他应用A.观察急性传染病的预后：急性感染时，嗜酸性粒细胞减少，恢复时增高。B.观察手术和烧伤病人的预后：手术后4小时，嗜酸性粒细胞减少，24～48小时后增多；大面积烧伤的病人，数小时后嗜酸性粒细胞完全消失。C.测定肾上腺皮质功能：血小板(platelet)计数血小板出血一、概述血小板（一）形态：胞体：圆形、椭圆形或不规则形胞质：淡蓝色或粉红色，中心部位有细小的紫红色颗粒，无核，常3～5成群聚集成团寿命：7~14天造血干细胞（二）来源：原始巨核细胞骨髓巨核细胞幼稚巨核细胞颗粒型巨核细胞产血小板巨核细胞裸核巨核细胞血小板（三）功能主要功能：粘附、聚集、释放、参与凝血和血块收缩、维护血管内皮完整等功能。二、计数不明原因的出血排除出血性疾病化疗和放疗病人的检测怀疑骨髓造血系统疾病怀疑血小板破坏增加、消耗过多或反应性增多检测原理方法原理检测原理方法原理普通显微镜直接计数法破坏红细胞—溶血法和不破坏红细胞法相差显微镜直接计数法相差显微镜下血小板立体感增强血液分析仪法电阻抗法和光散射法流式细胞仪法免疫法荧光素标记血小板特异性抗体，流式细胞仪计数【原理】血液经一定比例稀释后，滴入计数池，在显微镜下计数一定体积内的血小板数，经换算求出每升血液中血小板的数量。【试剂】草酸铵溶血法、复方尿素溶血法、高铁氰化钾法、复方碘法等。【操作方法】混匀静置15min稀释液充池计数1ml血10μlPLT/L＝N×10×100×106＝N×109【质量控制】原则：尽量避免PLT被激活、破坏，避免杂质污染。检测前：采血顺利抗凝剂：肝素、EDTA-K2储存温度和时间检测中：器材标准化，清洁干燥充池前充分摇匀，充池后静置15min后计数1h内计数完毕计数时光线要适中；注意与杂质鉴别检测后：PLT计数＜60×109/L，应观察血涂片中的PLT分布情况。【参考值】（100～300)×109/L【临床意义】1.生理性变化：①正常人晨间较低，午后略高；春季低、冬季略高；平原居民低，高原居民略高。②妇女月经前低，月经后上升；妊娠中晚期升高，分娩后1～2天降低。③剧烈活动和饱餐后高、休息后恢复。2.病理性变化：PLT数减低：小于100×109/L（20～50)×109/L：轻度出血或手术后出血低于5×109/L：导致严重出血①PLT生成减少：AA、AL、恶性肿瘤放化疗后等②PLT破坏过多：ITP、脾亢③PLT消耗过多：DIC、血栓性血小板减少性紫癜等④PLT分布异常：脾肿大⑤先天性的PLT减少：PLT减少症、巨大PLT综合征血小板数增多：＞400×109/L原发性增多：CML；真红反应性增多：急性化脓性感染；急性出血；脾切后异常血小板形态1、大小异常①大血小板：d4～7μm②小血小板：d＜1.5μm2、形态异常：①血小板颗粒减少②血小板卫星现象③血小板“粘附”红细胞3、聚集性和分布异常：非抗凝血外周血涂片中常可见3～5个聚集成簇，聚集与散在血小板之比为20：1复习题1.显微镜下计数EOS的区域是（）EA.一侧计数室，四角四个大方格B.一侧计数室，对角两个大方格C.两侧计数室，对角共四个大方格D.两侧计数室，四角共八个大方格E.两侧计数室，共十个大方格2.外周血中EOS增高见于（）DA.风疹感染期B.传染性单核细胞增多症感染期C.百日咳感染期D.猩红热感染期E.流行性腮腺炎感染期3.可引起EOS数量增高的一组疾病是（）DA.钩虫病，急性化脓性胆囊炎B.急性失血，肺癌C.荨麻疹，心肌梗死D.支气管哮喘，猩红热E.严重外伤，肝吸虫病4.血小板减少是指血小板数量小于（）BA.80×109/LB.100×109/LC.110×109/LD.120×109/LE.150×109/L5.血小板破坏过多见于（）DA.急性白血病B.急性放射病C.急性溶血后D.原发性血小板减少性紫癜E.血栓性血小板减少性紫癜6.将20μl血液加入0.38ml血小板稀释液中，计数5个中方格血小板数为78个，问每升血液中血小板是多少？判断血小板是增高还是降低了，并简述可能的病理原因？7．简述嗜酸性粒细胞增高的原因有哪些？血型和输血(一)重点难点：血型定义、ABO系统抗原、抗体、血型物质、血型鉴定、交叉配血熟习内容：ABO系统的亚型第一节血型血型（bloodgroup）是指血液系统的一种遗传多态性，它是以血型抗原为表现形式的遗传性状，血型由血型基因决定，是血细胞的主要特征之一。血型系统有很多，常见的有ABO血型系统、Rh血型系统，此外还有Kidd血型系统、MNSs血型系统等。一.ABO血型系统（一）抗原1.ABO抗原的遗传：由ABO、Hh、Sese三个分离位点的基因所控制ABO基因：①ABO基因位于9q34，基因座上有A、B、O，A、B基因对于O基因是显性基因。②父母各遗传给子代一个基因。③有6个基因型，4种表现型ABO基因型表型RBC上抗原血清中抗体血型AO、AAAA抗BABO、BBBB抗ABABABAB—ABOOO—抗A、BO8.ABO抗原的生物合成：基因ABO及H基因控制着A、B抗原的形成。O为无效基因；H位点有Hh两个等位基因，h为无效基因。ABH血型抗原决定簇的前身物质是红细胞膜上含4个糖的低聚糖链，由各自的糖基转移酶作用决定抗原物质的形成。9（1）前身物质：4个糖的低聚糖链（2）H物质：基因H→岩藻糖转移酶→H抗原（3）A抗原：TheAAntigen基因A→酶A：N-乙酰半乳糖氨基转移酶→A抗原（4）B抗原：基因B→酶B：半乳糖基转移酶→B抗原（5）h基因：如体内仅有h基因，则不能合成岩藻糖转移酶，所以无H物质，表现型为O型，称为Oh型（孟买型）h基因RBC膜上含4个Oh型(孟买型)糖的低聚糖链O基因H物质RBC膜上含4个糖的低聚糖链A基因H基因A抗原H物质基转移酶转移酶B基因B抗原)基转移酶N-乙酰半乳糖胺N--acetylGlucosamineD-GalactoseAN-乙酰葡萄糖胺H.ABO抗原的发生：（1）5～6周胎儿RBC可测出ABH抗原→出生时还未发育完全。（2）新生儿A、B抗原位点较成人少（3）一般出生后18个月时才充分表现出抗原性。（4）抗原频率也有地区、种族差异。4.分泌型：血型物质：组织细胞也能合成分泌可溶性的ABH抗原→存在于许多体液中。以唾液中含量最丰富，CSF中无。⑴分泌型：体液中含有这种血型物质者为分泌型→80%人受控基因是Sese、SeSe⑵非分泌型：无血型物质者→约20%人受控基因是sese、se是无效基因。⑶血型物质的作用：①辅助鉴定血型②预测胎儿ABO血型：羊水③可中和天然抗体，有助于鉴别抗体的性质。5ABO系统抗体：1.抗A、抗B抗体：主要是IgM天然抗体：机体没有经过可察觉的Ag刺激就在体内存在的Ab.人血清中存在的Ab能天然地与其自身RBC所缺乏的A、B抗原相对应→血型定型的依据。产生：人在出生前尚未产生Ab，生后几个月才开始形成自已的Ab，5－6岁时达高峰，产生Ab的功能一直延续到生命的晚期，但成人后，效价随年龄增长而逐渐↓。免疫抗体：通过输注异型抗原刺激机体产生的抗体，IgG6.抗体特性：.抗A、B抗体：O型人血清中；与A型或B型RBC都能凝集。7.ABO系统的亚型：亚型：是指属于同一血型Ag，但Ag结构和性能或Ag位点数有一定差异所引起的变化。㈠A亚型：最多见，有A1、A2，A3，AX，我国人中A2和A2B型在A与AB型中所占比例＜1%A2的抗原性弱，定型时很可能误认为O型㈡B亚型：较A亚型少见，临床意义不大。（五）.ABO血型鉴定（ABObloodtyping）【原理（principle）】正定型：用已知标准抗血清检测RBC上的抗原。反定型：用已知RBC测血清中的抗体。【试剂（reagent）】1.标准抗A、抗B、抗AB血清：制备：青壮年混合血清，无菌分离，56℃30min灭活标准：①特异性：不含意外Ab，无非特异性凝集。②效价：抗A：1:128以上;抗B：1:64以上。③亲和力：血清0.05ml+10%RBC0.1ml→15S内出现凝集，3min凝块≥1mm2。④冷凝集素：冷凝集素效价＜1:4。2.ABO血型单克隆抗体:①特异性：能凝集A1、A2抗原。②亲和力：对A1、A2、A2B分别为15s、30s、45s③凝效价：大于1：128。④稳定性：较血清抗体好。【方法（method）】1.玻片法2.试管法1.玻片法：（正定型）【ABO血型的临床意义】1.输血2.新生儿溶血病检查3.器官移植4.其他用途：亲缘鉴定、可疑血迹、精斑、毛等的鉴定及相关疾病的调查等（六）.交叉配血交叉配血实验是在血型鉴定的基础上，进一步检查受血者和供血者血液中是否含有不相配的抗原和抗体成分的试验。交叉配血试验受血者不产生凝集或溶血时，方主侧可将供血者的血液或血液次成分给受血者输注。供侧血者目的：是在血型鉴定的基础上，进一步检测受血者和供血者血液中是否含有不配合的成分。33实验方法1.盐水介质配血2.聚凝胺介质配血3.微柱凝胶法配血4.酶介质配血菠萝酶，无花果酶，木瓜酶5.抗球蛋白介质配血1.盐水介质交叉配血试验【原理】主要检查：①供受者血清中中是否存在破坏对方RBC的不规则IgM抗体或补体依赖性RBC抗体。②验证ABO血型鉴定是否正确，防止发生急性溶血反应。【试剂和器材】生理盐水报告方式：1.受血者XXX(X型)血清＋供血者XXX(X型)红细胞凝集溶血与否2.供血者XXX(X型)血清＋受血者XXX(X型)红细胞凝集溶血与否3.受血者XXX与供血者XXX配血是否相合。4.实验方法：盐水介质交叉配血法2.低离子聚凝胺介质交叉配血试验【原理】RBC表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集凝聚胺溶解后能产生很多正电荷，可以中和RBC表面带有的负电荷→缩短RBC之间距离，使RBC产生非特异性凝聚。利用低离子溶液，降低介质的离子强度，以促进RBC和抗体结合。加入重新悬浮液能中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的RBC非特异性凝集散开。而RBC被相应的抗体致敏，则不会散开。3.微柱凝胶介质交叉配血试验【原理】利用抗原抗体特异性反应的作用→通过离心技术→利用凝胶的微孔过滤作用，将发生凝集反应的RBC阻滞于凝胶之内，而未凝集的单个RBC则穿过微孔运动至柱底→从而区分有无凝集。【结果判断】阳性结果：主次侧或单侧管内RBC凝集块位于凝胶表面或凝胶中，和(或)出现溶血→不相容→不可输注反应强度：①特异性RBC抗原抗体复合物位于胶表面→强阳性反应②复合物在胶中→弱阳性反应愈靠近胶底部凝集，颗粒愈小，反应愈弱。阴性结果：主次侧管内RBC完全沉降于底部→相容→输注重点内容：Rh血型抗原与抗体及临床意义；新生儿溶血病；血液保存方法；主要的血液成分制品及适应症。熟习内容：Rh血型鉴定方法；献血员条件和发出要求献血后并发症；输血后的不良反应及并发症。了解内容：成分输血的优点；自身输血。二.Rh血型系统Rh系统重要性仅次于ABO系统。㈠.Rh抗原：①Rh抗原有40多种，②与临床关系最密切：D、E、C、c、e5种，D的抗原性最强。③临床习惯地称含D抗原的RBC为Rh＋，不含D的为Rh－。④我国Rh－频率约占人群中的0.34%㈡.Rh系统抗体：①多是通过外来RBC免疫刺激后产生，即通过输血或妊娠产生。这些抗体均为IgG。②D抗原是非ABO红细胞抗原中免疫性最强的抗原，可以引起抗D的产生，抗D与D红细胞产生严重的溶血反应。㈢.Rh血型鉴定及方法学评价：Rh抗体属IgG不能在盐水介质中与RBC发生凝集。1.低离子强度盐水试验原理：降低介质的离子强度→可减少RBC外围的离子云①促进IgG分子在两个RBC之间搭桥→使之结合，②能缩短抗原与抗体的反应时间，并提高其灵敏度。2.抗人球蛋白法：又称Coombs试验P81直接法：用于检查受检者的RBC是否已被不完全抗体致敏；间接法：可用于鉴定Rh血型及血清中是否存在不完全抗体。P813.酶介质法：原理：①木瓜酶或菠萝酶可以破坏RBC表面的唾液酸，使RBC膜失去电荷，缩小RBC间的距离；②酶可以部分地改变RBC结构，使某些隐蔽的抗原得以暴露，增强凝集性4.聚凝胺法：带有高价阳离子，溶解后能产生很多正电荷，可以中和RBC表面的负电荷。本法已在实践中逐渐推广。5.人源盐水介质抗D试验：采用免疫蛋白变性剂(如二硫苏糖)处理人源IgG类抗D血清，使小分子的IgG抗体分子增大为具有大分子的“IgM”的性质，能在盐水介质中与相应红细胞发生凝集，可用于Rh血型的快速鉴定。㈣.RH血型的临床意义：1.与输血关系：Rh－第一次接受Rh＋血液→不溶血，产生抗体－＋Rh第二次接受Rh血液→产生大量的抗体，溶血2.与新生儿溶血病的关系：第二节新生儿溶血病（hemolyticdiseaseofnewborn)一.定义母婴血型不合，孕母体内IgG类血型抗体通过胎盘进入体内，胎儿RBC被母亲的同种抗体包被(这种抗体是针对胎儿RBC上父源性的抗原的)，被包被的RBC在分娩前后加速破坏，发生溶血，造成胎儿发生以溶血为主要损害的一种被动免疫性疾病。二.临床表现：①贫血：Hb＜180g/L②高胆红素血症：342umol/L或更高：③肝脾肿大：④组织水肿：⑤肌张力降低：三.发病机制：种类母亲胎儿溶血严溶血发生发病率血型血型重程度胎次ＡＢＯ溶血症O型A或B型较严重第一胎即可发病最常见Rh溶一般第一胎不发－＋病，而从第二胎血病RhRh严重起发病较低三.实验室检查：1.患婴确诊的依据：①RBC直接抗人球蛋白试验阳性：②释放试验：③血清中存在与患婴RBC上抗原相对应的游离抗体2.辅助检查：①高胆红素血症：②孕母血清内检查到与胎儿RBC不相合的抗体3.产前试验：①血清学检查：ABO血型系统Rh血型系统②羊水分析：四、预防与治疗（一）产前治疗对象1.ABO血型不合：一般无必要预防，但抗A或抗B效价超过64时，可给予预防。2.Rh血型不合：一般也无需特殊预防，当Rh抗体较高时，有必要降到8以下。（二）产前治疗方法1.药物治疗：大量丙球治疗。2.血浆置换3.宫内输血4.剖宫产（三）新生儿治疗1.换血2.丙球、白蛋白、激素等药物治疗。3.光照疗法第二节输血（tansfusion）一.输血1.输入自然的血液成份，以达到治疗的目的。2.输入现代生物技术生产的与血液相关的制品。3.血液成份可以根据需要先在体外对血液进行处理后再输入。4.利用某些手段将患者血中病理成份加以去除。二.血液的采集：1.献血员的要求：①18-55周岁，身体健康，无传染病，无贫血者，均可献血。②采血前要做体格检查、测Hb、谷丙转氨酶、HBsAg等，合格后方可献血。③采血前要做好血型鉴定。④献血员在献血前4h不得吃富含脂肪及蛋白质的食物。2.采集：3.献血并发症①贫血：健康成人每3个月献血一次，每次不超过400ml是不会发生贫血的。②空气栓塞：少于30ml，多可好转。③晕厥：④血肿：三.血液的保存：㈠.RBC的储存损伤：发生一系列生物化学与结构上的变化。㈡.抗凝剂：①枸橼酸盐：基本抗凝物质。可被身体所代谢，又可阻止溶血②肝素：必须在采血后48h内输入。缺乏支持RBC代谢的能力，又可被中和。㈢.血液保存液：具有抗凝、保护细胞生存能力及功能的作用。1.主要成份：①枸橼酸盐：抗凝②葡萄糖：RBC代谢所必需的营养成份③磷酸盐和腺嘌呤：合成ATP的原料→补充ATP2.种类：①枸橼酸钠：适用于现抽现用。4℃保存≤5天②ACD保存液：枸橼酸钠、枸橼酸、G。≤21天③CPD保存液：再加磷酸盐和腺嘌呤。≤35天④肝素：主要用于新生儿溶血病换血或体外循环。1～2天㈣储血质量鉴定：正常：在自然光或日光灯下，以眼睛观察库存血液，血浆呈带草黄色，半透明，RBC层呈暗红色，不含在血凝块，交界面呈灰白色，无溶血环。不正常：1.气泡进行性增加。2.血浆层有絮状物，色泽暗淡而混浊。3.细胞层与血浆层分界不清或有溶血。4.RBC层中有在血凝块或呈泥状紫红玫瑰色。5.封口不严、标签不清以及开封后有臭味等。四.发血：1.凭病历或提血单发血，并仔细查对：病历或提血单、配血报告单及血袋标签三者相符合2.血液质量良好。3.注意事项：①查对无误后，发血者与取者共同签名②保存期长者一般先发③发血后，配血标本至少须保留24h，最好1周。五.输血㈠全血输注：①需补充RBC和血容量时②需进行体外循环的手术时③换血㈡成分输血：将血液的各种成分分开，加工制成高浓度的血液成分制品，根据病情需要，缺什么输给什么，叫成分输血。1.备制方法：①塑料袋离心沉降的方法②细胞单采仪器2.成分输血优点：①提高疗效。②减少反应。③合理使用。④经济，既可节省宝贵的血液又可减少经济负担。3.成分输血种类：①红细胞输注②粒细胞输注③血小板输注④血浆及血浆蛋白制品的临床应用血浆、血浆白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子•红细胞制品：1．少浆血：从全血中移出部分血细胞压积约为50%。2．浓缩红细胞：其红细胞压积为70-90%，红细胞压积在80%以上者输注时应加生理盐水调节。3．代浆血或晶体盐红细胞悬液：移去大部血浆用代血浆或晶体盐溶液保存，其优点既可补充红细胞与血容量，又可因去除血浆而减少不良反应，血浆留做它用。4．洗涤红细胞：用生理盐水洗红细胞3-6次，使其血浆蛋白含量极少，可降低输血不良反应，同时由于除去绝大数的抗A、抗B抗体。在必要时，可把洗涤O型红细胞输给其它血型患者则比较安全。5．少白细胞的红细胞：除去白细胞可减少由白细胞引起的不良反应，现在有专门除去白细胞的滤器，可在输血时应用。6．其它：冰冻红细胞。•粒细胞输注白细胞主要适应证有：①用于治疗：当患者白细胞少于0.5×109/L，有严重细菌感染而经抗生素治疗24-48小时，无效时，治疗时应给输注大剂量的白细胞，并至少连续输数天，才可能有效。②用于预防：当治疗白血病或骨髓移植后引起粒细胞缺乏症时，输白细胞可能降低合并严重感染的危险，但引起副作用的弊病可能更大，故除非在严密观察下，不宜采取这种预防措施；③新生儿败血病，特别是早产儿，由于粒细胞的趋化性、杀伤力均较弱，故易发生感染。•血小板输注：输血小板的适应证：①血小板减少：决定于血小板数与出血程度，一般血小板数<20×109/L并合并出血时应给输血小板。②血小板功能异常：如血小板无力症、血小板病、巨大血小板综合症。药物或肝肾功能引起的血小板功能异常等患者。•血浆及血浆蛋白制品的临床应用：血浆：适用于：A.凝血因子缺乏B.肝功能衰竭C.抗凝治疗血浆白蛋白：适用于：补充血管内或血管外白蛋白缺乏免疫球蛋白：预防传染病；代替异种血清制品；免疫缺陷凝血因子制品：各种凝血因子缺乏㈢自身输血方式：1.保存式自身输血2.稀释式自身输血3.手术中回收自身输血优点：1.避免由输血传染疾病；2.避免血型抗原等引起的同种免疫；3.避免由免疫作用引起的过敏反应；4.自身输血者由于反复放血，刺激红细胞再生；5.为无条件供血的地提供血源。六.输血不良反应和输血传播性疾病：1.输血不良反应：①发热②过敏③细菌污染④溶血⑤大量输血的副作用2.输血传播性疾病：①肝炎②艾滋病③巨细胞病毒④疟疾⑤梅毒⑥其他：EB病毒感染、黑热病等。一、概述血液分析仪发展史：50年代：RBC、WBC计数60年代：增加Hb浓度、HCT、平均RBC体积等70年代：增加PLT计数80年代：双通道仪器90年代：多功能、多参数、多分类，全自动RET、RDW、MPV、PDW、PCT、大PLT比率，提示异常淋巴细胞和幼稚细胞，WBC分类从三分群到五分类分类：半自动三分群①②全自动五分类特点：多参数分析操作简便、高度自动化精密度高速度快较强的质控功能智能化基本结构：机械系统：进样针、稀释器、混匀器、真空泵等电学系统：血细胞检测系统：血红蛋白测定系统：计算机和键盘控制系统等检测原理电阻抗法电学检射频电导法测染色原激光散射法理非染色光学分光光度法1、电阻抗法：P93※Coulter原理：悬浮在电解质稀释液中的血细胞经负压吸引通过传感器的微孔时，在由外电极、内电极和电解质稀释液组成的电路上产生短暂的电阻增大变化而形成脉冲信号并经计算机处理，脉冲数被转化为细胞数，脉冲信号幅度则与细胞体积大小呈正相关。※脉冲信号和细胞体积直方图的关系P882、射频电导法射频：射频电流，变化﹥1万次/秒的高频交流电磁波。电导：电的传导性能。高频电流能通过细胞膜，测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、胞核和胞质、颗粒成分(大小和密度)等特征性信息。3、激光散射法P89应用流式细胞术检测原理将经稀释、染色、球形化的细胞悬液注入鞘液流中央，单个细胞随悬液和鞘液流两股液流整齐排列，以恒定流速定向通过石英毛细管。当细胞通过激光束被照射时，细胞可阻挡或改变激光束的方向，产生与细胞特征相应的各种角度的散射光。低角度散射光：前向散射光，反映细胞的数量和体积大小。高角度散射光：侧向散射光，反映细胞内部颗粒、细胞核等。被信号检测器接受，将来自各种散射光的信息进行综合分析，可准确区分正常类型的细胞。4、分光光度法：测Hb溶血剂＋Hb血红蛋白衍生物（有颜色）比色三、血液分析仪检测参数原理不同型号的血液分析仪检测原理不尽相同(一)血液分析仪检测原理的综合运用P961.体积、电导、光散射法Volume,conductivity,lightscantter,VCS①电阻抗技术检测：细胞体积。②电导(射频)技术检测：细胞大小和内部结构，包括细胞化学成分和核的体积。③光散射技术(10°～70°)检测：细胞内的颗粒性、核分叶性和细胞表面结构。各种血细胞的特征不同，在散点图上处于不同的部位，得以区别。立体散点图平面散点图2.电阻抗、射频、流式细胞术和特殊细胞染色法：（1）4DIFF通道：激光流式细胞术、核酸荧光染色技术专一的溶血剂红细胞和血小板WBC膜部分溶解出现小开口溶解和破坏核酸荧光染料进入WBC，与DNA、RNA结合，染上色经激光照射，所产生的荧光强度与细胞核酸含量成一定比例（2）WBC／BASO通道：碱性溶血剂只保留血液中的嗜碱性粒细胞，其他所有细胞均被溶解，根据脉冲的多少可得嗜碱性粒细胞数量。（3）未成熟粒细胞信息通道：在细胞悬液中加入硫化氨基酸，幼稚细胞与其结合的量较成熟细胞多，并且幼稚细胞对溶血剂有拮抗作用，加入溶血剂后成熟细胞被溶解，可通过电阻抗的方法检测出来。钨光源、激光散射法：应用激光散射和过氧化物酶染色技术(1)过氧化物酶染色通道：过氧化物酶活性：嗜酸粒细胞＞中性粒细胞＞单核细胞，而淋巴细胞和嗜碱粒细胞则无。细胞经表面活性剂溶解红细胞，过氧化物酶染色后，通过测试区，由于酶反应强度不同（阴性、弱阳性、强阳性）和细胞大小不同，激光束射到细胞上的前向角和散射角不同，以X轴为吸光率标记（酶反应强度），Y轴为光散射（细胞大小）。图激光与细胞化学联合检测白细胞示意图(2)嗜碱性细胞／核分叶性通道除嗜碱性细胞外，其他细胞均被溶解成为裸核，嗜碱性细胞定位于图上半部，裸核位于下半部，单个核位于左方，分叶越多越靠右方。（3）未染色大细胞计数检测：在单独的Perox通道，可检测异常的淋巴细胞、幼稚的淋巴细胞、原始细胞等。4．多角度偏振光散射法（multi—anglepolarisedscatterseparationofwhitecell,MAPSS）原理：全血标本用鞘流液稀释，WBC内部结构近似于自然状态，RBC与鞘流液的折光系数相同，可以从四个角度测定散射光的密度：7°散射测定细胞体积、数量测细胞结构及核染色质复杂性90°去偏振散射光测细胞内部颗粒及分叶状况区别EOS(二)红细胞检测原理：电阻抗法1.RBC和HCT2.Hb、MCV、MCH、MCHCfl3.红细胞体积分布宽度Redbloodcellvolumedistributionwidth,RDW流式细胞术加二维激光散射法专用稀释液RBC变成球形并固定激光束以低角度前向光散射和高角度散射测量测量单个红细胞的体每个红细胞内积和红细胞总数血红蛋白浓度RBC、Hb、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW(三)血小板检测原理P101血小板和红细胞共用一个小孔管。大血小板：鞘流技术、浮动界标、拟合曲线等激光散射法：低角度(2°～3°)主要测量血小板大小；高角度(5°～l5°)主要检测血小板折射指数RI大血小板与各种碎片即使体积相似，但由于内容物不同，RI相差较大，故能鉴别。四、检测参数和结果显示P107（一）检测参数（二）结果显示：数据、图形、报警数据：检测项目、结果、参考值标识出超出参考值的检测结果图形1、直方图(1)白细胞直方图：小细胞群峰中间细胞群峰单核嗜酸嗜碱大细胞群峰原始、幼稚白细胞增多LC减少和NC增多LC增多和NC减低中间细胞群增多单个核细胞绝对增多异常的直方图只是粗略判断细胞比例变化或有无异常细胞如果存在异常要进一步血涂片复核(2)红细胞直方图P109正常红细胞直方图小RBC且大小不均巨RBC且大小不均巨幼细胞性贫血治疗有效(3)血小板直方图、散点图第三节血液分析仪检测结果显微镜复查规则自学五、质量控制P115＊分析前的质量控制检验人员、仪器、检测标本＊分析中的质量控制1.按规程操作，选用原装配套试剂2.环境温度、标本混匀3.注意仪器的半堵孔现象＊分析后的质量控制1.发现问题或报警的标本，应及时复查，并与临床资料进行相关分析2.参加室间质评活动掌握：尿液的理学检查、显微镜检查熟悉：尿液检验的目的，尿标本的种类、采集、保存和处理。了解：尿液的生成和排出一、尿液的生成尿肾小球滤过膜的滤过：液肾小管重吸收：生成肾小管的排泌：二、尿液检查的临床意义•泌尿系统疾病的诊断与疗效：•其他系统疾病的辅助诊断与观察：•安全用药的监护：•职业病的辅助诊断：•对人体健康状态的评估：第五章尿液一般检查P126第一节尿液标本的收集、保存和处理一.尿液标本收集①清洁、干燥的容器内②避免阴道分泌物、月经血、粪便等污染。③无干扰化学物质混入。④如收集定时尿，容器应足够大，并加盖，必要时加防腐剂。⑤如需培养应在无菌条件下，用无菌容器收集中段尿液⑥尿标本收集后应及时送检(2h)。二.尿标本种类1.晨尿：泌尿系疾病动态观察及早期妊娠试验。2.随机尿：适用于门诊、急诊患者。3.餐后尿：适于尿糖、尿蛋白、尿胆原等。4.3h尿：测定尿液有形成分，如白细胞排出率。5.12h尿：尿有型成分计数。6.24h尿：用于化学成分的定量。7.尿三杯试验尿三杯试验（UrineThree-CupTest)是临床上遇到血尿、白细胞尿(脓尿)时，为了确定病变部位和揭示病因而进行的临床检验方法。方法：清洗外阴及尿道口后，将最初10～20毫升尿液留于第一杯中，中间30～40毫升尿液留在第二杯中，终末5～10毫升留在第三杯中。尿三杯试验和病变部位的关系第一杯尿，排尿开始出现血尿或脓尿，后两杯清晰，提示病变在前尿道，如尿道炎等。第一杯尿和第二杯尿清晰，第三杯尿出现红细胞和脓细胞，排尿终末出现的血尿或脓尿，提示病变部位在膀胱底部、后尿道或前列腺部位，如前列腺炎、精囊炎等。三杯皆混浊或出现血尿，提示病变部位在膀胱或膀胱以上部位，如肾盂肾炎，肾小球炎等。三.尿标本保存1、冷藏：4℃,但不能超过8小时2、化学防腐：•甲醛：5ml/L尿液，用于尿管型、细胞防腐。•甲苯：5ml/L尿液，用于尿糖、尿蛋白等定量检查。•麝香草酚：1L尿中小于1g，既能抑菌，又能较好的保存尿中有型成分，可用于尿化学检查及防腐。•浓盐酸：10ml/L尿液，用于尿中17-酮、17-羟类固醇、儿茶酚胺。1第二节尿液一般性状检查1.尿量：一般健康成人尿量为1～2L/24。昼/夜尿量为2～4：1，小儿尿量较成人多。（1）.多尿（polyuria）：24h尿量大于2.5L。）生理性多尿：饮水过多、咖啡、精神紧张、失眠，使用利尿剂或输液过多等。）病理性多尿：a.内分泌病：尿崩症、糖尿病等b.肾疾病：慢性肾炎、肾功能不全、慢性肾盂肾炎等。c.精神因素：癔病等d.药物：甘露醇、山梨醇等。（2）少尿（oliguria）：24h尿量＜0.4L称为少尿A）生理性少尿：机体缺水、出汗过多等。B）病理性少尿：①肾前性少尿：各种原因引起的脱水、大失血、休克等②肾性少尿：急性肾小球肾炎、慢性肾功能衰竭。③肾后性少尿：单侧或双侧上尿路梗阻疾病。（3）无尿（anuria）：24小时尿量＜0.1L或在12小时内完全无尿者。2.外观：包括颜色和透明度①血尿:尿内含有一定量的红细胞时称血尿。颜色：淡红色云雾状、淡洗肉水样或鲜血样原因：泌尿系统出血。如肾结核、肾肿瘤、结石及出血性疾病肉眼血尿：＞1ml血/L尿→可出现淡红色。镜下血尿：尿液外观变化不明显，离心沉淀镜检时，＞3个RBC/HPF→镜下血尿。②血红蛋白尿（hemoglobinuria）：酸性尿中血红蛋白可氧化成正铁血红蛋白呈棕色。含量多呈棕黑色酱油样外观。③胆红素尿（bilirubinuria）：深黄色见于：阻塞性黄疸和肝细胞性黄疸→震荡后呈泡沫亦呈黄色。服用痢特灵、核黄素、牛黄类药物等时尿液可呈深黄色。④乳糜尿（chyluria）：外观：呈不同程度的乳白色，严重者颇似乳汁，有时含有血液。原因：多由丝虫病引起，少数可由肿瘤、腹部创伤或手术。⑤脓尿（pyuria）：外观：含有大量白细胞→黄白色浑浊或含脓丝状悬浮物→镜检可见大量脓细胞原因：见于泌尿系统感染及前列腺炎、精囊炎等。⑥盐类结晶尿：外观：呈白色或淡粉红色颗粒状浑浊比重A.化学试带法B.折射计法C.比重计法4.尿渗量5.尿气味第三节尿液有形成分显微镜检查一、检查方法（一）不离心直接镜检法1.标准定量计数板法2.直接涂片法（混匀一滴尿法）：低倍镜观察20个视野的管型，高倍镜观察10个视野的细胞，以最高～最低数报告。二）离心镜检法10ml尿液加入刻度离心管，1000r/min，5分钟，倾倒或吸去上清，剩余0.2ml，镜检。1.直接涂片法2.标准化计数板法（三）有形成分染色法（四）1h尿液有形成分计数法尿细胞成分检查一、红细胞①.正常成人偶见一个红细胞/HP。②.＞1～2个RBC/HP，时应考虑为异常。③.若＞3个RBC/HP，则可诊断为镜下血尿均一红细胞血尿：RBC增多，尿蛋白增多不明显RBC外形及大小正常，形态一致。非肾小球性疾病。变形红细胞血尿：尿蛋白增多，伴管型增多RBC大小不等，外形呈两种以上的多形性变。肾小球性源性。参考值：混匀一滴尿：0～偶见/HPF离心尿：0～3/HPF临床意义：1.生理性血尿：剧烈运动、急行军、冷水浴、久站、或重体力劳动可出现一过性镜下血尿2.病理性血尿：①泌尿系统自身疾病：炎症、肿瘤、结核、结石等②全身其他系统的疾病：主要见于各种原因引起的出血性疾病：③泌尿系统附近器官的疾病：如前列腺炎、精囊炎等。二.白细胞正常成人：可偶然见到1～2个WBC/HPF；如果＞5个WBC为增多，称为镜下脓尿。脓细胞：破坏或死亡的中性粒细胞，结构模糊，浆内充满粗大颗粒，核不清楚，易聚集成团。参考值：混匀一滴尿：白细胞：0～3/HP离心后尿沉渣：白细胞：0～5/HP临床意义：A.泌尿系统炎症：尿中白细胞增多。B.女性阴道炎、宫颈炎、附件炎：白细胞增多，大量扁平上皮细胞。C.肾移植后排异反应：大量LC、单核C。D.肾盂肾炎活动期、慢性肾盂肾炎的急性发作期：可见闪光细胞：在低渗条件下，中性粒细内颗粒呈布朗分子运动，由于光折射，出现闪光现象。E.尿中单核细胞增多：药物性急性间质性肾炎三、吞噬细胞为白细胞的2~3倍，分为大吞噬细胞（巨噬细胞）和小吞噬细胞（中性粒细胞）。常见于泌尿系统的急性感染。四.上皮细胞：肾小管、肾盂、输尿管、膀胱、尿道等脱落。临床意义：①.扁平鳞状上皮：正常尿：少量鳞状上皮妇女尿：可成片出现，没有临床意义。尿道炎：大量出现，常成片且伴有较多白细胞。②移形上皮细胞：少见，来源与肾盂、输尿管、膀胱等处A.表层移形上皮细胞（大圆上皮）B.中层移形上皮细胞（尾状上皮）C.底层移形上皮细胞（小圆上皮）意义：在肾盂、输尿管或膀胱颈炎症时可成片脱落③肾小管上皮细胞：极少见。来源于肾小管，较中性粒细胞大1.5倍，有一个较大的细胞核。（小圆上皮）意义：（1）急性肾小球性肾炎：最多见。（2）慢性肾病：肾小管上皮细胞发生脂肪变性：浆内充满脂肪颗粒，甚至将胞核遮盖，此时称为脂肪颗粒细胞或称复粒细胞。尿管型检查一、概念：管型(casts):在肾小管、集合管中形成的圆柱样蛋白聚合体。二.管型形成的条件：A.蛋白尿的存在。B.肾小管有使尿液浓缩、酸化的能力。C.尿流缓慢。D.有供交替使用的肾单位。三.常见管型类型：1.透明管型（hyalinecast）：形态：无色半透明，两边平行、两端钝圆、质地菲薄的圆柱体。有少许颗粒及少量细胞。临床意义：正常人：0~偶见/LP，见于正常人清晨浓缩尿中大量出现：肾实质病变，如急慢性肾小球肾炎等。.细胞管型（cellularcasts）：细胞超过管形面积1/3①红细胞管型：管型内含有较多的红细胞，常互相粘连界限不清，略呈锈色或棕红色。临床意义：提示肾单位有出血，如急慢性肾小球肾炎。②白细胞管型：管型内充满白细胞。临床意义：表示有细菌感染性病变。见于急性肾盂肾炎，间质性肾炎等③肾上皮细胞管型：内含有肾小管上皮细胞。细胞大小不一，呈瓦片状排列。临床意义：见于肾小管病变。如：急性肾小管坏死、重金属及化学药物中毒，肾移植后排斥反应等。3.颗粒管型：管型内含有大小不等的颗粒物，超过1/3面积。粗颗粒管型：颗粒粗大浓密细颗粒管型：含有较多细小而稀疏的颗粒。临床意义：见于肾实质性病变，提示肾单位内有淤滞。.蜡样管型：呈浅灰色或蜡黄色、有折光性、质厚、外形宽大、易断裂成平齐状、有时呈扭曲状。临床意义：提示肾小管有严重病变，预后差。如：慢性肾小球肾炎的晚期5.脂肪管型：管型内含有大小不等，折光性很强的脂肪。见于：肾病综合征。6.其它管型：细菌管型、结晶管型7结晶检查一.酸性尿液中的结晶：1.与疾病无关的结晶有：尿酸、尿酸盐、草酸钙等尿酸结晶尿酸盐结晶草酸钙.与疾病有关的结晶有：胱氨酸、亮氨酸、酪氨酸、胆固醇等二.酸性尿液中的结晶：无定型磷酸胺结晶、磷酸镁胺、磷酸盐、磷酸钙结晶。其他有行成分细菌2.真菌3.寄生虫4.精子5.纤维状物重点内容：尿液胆色素检查、尿酮体检查、乳糜尿检查、熟习内容：干化学分析仪教学难点：胆红素的代谢尿酮体检查3一、概述：酮体(ketones,KET)组成:乙酰乙酸、β-羟丁酸、丙酮酮尿的形成：正常情况下：肝产生的酮体肝外组织氧化供能血液异常情况下：当糖类代谢发生障碍时，脂肪代谢会代尝性增加，肝内产生酮体＞肝外利用→血中酮体增加→超过肾阈值→尿中出现酮体(酮尿)。4酮体主要是脂肪酸分解代谢过程中的中间产物。肝中产生，肝外组织利用。主要用于氧化供能。1.酮体为酸性物质，可引起人体全身乏力，不适。2.呼吸中有酮体的烂水果味。3.恶心、呕吐。4.酮体长期存在引起酸中毒，昏迷、危及生命。二.检测方法亚硝基铁氰化钠试管法或粉剂检查法、干化学试带法.〔原理〕碱性生成紫红色化合物酮体＋亚硝基铁氰化钠注：乙酰乙酸的灵敏度最高，β-羟丁酸不反应。三、干扰因素假阳性：尿中含较多量肌酸、肌酐，高色素尿，尿中含酞、苯丙酮等假阴性：标本收集和保存不当；亚硝基铁氰化钠失效，试带受潮失活等四、质量保证1、检测前丙酮易挥发，乙酰乙酸易被细菌分解，要使用新鲜尿标本2、检测中有阴阳性对照3、检测后仔细审核结果，及时与临床沟通，做出合理解释8五.临床意义：常规定性法是阴性(－)1.糖尿病酮症酸中毒：早期诊断。并能与低血糖、心脑疾病、乳酸中毒和高血糖高渗性糖尿病昏迷区别。2.碳水化合物丢失或摄入不足：长期禁食的病人、妊娠呕吐等3.中毒：如氯仿、磷中毒等可造成酮体增加4.服用双胍类降糖药：降糖灵等一些药物尿液胆色素检查一、尿中胆色素成分：胆红素：bilirubinBIL尿胆原：urobilinogen