微生物的实验室培养

关于微生物的实验室培养一、培养基：

1.概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质—培养基

3.营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求注：自养微生物的碳源是无机碳；异氧型微生物的碳源是有机碳，培养不同类型的微生物，培养基的组成成分一般不同。点此播放教学视频

第2页,共15页，2024年2月25日，星期天2.分类：

(1)按营养成分分类：

1.天然培养基：优点：取材方便、营养丰富、种类多样、配制方便缺点：成分不确定，适用于大生产中发酵培养基

2.合成培养基：优点：成分精确缺点：配制较复杂，价格较贵

（2）按物理状态分类：

1、固体培养基：主要应用于微生物的分离与鉴定

2、液体培养基：工业上微生物的培养

点此播放教学视频

第3页,共15页，2024年2月25日，星期天（3）按功能分类：

1.选择培养基：根据某种微生物的特殊营养需求或其对化学、物理因素的抗性而设计的培养基2.鉴别培养基：在培养基中加有能与某一菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能使该菌落与其他外形相似的它种菌落相区分的培养基。主要应用与鉴别菌种（如：伊红—美蓝培养基）

点此播放教学视频

第4页,共15页，2024年2月25日，星期天4、配置天然培养基用的几种原材料特性：

牛肉膏：瘦牛肉加热抽提并浓缩成的膏状物。价值：富含糖类，有机含氮类，水溶性维生素和无机盐等。蛋白胨：由酪素或明胶等蛋白质经酸或酶水解而成。

价值：富含有机氮，其中可能还有多种维生素和氮源。琼脂：从某些海藻中加热提取的复杂糖类。价值：配置固体培养基时常用作凝固剂，无营养价值第5页,共15页，2024年2月25日，星期天二、无菌技术：（一）、区别消毒和灭菌：1、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）常用方法：（1）.煮沸消毒法：100摄氏度煮沸5—6分钟可杀死微生物营养细胞及部分芽孢（2）.巴氐消毒法：70—75摄氏度煮30分钟或80摄氏度煮15分钟（主要应用于不耐高温的液体如：牛奶、啤酒、果汁、酱油等）（3）.化学药剂消毒：（如酒精擦拭双手、喷洒石炭酸等）（4）.紫外线消毒点此播放教学视频

第6页,共15页，2024年2月25日，星期天2、灭菌：使用强烈理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子常用方法：

1.灼烧灭菌：将各种金属用具直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧应用：（1）接种环、接种针等金属用具（2）试管口或瓶口等容易被污染的部位2.干热灭菌：干热灭菌箱，在160—170摄氏度加热、1—2小时应用：玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具3.高压蒸汽灭菌：高压灭菌锅注：（1）使用时要待冷空气排尽，再密封（2）灭菌时压力为100KPa，温度121摄氏度应用：培养基灭菌第7页,共15页，2024年2月25日，星期天2.在微生物培养时获得纯净培养物的关键

防止外来杂菌入侵，无菌技术主要围绕如何避免杂菌的污染展开，包括以下内容：（1）对实验操作的空间，操作者的衣着和手进行清洁和消毒（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌（3）实验操作应在酒精灯火焰附近进行（4）操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触注：实验后，所有用过的培养基，培养液等都要统一进行高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则会造成环境污染点此播放教学视频

第8页,共15页，2024年2月25日，星期天三、关于无菌操作：（一）平板培养基制备的一般步骤：

1.计算

2.称量：注：牛肉膏较粘稠，可以用玻璃棒挑取，放在称量纸上称量

3.溶化：注：（1）将牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加少量的水，加热待牛肉膏与称量纸分离后，取出称量纸（2）熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂点此播放教学视频

第9页,共15页，2024年2月25日，星期天4.灭菌：注：（1）制作的棉塞要求即能防止杂菌感染又要通气良好，棉塞的松紧以不留缝隙为标准

（2）培养基——高压蒸汽灭菌；培养皿——干热灭菌（3）检测：灭菌后的培养基要放在恒温箱中保温1—2天，表面无菌落生成5、倒平板：注：（1）培养基灭菌后，需冷却至50OC才能倒平板。原因：温度过高，太烫，不易操作；过低，培养基易凝固。估测方法：可以用手触摸装有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚烫手时，就可以到平板了。第10页,共15页，2024年2月25日，星期天（2）倒平板时锥形瓶口要通过火焰。原因：防止瓶口沾染的微生物污染培养基。(3)平板冷凝后要将平板倒置.原因:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠.,将培养基倒置,既可以使培养基表面的水分更好地的挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染.(4)实验后,用过的培养基,培养也都要统一进行高压蒸汽灭菌后再丢弃.否则会造成环境污染点此播放教学视频

第11页,共15页，2024年2月25日，星期天(二)接种方法:微生物的接种方法中最常用的是平板划线法和稀释涂布法，另外还有斜面接种和穿刺接种等，各种方法虽然各有不同，但其核心均是防止杂菌污染，保证培养物纯度。

1、平板划线法：（１）、概念：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。点此播放教学视频

第12页,共15页，2024年2月25日，星期天（２）、平板划线操作：１、接种前将接种环放在火焰上灼烧，直到烧红。目的：避免接种环可能存在的微生物污染培养物。２、一次划线结束后，要再次灼烧接种环。原因：杀死划线结束后接种环上残留的菌种。３、方法：从第一区域的末端开始往第二区域内划线，切不要将最后一曲的划线与第一区相连。原因：下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，是每次划线时菌种数目逐渐减少，以便获得单纯的菌落。４、平板制备完成后，要做好标记（时间、日期、菌种等），倒置放入培养箱中培养。点此播放教学视频

第13页,共15页，2024年2月25日，星期天2、释涂布平板法：概念：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培