非洲猪瘟疫苗研究进展与方向

目前，非洲猪瘟疫情重创中国以及东南亚国家的养猪业，在这种严峻的形势下，极大地改变了科学家和政府部门对非洲猪瘟疫苗研究的态度。我国科学家在非洲猪瘟疫苗研发领域另辟蹊径，对非洲猪瘟病毒（ASFV）基因组进行人工改造的重组减毒活病毒（LAVs）疫苗具有较好的安全性和有效性，加速了非洲猪瘟疫苗的正式注册和商业转化。由于非洲猪瘟病毒（ASFV）的复杂性，加上缺乏对其免疫保护机制和其中涉及的特定抗原的了解，疫苗的研发仍然需要进一步加大研究力度和资金的投入。尽管亚单位疫苗与重组减毒活病毒（LAVs）疫苗保护效果相差甚远，但亚单位疫苗仍然是未来研究的最佳方向。一非洲猪瘟疫苗的必要性迄今为止，宿主机体对ASFV免疫应答反应机制还没有研究清楚，能产生免疫保护的抗原仍有待鉴定，这些研究工作的滞后，阻碍了疫苗的研发和设计。虽然存在很多的局限性，致力于ASF疫苗研究的少数实验室在这一领域做出了一些开创性的研究。目前的可以得出明确的结论：第一、ASF的疫苗是可以真实实现的；第二，重组减毒活病毒（LAVs）疫苗将在近期可以研发成功；第三，最安全和最佳的非洲猪瘟疫苗仍然是亚单位疫苗。二经典疫苗的问题基于ASFV灭活的经典疫苗，已经被证明是保护效果不佳。尽管灭活疫苗在诱导抗体方面非常有效，有时能够阻断体液中的病毒，但它们在诱导特异性细胞毒性的CD8+

的T细胞（CTLs）方面并不十分有效，CTLs对清除病毒感染细胞至关重要。CTLs有两种不同的表型能够裂解ASFV感染的细胞：一种是CD8+表型

，另一种是CD4+CD8αβ+表型，它们都是穿孔素，并且具有猪白细胞抗原I（SLAI）限制性的细胞毒性。适当的先天性免疫反应和适应性反应（包括抗体和CD8+

的T细胞）对诱导抗ASFV免疫至关重要。三走向商业化的重组减毒活病毒（LAVs）疫苗今天，使用重组技术或使用CRISPR-Cas9系统进行基因组编辑来删除特定基因，为获得更安全的LAVs疫苗开辟了新的道路。LAVs疫苗遇到的几大难点主要有，同时删除ASFV多个毒力基因并不能完全使毒株毒力减弱，也可能产生无法在体内生长的病毒或不能诱导保护性反应的发生。最近,中国哈尔滨兽医研究所在《中国科学：生命科学》杂志上发表的最新研究成果，证明了通过删除MGF360/530和CD2v毒力基因而获得的重组LAVs疫苗的具有良好的安全性和免疫保护效力，其它重组减毒活病毒（LAVs）疫苗研究情况可见表1。LAVs要成为真正意义上的合格疫苗需要满足几个条件：1、安全性。LAVs不仅要证明对接种疫苗的猪、接触的动物和环境都是安全的，而且是有效的。2、易于区分。接种疫苗的猪诱导的免疫抗体可以和自然感染的猪区别。3、高级别的疫苗生产车间。首先，需要稳定的细胞系来大规模生产LAVs疫苗；其次，疫苗应在高级别生产车间内进行生产（P3级别的生产车间），并遵守相应监管机构的制定的政策。4、具有交叉免疫保护性。疫苗不仅能保护特定区域不受单一病毒的侵害，而且可以防止来自同一基因型或不同基因型（最好是24种基因型）的不同毒株。5、满足野生动物免疫需要：要完全控制和根除ASF，还需要适合野生动物免疫的LAVs疫苗，并且疫苗需要具有较好的安全性和免疫保护力。中国LAVs疫苗的研发取得突破性成果。经农业农村部批准，哈兽研于4月上旬、5月上旬和6月上旬分别在黑龙江、河南和新疆等三个基地开展了疫苗临床试验，试验规模共计近3000头商品育肥猪。截至目前，免疫猪群生长状态良好，无明显临床不良反应；免疫猪剖检无明显病理变化，无疫苗毒排放，无水平传播；免疫猪在高等级生物安全实验室用强毒进行攻毒，不同剂量接种组免疫保护率均在80%以上。中国非洲猪瘟疫苗的研发工作受到国家各个部门的高度重视。国务院副总理胡春华到中国农科院哈尔滨兽医研究所考察非洲猪瘟疫苗研发进展情况。他强调，要高度重视、积极推进非洲猪瘟疫苗研发工作，坚持尊重科学规律，坚持时间服从质量，严格按照程序开展研发工作，确保疫苗的安全性、有效性，确保经得起科学和实践检验，为生猪产业健康发展作出贡献。表1.重组LAVs疫苗对基因II型病毒毒株的保护性

四非洲猪瘟保护性抗原研究和亚单位疫苗的研制为了更好的避免传统灭活疫苗和减毒活疫苗的安全性和保护性问题，非洲猪瘟亚单位疫苗可能成为未来发展的最佳方向。对目前ASFV有关抗原研究和针对ASF的亚单位疫苗研究的重要进展在表2、表3、表4和表5中做一简介。表2.非洲猪瘟病毒不同蛋白的抗原性和免疫原性表3.非洲猪瘟病毒诱导的特异性T细胞免疫反应表4.非洲猪瘟病毒诱导的特异性T细胞免疫反应表5.非洲猪瘟亚单位疫苗的保护性试验五小结虽然基于ASFV片段研发的亚单位疫苗克服了LAVs疫苗的大部分风险，但迄今研究的亚单位疫苗保护性差，主要原因是缺乏对ASF保护机制的认识不深刻，对保护性抗原的研究仍然未能深入，使得有效的ASFV亚单位疫苗的研究和设计的难度异常。未来亚单位疫苗研发方和出路主要在于：1、疫苗的基本特点：ASFV是一种通过干扰多种途径抑制猪免疫系统的复杂病毒。最佳疫苗不仅要具有高的保护性，而且无有害的免疫反应。2、加大抗原的研究：体液和细胞免疫都可以起到保护作用。在研究保护机制的同时要从整个蛋白质组中鉴定出尽可能多的抗原或表位。3、抗原的特性：我们不仅需要知道每种抗原的诱导免疫机制，而且制备抗原的成本要足够低廉。4、新型佐剂：抗原需要和新型的佐剂来诱导体液和细胞免疫。佐剂是达到这一目标的必要工具。5、其他方面：区分免疫和自然感染，针对ASFV的亚单位疫苗可设计免疫优势抗原用于鉴别诊断。然而，交叉保护是一个今天很难解决的问题，因此我们需要首先确定相关的免疫机制和抗原