DB32T3901-2020脱毒矮化自根砧苹果苗木繁育技术规程

ICS65.020.20

B61

DB32

江苏省地方标准

DB32/T3901—2020

脱毒矮化自根砧苹果苗木繁育技术规程

Technicalregulationforpropagationappleseedingswithvirus-freedwarfrootstocks

2020-10-13发布2020-11-13实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/T3901—2020

脱毒矮化自根砧苹果苗木繁育技术规程

1范围

本标准规定了采穗圃营建、矮化砧木的选择、砧木苗培育、嫁接及定植、嫁接苗管理、嫁接苗出圃

等矮化自根砧苹果苗木繁育技术。

本标准适用于脱毒苹果矮化自根砧苗木的繁育。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB8370苹果苗木产地检疫规程

GB9847苹果苗木

GB/T12943—2007苹果无病毒母本树和苗木检疫规程

NY/T1085—2006苹果苗木繁育技术规程

3采穗圃营建

按NY/T1085—2006规定执行。

4矮化砧木的选择

矮化砧木可以选择M9T337、M9、B9等。

5脱毒砧木苗及苹果品种苗获取

见附录A。

6砧木苗培育

6.1砧木组培苗移栽

经过病毒检测的脱毒组培苗进行炼苗并移栽到营养钵中，然后在设施大棚内驯化培育到30cm高，

根颈部位粗在0.5cm左右。按株距30cm、行距150cm，把以上驯化苗木移栽到田间培育。

6.2第一年管理

6.2.1水肥管理

1

DB32/T3901—2020

生长季根据天气情况灌水，保持土壤相对含水量75%左右。施肥2～3次（最后一次时间为压条后），

每次施肥量为复合肥20kg/亩～30kg/亩，根据长势追加适量尿素，同时补充叶面肥(顶绿螯合铁6000

倍+优聪素700倍)。

6.2.2除草

杂草高于5cm时，应进行人工除草。期间可以适当增加短截促进分枝的处理，以保证后面压条的枝

条数量。

6.2.3病虫害防治

按NY/T1085—2006规定执行。

6.2.4压条

6.2.4.1时间

10月中下旬（新梢停长后）。

6.2.4.2方法

6.2.4.2.1修剪压条前剪去梢部不充实部分，同时剪去长势弱、生长方向与压条方向相反的侧枝（剪

到离侧枝的基部3cm～5cm处）。

6.2.4.2.2开沟沿砧木行两侧开宽50cm左右（宽度须足够容纳全部压条）、深约10cm的浅沟。

6.2.4.2.3压条采用顺行编织，辅以竹签别枝的办法将所有大枝错落压实，必须将全部枝条平卧在浅

沟底部。

6.2.4.2.4覆土压条后用细土将裸露在外的枝条覆盖。

6.3第二年管理

6.3.1水肥管理

在苗木高度10cm～15cm和覆锯末之前分两次进行追肥，每次施复合肥20kg/亩～30kg/亩。覆完

锯末以后，适时灌水，自根砧压条繁殖，水分是生根的关键，始终保持土壤相对含水量75%左右。

6.3.2覆锯末

6.3.2.1第一次覆腐熟锯末子砧苗高度30cm左右时开始第一次覆锯末，厚度5cm～10cm。

6.3.2.2第二次覆腐熟锯末子砧苗高度40cm～45cm时开始第二次覆锯末，厚度5cm～10cm。以后

多次覆盖，直至锯末厚度达到50cm。

6.3.2.3覆土每次覆锯末后，持续灌水，待锯末湿度达到手握成团时开始覆土，覆土高度3cm～5cm。

6.3出圃

秋季落叶后即可出圃，可采用机械出苗，按GB9847分级并贮藏。

7嫁接及定植

7.1接穗准备

落叶后剪取脱毒优良苹果品种芽体饱满的一年生中庸枝条为接穗，沙藏或保湿冷藏。

2

DB32/T3901—2020

7.2嫁接时期和方法

嫁接时期为春季，方法为枝接。采用坐地嫁接或室内嫁接；砧木粗度要求0.8cm～1.0cm。

7.3嫁接苗定植

将嫁接好的苗木栽植到苗圃中，栽植密度为株距30cm、行距80cm。

8嫁接苗管理

8.1成活率检查

嫁接后10天检查成活率，及时补接。

8.2嫁接苗修剪

秋季落叶后嫁接苗剪除分枝，第二年当植株长至120cm时定干，同时连续施用整枝灵2次，间隔1

周，促进分枝，并立支架绑缚。第一次整枝灵亩用12ml，兑水20kg喷雾，第二次亩用13ml，兑水20kg～

25kg喷雾，要喷在枝条的嫩尖和顶芽上。

8.3肥水管理

同6.1.1。

8.4病虫害防治

同6.1.3。

9嫁接苗出圃

嫁接苗在苗圃中生长2年，当苗木分枝达到5个以上，嫁接口上10cm处苗木直径达到1.5cm以上可

以出圃。按GB8370进行苹果苗木产地检疫，检疫合格可以出圃。

10记录

对生产全过程进行记录，生产档案保存2年。

3

DB32/T3901—2020

附录A

（规范性附录）

脱毒苹果砧木苗及苹果品种苗的获得

A.1苹果品种和砧木初代组培苗获得

A.1.1培养基的配制

采用1/2MS培养基，培养基成分为：1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+1g/LPVP+30g/L蔗糖

+7g/L琼脂。

A.1.2植物材料准备和灭菌接种

剪取幼苗顶部1cm～2cm（含生长点）茎段作为外植体进行初代培养。用75%酒精处理45s，然后

再用10%过氧化氢消毒20min后接种。

A.2组培苗继代增殖扩繁

继代增殖扩繁培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH=5.8。

A.3苹果茎尖超低温脱毒处理

A.3.1茎尖预培养

取组培苗约2mm左右的茎尖，接种于MS+6.0g/L琼脂粉+0.75mol/L蔗糖的培养基中，25℃暗培养3

d。

A.3.2装载

取预培养过的茎尖，放入装载溶液中，装载溶液为MS+2mol/L甘油+0.75mol/L蔗糖，pH=5.8。处

理温度为25℃，处理时间为60min。

A.3.3超低温处理

将装载过的茎尖转移到pH5.8的PVS-2溶液中，处理温度为0℃，处理时间为2h。然后转入10mL

冻存管中，直接投入液氮中处理1h。PVS-2溶液为：MS+30%(W/V)甘油+15%(W/V)聚乙二醇+15%

(W/V)DMSO(二甲基亚砜)+0.4mol/L蔗糖。

A.3.4解冻

从液氮中取出冻存管，快速转移到40℃的水浴锅中，处理2min。然后取出茎尖放入MS+1.2mol/L

的蔗糖溶液中20min，直到茎尖漂浮在液体表面。

A.3.5茎尖再生培养

将处理过的茎尖转入增殖培养基中，暗培养1周后进行光照培养。一个月后将再生株系进行继代扩

繁，增殖扩繁培养基为：MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH5.8。

4

DB32/T3901—2020

A.4再生植株的病毒检测

按GB/T12943—2007进行苹果无病毒母本树和苗木检测，根据GenBank登录的ACLSV、ASGV、

ASPV、APMV、ASSVD等5种病毒外壳蛋白序列设计引物，结合苹果内参基因TUB特异性片段分别进

行PCR扩增验证，从而检测再生植株是否含有病毒。

A.5扩繁、炼苗和移栽

经过病毒检测的无病毒组培苗进行扩繁、炼苗和移栽。

A.6脱毒原种的保存

脱毒原种的保存的方式有田间原种保存圃保存和室内组培保存。

A.6.1田间原种保存圃保存

无病毒原种树定植于有防虫保护网设备的网室内或专门的温室里，并远离有病毒潜伏来源的果园2

km以上。

A.6.2组培保存

由组织培养方法获得的无病毒原种可以保留在瓶内继代培养。如果需用接穗，可以扩繁几代，移至

田间。

A.6.3病毒检测

无病毒原种树每5年应进行1次病毒检测，发现问题即剔除。

___________________________

5

DB32/T3901—2020

前  言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由南京农业大学提出。

本标准由江苏省园艺标准化委员会归口。

本标准起草单位：南京农业大学、江苏徐淮地区徐州农业科学研究所、江苏省大沙河现代农业综合

开发集团有限公司。

本标准主要起草人：渠慎春、赵林、张忠伟、侯应军、陈卫平、王磊彬、高志红。

I

DB32/T3901—2020

脱毒矮化自根砧苹果苗木繁育技术规程

1范围

本标准规定了采穗圃营建、矮化砧木的选择、砧木苗培育、嫁接及定植、嫁接苗管理、嫁接苗出圃

等矮化自根砧苹果苗木繁育技术。

本标准适用于脱毒苹果矮化自根砧苗木的繁育。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB8370苹果苗木产地检疫规程

GB9847苹果苗木

GB/T12943—2007苹果无病毒母本树和苗木检疫规程

NY/T1085—2006苹果苗木繁育技术规程

3采穗圃营建

按NY/T1085—2006规定执行。

4矮化砧木的选择

矮化砧木可以选择M9T337、M9、B9等。

5脱毒砧木苗及苹果品种苗获取

见附录A。

6砧木苗培育

6.1砧木组培苗移栽

经过病毒检测的脱毒组培苗进行炼苗并移栽到营养钵中，然后在设施大棚内驯化培育到30cm高，

根颈部位粗在0.5cm左右。按株距30cm、行距150cm，把以上驯化苗木移栽到田间培育。

6.2第一年管理

6.2.1水肥管理

1

DB32/T3901—2020

生长季根据天气情况灌水，保持土壤相对含水量75%左右。施肥2～3次（最后一次时间为压条后），

每次施肥量为复合肥20kg/亩～30kg/亩，根据长势追加适量尿素，同时补充叶面肥(顶绿螯合铁6000

倍+优聪素700倍)。

6.2.2除草

杂草高于5cm时，应进行人工除草。期间可以适当增加短截促进分枝的处理，以保证后面压条的枝

条数量。

6.2.3病虫害防治

按NY/T1085—2006规定执行。

6.2.4压条

6.2.4.1时间

10月中下旬（新梢停长后）。

6.2.4.2方法

6.2.4.2.1修剪压条前剪去梢部不充实部分，同时剪去长势弱、生长方向与压条方向相反的侧枝（剪

到离侧枝的基部3cm～5cm处）。

6.2.4.2.2开沟沿砧木行两侧开宽50cm左右（宽度须足够容纳全部压条）、深约10cm的浅沟。

6.2.4.2.3压条采用顺行编织，辅以竹签别枝的办法将所有大枝错落压实，必须将全部枝条平卧在浅

沟底部。

6.2.4.2.4覆土压条后用细土将裸露在外的枝条覆盖。

6.3第二年管理

6.3.1水肥管理

在苗木高度10cm～15cm和覆锯末之前分两次进行追肥，每次施复合肥20kg/亩～30kg/亩。覆完

锯末以后，适时灌水，自根砧压条繁殖，水分是生根的关键，始终保持土壤相对含水量75%左右。

6.3.2覆锯末

6.3.2.1第一次覆腐熟锯末子砧苗高度30cm左右时开始第一次覆锯末，厚度5cm～10cm。

6.3.2.2第二次覆腐熟锯末子砧苗高度40cm～45cm时开始第二次覆锯末，厚度5cm～10cm。以后

多次覆盖，直至锯末厚度达到50cm。

6.3.2.3覆土每次覆锯末后，持续灌水，待锯末湿度达到手握成团时开始覆土，覆土高度3cm～5cm。

6.3出圃

秋季落叶后即可出圃，可采用机械出苗，按GB9847分级并贮藏。

7嫁接及定植

7.1接穗准备

落叶后剪取脱毒优良苹果品种芽体饱满的一年生中庸枝条为接穗，沙藏或保湿冷藏。

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7.2嫁接时期和方法

嫁接时期为春季，方法为枝接。采用坐地嫁接或室内嫁接；砧木粗度要求0.8cm～1.0cm。

7.3嫁接苗定植

将嫁接好的苗木栽植到苗圃中，栽植密度为株距30cm、行距80cm。

8嫁接苗管理

8.1成活率检查

嫁接后10天检查成活率，及时补接。

8.2嫁接苗修剪

秋季落叶后嫁接苗剪除分枝，第二年当植株长至120cm时定干，同时连续施用整枝灵2次，间隔1

周，促进分枝，并立支架绑缚。第一次整枝灵亩用12ml，兑水20kg喷雾，第二次亩用13ml，兑水20kg～

25kg喷雾，要喷在枝条的嫩尖和顶芽上。

8.3肥水管理

同6.1.1。

8.4病虫害防治

同6.1.3。

9嫁接苗出圃

嫁接苗在苗圃中生长2年，当苗木分枝达到5个以上，嫁接口上10cm处苗木直径达到1.5cm以上可

以出圃。按GB8370进行苹果苗木产地检疫，检疫合格可以出圃。

10记录

对生产全过程进行记录，生产档案保存2年。

3

DB32/T3901—2020

附录A

（规范性附录）

脱毒苹果砧木苗及苹果品种苗的获得

A.1苹果品种和砧木初代组培苗获得

A.1.1培养基的配制

采用1/2MS培养基，培养基成分为：1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+1g/LPVP+30g/L蔗糖

+7g/L琼脂。

A.1.2植物材料准备和灭菌接种

剪取幼苗顶部1cm～2cm（含生长点）茎段作为外植体进行初代培养。用75%酒精处理45s，然后

再用10%过氧化氢消毒20min后接种。

A.2组培苗继代增殖扩繁

继代增殖扩繁培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH=5.8。

A.3苹果茎尖超低温脱毒处理

A.3.1茎尖预培养

取组培苗约2mm左右的茎尖，接种于MS+6.0g/L琼脂粉+0.75mol/L蔗糖的培养基中，25℃暗培养3

d。

A.3.2装载

取预培养过的茎尖，放入装载溶液中，装载溶液为MS+2mol/L甘油+0.75mol/L蔗糖，pH=5.8。处

理温度为25℃，处理时间为60min。

A.3.3超低温处理

将装载过的茎尖转移到pH5.8的PVS-2溶液中，处理温度为0℃，处理时间为2h。然后转入10mL

冻存管中，直接投入液氮中处理1h。PVS-2溶液为：MS+30%(W/V)甘油+15