1.2.1+微生物的培养技术及应用（课件）（共28张）-（新教材人教版选择性必修3）

人教版生物（高中）学易同步同步课堂微生物的培养技术及应用第1章第2节（建议2课时）学习目标核心素养1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。2．阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。3．概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室进行微生物分离和纯化的常用方法。1.科学思维：根据微生物的代谢类型分析培养基的组成。2．科学探究：讨论并掌握无菌技术的实验操作方法；讨论并掌握微生物的纯培养的方法。1课堂导入

经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，在经过发酵就可以制成酸奶，由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶，自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜，主要原因是制作过程中有杂菌混入。那么怎么才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？这需要应用无菌技术和微生物的培养技术微生物的基本培养技术（一）培养条件：提供合适的营养和环境条件确保其它微生物无法混入培养基无菌技术引入概念12一、培养基的配制（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质。1、培养基（2）作用：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。（3）类型标准培养基种类培养基特点作用物理性质固体培养基加凝固剂，如琼脂微生物的分离与鉴定，活菌计数，保藏菌种半固体培养基容器放倒不致流出，剧烈震动则破散观察微生物的运动、分类鉴定液体培养基不加凝固剂常用于工业生产功能选择培养基根据某种微生物的特殊营养要求配置选择分离鉴别培养基加入能与目的菌的代谢产物发生显色反应的指示剂鉴定成分来源天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基用已知的化学物质配制分类鉴定2、培养基的配制（1）营养成分：水、无机盐、碳源、氮源，此外还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的需求。表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10g氮源和维生素等NaCl5g无机盐H2O定容至1000ml水（2）还需满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的需求霉菌（pH调至酸性）细菌（pH调至中性或微碱性）厌氧生物（无氧条件）特殊营养物质：维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等(牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）乳酸菌（要添加维生素）引入概念22二、无菌技术1.获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染主要包括消毒和灭菌2.消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。接种室、接种箱或超净工作台可用紫外线照射30min100℃煮沸5-6min62-65℃下煮30min或80-90℃处理30s-1min用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源等煮沸消毒巴氏消毒化学药剂消毒紫外线消毒3.灭菌

指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。湿热灭菌干热灭菌灼烧灭菌利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌。高压蒸汽灭菌效果最好，100kPa、121℃下维持15-30min，常用于培养基、无菌水等的灭菌。160-170℃下加热2-3h。常用于玻璃器皿和金属器具。常用于接种环、接种针、试管口等的灭菌。类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h湿热灭菌培养基、培养皿等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121℃,15～30min接种室、接种箱，超净工作台4.比较引入概念32三、微生物的纯培养（1）概念：由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。1、纯培养（2）步骤：1）配制培养基2）灭菌（培养基和器具）3）微生物接种4）分离5）恒温箱中培养探究实践酵母菌的纯培养（1）原理：微生物群分散或稀释单个细胞单个菌落繁殖菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。

采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。（2）方法：（3）步骤1、制备培养基1）配制培养基称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml.2）灭菌将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min.将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h.3）倒平板待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置倒平板注意事项：连续划线法分区划线法(1)“平板划线”实验操作2、接种和分离酵母菌通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞3、将试管口通过火焰.4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液5、将试管通过火焰，并塞上棉塞6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连8、将平板倒置放入培养箱中培养。3、培养酵母菌完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-28h.3课堂活动（小组讨论）

请同学们小组为单位思考以下问题？（1）培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。

将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。（3）怎么确定所倒平板未被杂菌污染？（2）平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。（4）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞杀死接种环上原有微生物灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后课堂巩固4

答案：A1、下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50℃左右时倒平板D．待培养基冷却凝固后将平板倒过来放置

答案：B2、下列关于灭菌和消毒的说法不正确的是()A．灭菌是指杀死环境中的所有微生物，包括芽孢和孢子B．灭菌和消毒实质上是相同的C．接种环用灼烧法