肿瘤超早期筛查在体检中的应用

肿瘤超早期筛查在体检中的应用癌症分子解析preMiD技术在肿瘤早期筛查中的应用案例分享总结主要内容第2页,共56页，2024年2月25日，星期天恶性肿瘤现状恶性肿瘤已成为人类的“头号杀手”。全球每年新发肿瘤>1400万人，死亡约820万人。预计2025年，因人口增加和老龄化等因素，每年新增超2000万病例。“2012年中国肿瘤登记年报”数据表明，中国每年新发肿瘤约310万人，死亡270万人（右上图）。近60年来癌症致死率没有明显下降（右下图）。第3页,共56页，2024年2月25日，星期天世卫组织（WHO）：早发现早诊断早治疗“三早”是关键，“早发现”是根本!

目前还无法攻克癌症（尤其是中晚期）；

癌症可防、可治：

癌前阶段：可实现近100%预防

早期癌症：可以实现80%治愈率晚期癌症：仅30%人活过5年。按照平均寿命74岁计算，人一生中患癌几率是22%。从年龄看，45岁以后发病率上升明显，应在40岁开始重视针对肿瘤的专项检查。2014世界癌症报告“抗击癌症，重在预防”第4页,共56页，2024年2月25日，星期天癌症的分子解析第5页,共56页，2024年2月25日，星期天ICGC：癌症基因组学研究国际癌症基因组联盟(InternationalCancerGenomeConsortium，ICGC)2014年2月4日公布超过1万个癌症基因组的数据。

2013年12月5日ICGC宣布：在原来白血病、膀胱癌、胃癌的基础上，中国又发起针对肠癌、食道癌、肝癌的驱动基因检测项目。

“眼下癌症诊治急需新的途径。如果能更好地从基因组来了解癌症，那么将更有利于癌症的预防和控制。"

——TomHudson安大略癌症研究所（OICR）所长、ICGC创始人之一第6页,共56页，2024年2月25日，星期天致癌突变（oncogenicmutations）到肿瘤形成需要10-20年；期间，涉及多基因的异常发生，具有早期性和特异性：（早期性：分子异常是癌症发生的早期事件；特异性：分子异常是癌症发生的特有标记）癌变的分子事件AlfredG.Knudson,NatureRev.Cancer,

1,157-162(2001)CarloM.Croce,N.Engl.J.Med.

358,502-511(2008)第7页,共56页，2024年2月25日，星期天第8页,共56页，2024年2月25日，星期天原癌基因（Proto-oncogene）原癌基因是是细胞内与细胞增殖相关的高度保守的基因。原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时（此时转化为癌基因），使细胞过度增殖。第9页,共56页，2024年2月25日，星期天抑癌基因（TumorSuppressor）抑癌基因一般调控DNA的修复和细胞凋亡。在被激活情况下它们具有抑制细胞增殖作用。抑癌基因突变能导致活性降低或消失，从而减弱甚至消除抑癌作用。第10页,共56页，2024年2月25日，星期天Sanger研究所：Cosmic数据库EmerginglandscapeofoncogenicsignaturesacrosshumancancersNatureGenetics45,1127–1133(2013)http://cancer.sanger.ac.uk/cancergenome/projects/cosmic/肠癌中基因异常发生率GaoH.etal,CancerRes.,54,4342-4346(1994)MorganC.etal,Br.J.Cancer,89,,1314-1319(2003)第11页,共56页，2024年2月25日，星期天

preMiD技术在肿瘤早期筛查中的应用第12页,共56页，2024年2月25日，星期天传统检测突变检测癌症的“冰山学说”早期癌症几乎没有症状，极其容易被传统检测所忽视，一旦检出，则大部分为中晚期。preMiD超早期防癌检测，提前约3年预防发现潜伏体内的癌症或癌前病变。preMiD®超早期防癌检测，提前临床症状3-5年预警！第13页,共56页，2024年2月25日，星期天突变preMiD®技术检测的是来自于肿瘤相关的原癌基因和抑癌基因的异常突变。第14页,共56页，2024年2月25日，星期天基因突变类型如下：第15页,共56页，2024年2月25日，星期天血液循环肿瘤DNA（ctDNA）来源NatRevCancer.2011Jun;11(6):426-37ctDNA由癌变细胞死亡、凋亡或主动分泌进入循环系统cfDNA的长度一般为100-500碱基，携带有癌症细胞内部所含异常信息，如突变、copy数变化、甲基化、融合基因及染色体异常等。血液中含有驱动突变或致癌突变分子，意味身体内有癌变细胞。

“ctDNA是最有希望发现早期癌症”

——美国约翰霍普金斯大学LuisDiaz博士Free-floatingDNAfromtumorcouldprovideearlywarning！——USAtoday第16页,共56页，2024年2月25日，星期天分子癌变阶段（8-10年）细胞癌变阶段（3-5年）细胞簇形成组织形成早癌（1-3年）中晚期癌（？）1.不死2.无限增殖3.表型正常1.逃避免疫监视2.形成新血管3.异性增生常规手段可以检测preMiD可以第17页,共56页，2024年2月25日，星期天血浆突变检测技术-preMiD挑战血浆游离DNA含量极低突变DNA占比低于0.1%血浆成分复杂某些屏障存在………………应对preMiD检测基于PCR，扩增DNA融合Blocker、偏向扩增及熔点分析，极大提高灵敏度纳米技术提高核酸萃取效率新技术平台的融入第18页,共56页，2024年2月25日，星期天preMiD®

=Blocker+ASA+MCA突变偏向扩增系统（ASA）PCR引物的3'端位必须和突变扩增子匹配，而野生不匹配采用特异探针，实时PCR反应熔解曲线分析（MeltingCurveAnalysis）荧光vs温度作图得到DNA熔解曲线DNA溶解曲线是DNA序列的“指纹”核酸blocker阻滞野生扩增设计野生匹配blocker（含PNA修饰）阻滞对野生片段扩增三种已有技术的有机结合成preMiD，灵敏度达到0.01%，特异性近100%。第19页,共56页，2024年2月25日，星期天美国斯坦福癌症研究院近30年调查研究发现：癌前阶段，癌症是可逆性“工程”。消除突变，抑制癌变第20页,共56页，2024年2月25日，星期天正常DNADNA突变（肿瘤驱动基因）DNA修复抑癌基因诱导凋亡免疫监视失败癌

干预（突变逆转）第21页,共56页，2024年2月25日，星期天早发现与早预防突变筛查免疫力远离致癌物干预第22页,共56页，2024年2月25日，星期天突变定量分析1.对于有基因突变的受检者，同时加做突变定量值，便于后期干预有效性的对比；2.随着样本量的增加，跟踪后续发展变化，将给出突变风险提示。突变值第23页,共56页，2024年2月25日，星期天检测项目相对信号差异突变比率干预1周血浆7.8421.6%干预1月血浆1.303.4%干预3月血浆0.03₋0%结果判读胸腺肽干预后血浆中突变明显下降。突变比率相对信号差异值0%0.005%1.4210%3.9012%4.6815%5.6520%7.3925%9.0530%10.54QRAM-qPCR相对定量检测肿瘤特异突变位点在血浆中含量在干预前后的变化，判断效果。干预有效性判断

主要用途：

1.直观反应干预或治疗方案的有效性，避免无效治疗。 2.评估手术后患者基本状态，如体内有无残留或转移。 3.判断有无复发。第24页,共56页，2024年2月25日，星期天第25页,共56页，2024年2月25日，星期天第26页,共56页，2024年2月25日，星期天第27页,共56页，2024年2月25日，星期天第28页,共56页，2024年2月25日，星期天第29页,共56页，2024年2月25日，星期天preMiD专业性

preMiD®德国标准生产质控体系国际公认检测内容COSMIC数据库，包含突变基因及位点信息，属于国际最权威机构最新研究成果。国家批准专有检测试剂美国Roche检测仪器注册号:(进)字2009第3402689号第30页,共56页，2024年2月25日，星期天preMiD®血浆突变技术验证：

NSCLC组织和血浆中EGFR突变一致性研究

肿瘤组织-测序法Total突变野生血浆-preMiD®突变34518363野生24825849Total3698431212试验单位：北京协和医院、浙江大学附属第一医院、江苏省肿瘤医院、青岛大学附属医院

Sanger测序1212例非小细胞肺癌患者肿瘤组织EGFR突变；

preMiD®法检测对应1212例血浆EGFR突变。总体结果：阳性符合率为80.49%，阴性符合率为94.66%，总符合率为90.35%

（唯一完成临床试验研究，血浆-组织突变一致性最高的结果）（已完成CFDA批准临床实验，2011年12月28号-2013年12月28号）第31页,共56页，2024年2月25日，星期天中国唯一入选国际肿瘤学术大会ASCO会议的主讲报告第32页,共56页，2024年2月25日，星期天中国医师协会preMiD项目专家论证会第33页,共56页，2024年2月25日，星期天ctDNA在国际上的应用NDRG4,BMP3NDRG4,BMP3,KRAS总灵敏度：92%sensitivity早期肠癌灵敏度：94%特异性：87%ColonGuard（EXACT）第34页,共56页，2024年2月25日，星期天ColonVantage(QUEST)ColoVantage检测血浆中SEPTIN9的甲基化状态，达到检测和预警结直肠癌的目的。ColoVantage是一种无创的检测方法灵敏度达到70%特异性达到89%适用于各个分期的结直肠癌第35页,共56页，2024年2月25日，星期天ctDNA在甲状腺癌检测中的应用基因检测对甲状腺肿瘤诊断的准确率在80%以上突变检测能够应对病理检测不能确定的情况NikiforovYEetal,JClinEndocrinolMetab.2011Nov;96(11):3390-7第36页,共56页，2024年2月25日，星期天案例分享第37页,共56页，2024年2月25日，星期天preMiD检测：FLT3突变案例一：FLT3基因突变，2年半后诊断大肠癌中晚期个人不相信，不愿面对，没有采取必要干预措施第38页,共56页，2024年2月25日，星期天案例二：KRAS突变检测者：男性，35岁，重庆人家族史：其父患肺癌进行preMiD检测：KRAS基因突变第39页,共56页，2024年2月25日，星期天KRAS突变报告解读：结合健康问卷及专家咨询其父患肺癌作息紊乱干咳、胸闷近期没有体检资料结合该情况给出建议：进行胸部增强CT检查，判断突变在哪个阶段（临床前期或临床阶段）第40页,共56页，2024年2月25日，星期天KRAS突变2014年5月8日右肺下叶斜裂旁小结节影肝左叶多发小囊肿第41页,共56页，2024年2月25日，星期天KRAS突变—干预方案匹多莫德口服液服用方法：1支（10ml）/次，2次/日（早晚空腹服用）3个月为一周期第42页,共56页，2024年2月25日，星期天KRAS突变--跟踪随访2014年9月9日胸部CT增强未发现肿瘤第43页,共56页，2024年2月25日，星期天干预后4个月进行突变复查及突变定量分析：复查结果，基因仍有突变，并对再次突变情况进行与第一次的定量值分析，突变较之前下降。KRAS突变--复查及定量第44页,共56页，2024年2月25日，星期天案例三：THR-α基因突变检测者：男性，41岁，南京人进行preMiD检测：THR-α基因突变第45页,共56页，2024年2月25日，星期天THR-α基因突变报告解读：结合健康专家咨询作息紊乱20年吸烟史，每日1包近期没有体检资料第46页,共56页，2024年2月25日，星期天THR-α基因突变右颈部、颌下多发小淋巴结，部分淋巴结FDG代谢增高；甲状腺瘤可能第47页,共56页，2024年2月25日，星期天THR-α基因突变--干预方案胸腺肽a1方法：1支（1.6mg）/次，1次/周，皮下注射3个月为一周期第48页,共56页，2024年2月25日，星期天干预后3个月进行突变复查及突变定量分析：复查结果：突变消失。THR-α基因突变--干预方案第49页,共56页，2024年2月25日，星期天病理：肺腺癌案例四：EGFR突变确诊6mm早癌检测者男性，62岁，无锡人士，某医院院长，体检发现肺内有6mm孤立影，不能确定其性质，经preMiD®检测发现EGFR突变。该检测者在上海肺科医院行胸腔镜手术，取出病理为肺腺癌。第50页,共56页，2024年2月25日，星期天案例五：FHIT突变确诊胃癌晚期检测者男性，62岁，机关干部，既往慢性胃病史，平时喜食蒜泥等刺激食物。经preMiD®检测：FHIT突变，后追加蛋白标志物FMD1值异常升高。建议进一步胃镜检查，结果为低分化腺癌晚期，对化疗均不敏感。病理：低分化腺癌第51页,共56页，2024年2月25日，星期天案例六：宫颈癌复发监控案例