破伤风抗毒素的质量控制标准

1/1破伤风抗毒素的质量控制标准第一部分原料及辅料质量控制标准 2第二部分制品生产工艺过程控制 3第三部分成品物理化学性状指标 6第四部分生物学活性检测方法 8第五部分无菌试验及方法 11第六部分动物毒性试验方法 13第七部分包装和标签要求 15第八部分储存和有效期 17

第一部分原料及辅料质量控制标准原料及辅料质量控制标准

1.原料

1.1生物制品原料

*破伤风毒素：应符合《药典》规定。

*破伤风抗毒素标准品：应符合《药典》规定。

*马血清：应符合《兽药典》规定。

1.2非生物制品原料

*磷酸氢二钠：应符合《药典》规定。

*氯化钠：应符合《药典》规定。

*硫酸铵：应符合《药典》规定。

*酒精：应符合《药典》规定。

*甲苯：应符合《药典》规定。

*氢氧化钠：应符合《药典》规定。

*盐酸：应符合《药典》规定。

2.辅料

*防腐剂（硫柳汞）：应符合《药典》规定。

*稳定剂（明胶）：应符合《兽药典》规定。

*稀释剂（无菌注射用水）：应符合《药典》规定。

3.质量检测

3.1原料

3.1.1生物制品原料

*破伤风毒素：毒性检定（小鼠）、无菌检定、电泳纯度。

*破伤风抗毒素标准品：毒性中和试验、纯度、比效力。

*马血清：无菌检定、特异性蛋白测定、外来蛋白测定。

3.1.2非生物制品原料

*磷酸氢二钠：纯度、水分、重金属。

*氯化钠：纯度、水分、重金属。

*硫酸铵：纯度、水分、重金属。

*酒精：纯度、水分、甲醇含量。

*甲苯：纯度、水分、蒸馏范围。

*氢氧化钠：纯度、水分。

*盐酸：纯度、水分。

3.2辅料

*防腐剂：毒性试验证（小鼠）、无菌检定、比重。

*稳定剂：分子量、粘度、无菌检定。

*稀释剂：无菌检定、导电率、重金属。

4.放行标准

原料和辅料均应符合规定的质量标准方可放行用于破伤风抗毒素生产。第二部分制品生产工艺过程控制关键词关键要点原料控制

1.破伤风抗毒素原料包括血清、抗毒素和稀释剂等。

2.原料必须符合国家药典或相关标准规定，并经检验合格。

3.原料应储存在符合规定条件的环境中，并定期进行检验，确保其质量稳定。

生产工艺控制

1.生产工艺应严格按照国家药典或相关标准进行，并建立完善的生产工艺规程。

2.生产过程中，应严格控制各工艺参数，确保生产条件符合工艺要求。

3.生产过程中，应进行过程控制检验，及时发现和纠正生产中的偏差。

设备控制

1.生产设备应符合国家药典或相关标准规定，并定期进行清洁、消毒和维护。

2.生产过程中，应定期对设备进行校准和验证，确保其符合工艺要求。

3.应建立设备使用和维护记录，并定期进行审核。

环境控制

1.生产环境应符合国家药典或相关标准规定，包括温度、湿度、洁净度等。

2.应建立环境监测和控制系统，定期进行环境监测，确保环境条件符合工艺要求。

3.应采取措施防止交叉污染和微生物污染。

人员控制

1.生产人员应经过专业培训，并熟练掌握生产工艺和质量控制要求。

2.生产人员应遵守生产规程，确保生产操作符合工艺要求。

3.应定期对生产人员进行健康检查，并建立健康记录。

检验控制

1.成品应进行严格的检验，包括效价测定、无菌试验、安全性试验等。

2.检验应按照国家药典或相关标准进行，并由合格的检验人员执行。

3.检验结果应记录保存，并定期进行审核。制品生产工艺过程控制

破伤风抗毒素的生产工艺涉及多个关键步骤，需要严格的工艺控制才能确保制品的质量和安全性。

培养基制备和接种

*培养基必须满足破伤风杆菌生长的营养需求，并确保无杂菌污染。

*接种量应严格控制，以确保破伤风杆菌的最佳生长和毒素产生。

培养和毒素产生

*培养条件（温度、pH值、搅拌速度）必须优化，以最大化毒素产生。

*培养过程监测包括pH值、搅拌速率、营养物质消耗和毒素浓度。

毒素回收和精制

*毒素从培养液中回收，通常通过沉淀、离心和过滤。

*精制过程旨在去除杂质、蛋白变性产物和内毒素，同时保持毒素的免疫活性。

毒素浓度和纯度的测定

*毒素浓度通过生物检定或免疫学方法（如酶联免疫吸附测定）测定。

*纯度通过凝胶电泳、免疫电泳和质谱分析等方法评估。

无菌和热原检测

*制品必须符合无菌标准，以防止微生物污染。

*热原检测通过注射测试进行，以评估是否存在热原，这可能导致发热或其他不良反应。

稳定性测试

*稳定性测试在各种条件下进行（温度、光照、pH值），以评估制品的保质期。

*数据分析包括毒素浓度、纯度和活性的变化。

其他工艺控制

*生产过程中使用的所有设备、试剂和材料必须符合既定的规格和质量标准。

*人员操作必须经过培训和认证，以确保工艺的一致性。

*工艺控制记录必须详细记录，以便审查和验证。

符合性标准

破伤风抗毒素的工艺控制标准基于以下法规和指南：

*《世界卫生组织生物制剂质量控制工作组报告》（TRS932）

*《美国药典》（USP）

*《欧洲药典》（Ph.Eur.）

*《中国药典》（ChP）

遵循这些标准有助于确保制品的质量、安全性和有效性。第三部分成品物理化学性状指标关键词关键要点【净度】：

1.产品呈无色或浅黄色澄清液体，不含可见异物。

2.通过目测或微粒检测确认，确保产品不含悬浮颗粒或杂质。

3.净度符合国家标准或药典规定，以保证制剂的质量和患者用药安全。

【pH值】：

成品物理化学性状指标

1.外观

*液体制剂：澄清或微有混浊的无色至淡黄色液体

*冻干粉制剂：白色或类白色疏松团块或粉末

2.pH值

*液体制剂：6.0～7.0

*冻干粉制剂：复溶后：6.0～7.0

3.蛋白质含量

*液体制剂：≥1500IU/mL

*冻干粉制剂：≥3000IU/瓶

4.比重

*液体制剂：1.00～1.03

*冻干粉制剂：复溶后：1.00～1.03

5.比旋转度

*液体制剂：-3°～+3°

6.稳定性试验

*25℃下放置30天：外观无明显变化，pH值变化不超过0.5，蛋白质含量损失不超过10%。

*37℃下放置7天：外观无明显变化，pH值变化不超过0.5，蛋白质含量损失不超过10%。

7.灭菌试验

*符合《中华人民共和国药典》2020年版四部通则0401微生物限度检查规定。

8.无热原试验

*符合《中华人民共和国药典》2020年版四部通则0831无热原性试验规定。

9.抗体成分鉴定

*凝胶电泳：显示出与对照标品一致的抗体谱带。

*免疫印迹法：显示出与对照标品一致的抗体识别模式。

10.活性效价检定

*中和试验：符合《中华人民共和国药典》2020年版四部通则0805抗毒素potency测试规定。

11.特异性试验

*与特异性抗原反应，与非特异性抗原不反应。

12.溶菌试验

*在含破伤风毒素培养基中培养，显示出溶菌环。

13.毒性试验

*皮下注射小鼠，观察7天，无明显毒性反应。第四部分生物学活性检测方法关键词关键要点小鼠致死剂量50法

1.建立小鼠致死剂量50(LD50)曲线，确定抗毒素能中和破伤风毒素的最小量。

2.根据中和1LD50破伤风毒素所需的抗毒素量，计算每毫升抗毒素的国际单位(IU)。

3.使用公式LD50=1/IU（每毫升）进行计算。

小鼠被动保护试验

1.将抗毒素注射给小鼠，然后通过注射破伤风毒素来对小鼠进行攻击。

2.根据小鼠是否存活，评估抗毒素的保护效果。

3.通过比较注射和未注射抗毒素的小鼠存活率，来确定抗毒素的有效性。

组织培养中和试验

1.使用Vero细胞或其他敏感细胞，建立细胞培养模型。

2.将抗毒素与破伤风毒素一起孵育，然后添加到细胞培养物中。

3.根据细胞存活率或细胞病变效应，评估抗毒素的中和能力。

SDS电泳分析

1.使用SDS电泳技术，分离抗毒素中的蛋白质。

2.根据分子量鉴定抗毒素的纯度和完整性。

3.通过比较不同批次抗毒素的电泳图谱，确保一致性。

HPLC分析

1.使用高效液相色谱(HPLC)技术，分离抗毒素中的杂质和降解产物。

2.根据保留时间和峰面积，评估抗毒素的纯度和稳定性。

3.通过比较不同批次抗毒素的HPLC图谱，确保产品质量控制。

实时荧光定量PCR

1.使用荧光定量PCR技术，检测破伤风毒素基因。

2.根据扩增曲线，定量检测样品中破伤风毒素的浓度。

3.通过抑制PCR扩增，评估抗毒素对破伤风毒素的结合和中和能力。生物学活性检测方法

破伤风抗毒素的生物学活性检测是评价抗毒素效力的重要指标，常用的方法有以下几种：

中和试验

*原理：将一定量的破伤风毒素与待测抗毒素按一定比例混合，观察混合液对小鼠致死作用的影响。

*方法：

*将小鼠随机分为试验组和对照组，每组6-8只。

*试验组小鼠注射待测抗毒素，对照组小鼠注射生理盐水。

*等待一定时间后，试验组和对照组小鼠注射相同量的破伤风毒素。

*观察小鼠存活情况，计算试验组和对照组小鼠的存活率。

*判定标准：计算抗毒素的保护率，保护率达到一定标准即可认为抗毒素具有生物学活性。

保护动物试验

*原理：将一定量的破伤风毒素接种到动物体内，然后注射待测抗毒素，观察动物的存活情况。

*方法：

*选择豚鼠或小鼠作为实验动物，每组6-8只。

*注射破伤风毒素，待动物出现中毒症状后，注射待测抗毒素。

*观察动物存活情况，计算存活率。

*判定标准：计算抗毒素的保护率，保护率达到一定标准即可认为抗毒素具有生物学活性。

小鼠痉挛试验

*原理：注射破伤风毒素会导致小鼠发生痉挛反应，待测抗毒素可减轻或消除痉挛反应。

*方法：

*注射破伤风毒素到小鼠皮下，等待小鼠出现痉挛症状。

*注射待测抗毒素到小鼠腹腔。

*观察小鼠痉挛程度，计算痉挛评分。

*判定标准：计算抗毒素的痉挛评分降低率，降低率达到一定标准即可认为抗毒素具有生物学活性。

细胞试验

*原理：破伤风毒素可抑制神经细胞生长，待测抗毒素可逆转这一抑制。

*方法：

*使用神经细胞培养基，接种神经细胞。

*添加破伤风毒素，抑制神经细胞生长。

*添加待测抗毒素，观察神经细胞生长情况。

*判定标准：计算抗毒素的细胞生长促进率，促进率达到一定标准即可认为抗毒素具有生物学活性。

以上是破伤风抗毒素生物学活性检测的常用方法，不同的方法有各自的优缺点，需要根据具体情况选择合适的检测方法。第五部分无菌试验及方法无菌试验及方法

无菌试验是评估破伤风抗毒素无菌性的重要质量控制标准。根据中国药典(2020版)的规定，无菌试验包括两部分：

1.无菌性检测

无菌性检测是检测破伤风抗毒素中是否存在活菌或真菌。其方法为：

*培养基选择：使用营养培养基（肉汤培养基或流延平板）和流延血液培养基。

*取样量：取不小于100ml的破伤风抗毒素样品。

*培养条件：在30-35℃和20-25℃下分别培养营养培养基和流延血液培养基14天。

*观察：培养期间定期观察培养基是否有肉眼可见的微生物生长。

2.验证培养基的生长促进能力

验证培养基的生长促进能力是确保无菌性检测结果准确性的重要步骤。其方法为：

*菌株选择：使用已知生长速率和培养基要求的菌株，例如金黄色葡萄球菌(ATCC6538)和念珠菌(ATCC10231)。

*接种培养基：将菌株接种到营养培养基和流延血液培养基中。

*培养条件：在30-35℃和20-25℃下分别培养营养培养基和流延血液培养基24-72小时。

*观察：观察培养基中有无明显的微生物生长。

判定标准

无菌试验的判定标准为：

*无菌性检测：培养基中无肉眼可见的微生物生长。

*培养基生长促进能力验证：培养基能够促进菌株的明显生长。

如果无菌性检测符合标准，则表明破伤风抗毒素无菌。如果培养基生长促进能力验证不符合标准，则需更换培养基或重新进行培养。

注意事项

进行无菌试验时，应注意以下事项：

*严格遵守无菌操作技术，防止样品或培养基污染。

*使用新鲜配制的培养基。

*培养过程中保持恒定温度和湿度。

*培养结束后立即观察培养基，及时记录结果。第六部分动物毒性试验方法关键词关键要点动物毒性试验方法

1.毒性试验动物选择

*

*选择对破伤风毒素敏感的动物，如小鼠或豚鼠。

*动物体重和年龄应一致，以确保试验结果可比性。

*动物应健康，无任何疾病或感染。

2.毒素制备

*动物毒性试验方法

目的

动物毒性试验旨在评估破伤风抗毒素的毒性水平，确保其安全性和有效性。

试验方法

1.小鼠LD50试验

*选择健康的小鼠，体重范围为18-22克。

*将破伤风抗毒素稀释至不同浓度。

*通过腹腔注射向每组小鼠注射不同剂量的破伤风抗毒素。

*观察注射后7天的存活率，计算LD50值。

2.豚鼠皮肤敏感性试验

*选择健康的豚鼠，体重范围为250-350克。

*将破伤风抗毒素制备成不同浓度的溶液。

*将溶液滴入豚鼠耳廓的内部表面。

*24小时后观察反应，包括红斑、肿胀或糜烂。

3.豚鼠注射毒性试验

*选择健康的豚鼠，体重范围为250-350克。

*将破伤风抗毒素稀释至不同浓度。

*通过皮下注射向每组豚鼠注射不同剂量的破伤风抗毒素。

*观察注射后7天的存活率和临床表现，包括精神状态、食欲和体重变化。

4.急性毒性试验（大鼠）

*选择健康的大鼠，体重范围为180-220克。

*将破伤风抗毒素稀释至不同浓度。

*通过腹腔注射向每组大鼠注射不同剂量的破伤风抗毒素。

*观察注射后14天的存活率和临床表现，包括行为、体重变化和血细胞学指标。

5.亚慢性毒性试验（狗）

*选择健康的狗，体重范围为10-12公斤。

*将破伤风抗毒素稀释至不同浓度。

*通过静脉注射向每组狗注射不同剂量的破伤风抗毒素，每周3次，持续4周。

*观察注射期间和注射后1个月的临床表现、体重变化、血细胞学指标和脏器病理学检查。

结果判定

*LD50值：表示引起50%小鼠死亡的破伤风抗毒素剂量。

*皮肤敏感性试验：观察结果与对照组进行比较，判断是否有阳性反应。

*注射毒性试验：观察存活率和临床表现，判断是否存在明显的毒性反应。

*急性毒性试验：观察存活率和临床表现，计算LD50值，判断急性毒性等级。

*亚慢性毒性试验：观察临床表现、体重变化、血细胞学指标和脏器病理学检查，判断是否存在亚慢性毒性反应。第七部分包装和标签要求关键词关键要点【包装要求】

1.破伤风抗毒素应包装在符合相关规定的容器和包装材料中，以防止破损、泄漏和污染。

2.容器和包装材料应具有良好的密封性、耐光性和耐温性，以保证抗毒素的稳定性。

3.容器和包装材料应符合相关法规和标准，确保其不与抗毒素成分发生反应或相互作用。

【标签要求】

包装和标签要求

破伤风抗毒素的包装和标签必须符合以下要求：

包装规格

*抗毒素应包装在无菌的、耐光的容器中，如安瓿或小瓶。

*安瓿或小瓶的容量应足以容纳规定剂量的抗毒素。

*容器应密封良好，防止内容物泄漏或污染。

*容器表面应光滑，无裂纹或其他缺陷。

标签内容

*产品名称：破伤风抗毒素

*批号：唯一标识生产批次

*规格：抗毒素单位（IU）或毫克（mg）

*生产日期：抗毒素生产的日期

*有效期：抗毒素保持其效力的期限

*制造商名称和地址：生产抗毒素的公司的名称和地址

*储存条件：抗毒素应储存的温度和光照条件

*注意：

*仅供皮下或肌肉注射使用

*开封后立即使用

*如果溶液浑浊或有沉淀物，则不可使用

*请将本品放在儿童接触不到的地方

标签格式

*标签应清晰易读，字体大小不少于8号字。

*标签应耐久、耐磨，在正常储存和运输条件下不会脱落或褪色。

*包装或标签上应有制造商或授权经销商的联系信息。

其他要求

*抗毒素应包装在符合国际运输法规的容器中。

*包装应提供对抗毒素的充分保护，防止物理损坏或污染。

*制造商应制定文件化的程序，以确保包装和标签符合所有适用的法规。第八部分储存和有效期关键词关键要点储存条件：

1.破伤风抗毒素应在2～8℃条件下储存，避免反复冻融。

2.疫苗应保存在原生产厂家提供的包装内，并避免阳光直射。

3.储存期间应定期检查疫苗温度，确保其在适宜温度范围内。

有效期：

储存条件

破伤风抗毒素应贮存在2~8℃，避光保存。避免冻结。

有效期

在规定的储存条件下，破伤风抗毒素的有效期为3年。

#稳定性测试

破伤风抗毒素的稳定性测试包括加速稳定性测试和长期稳定性测试。

加速稳定性测试：在40±2℃条件下，分别按0、3、6、9、12个月的时限进行测试。

长期稳定性测试：在2~8℃条件下，按12、24、36、48个月的时限进行测试。

通过稳定性测试，确定破伤风抗毒素在规定的储存条件下的有效期。

#失效标准

破伤风抗毒素失效的标准包括：

*外观变化：出现浑浊、沉淀或絮状物。

*pH值：pH值超出规定范围（6.5～7.5）。

*效价下降：单位效价低于标示效价的80%。

*毒性升高：动物毒性试验结果不合格。

*杂质增加：杂质含量超出规定限度。

#注意事项

*储存破伤风抗毒素时，应注意以下事项：

*储存温度应严格控制在2~8℃范围内，避免冻结或高温。

*储存环境应避光、干燥、清洁，避免阳光直射或潮湿环境。

*定期检查储存条件是否符合要求，并做好记录。

*使用破伤风抗毒素时，应注意以下事项：

*仔细检查外观，如有浑浊、沉淀或絮状物，应弃用。

*检查有效期，过期产品应销毁。

*严格按照说明书进行给药，避免过量或不足。

*使用后剩余的抗毒素应妥善保存，并尽快使用。

*通过严格控制储存条件和有效期，可以确保破伤风抗毒素的质量和疗效，保障患者的安全和有效用药。关键词关键要点抗毒血清原料质量控制标准

关键要点：

1.采血马匹的健康状况符合《中华人民共和国药典》规定，并通过相应的检疫和免疫程序。

2.采血马匹的血清经过严格筛选，确保无病原微生物、抗体干扰物和有毒物质。

3.抗毒血清原料存储在符合相关标准的条件下，避免变质和影响质量。

抗毒血清辅料质量控制标准

关键要点：

1.辅料的选择和