器械灭菌确认分享-初始污染菌测试方法的建立中

器械灭菌确认分享（三）——初始污染菌测试方法的建立（中）上海峦灵医疗信息技术有限公司5/8/202411●

生物负载（bioburden）产品上和/或产品中存活的微生物总数和/或无菌屏障系统生物负载可用于：

-灭菌过程的验证和再验证-制造过程控制的日常监控-原材料，部件或包装监控-清洁效果的评估-环境监测计划术语5/8/202422●生物负载方法适用性（bioburdenmethodsuitability）评估测试方法，以证明其允许微生物生长的能力●生物负载估计值（bioburdenestimate）通过将生物负载校正因子应用于生物负载计数而建立的值●生物负载峰值（bioburdenspike）

单个生物负载的值远远大于一组中的其他生物负载值●培养条件（cultureconditions）

促进微生物复苏、生长和/或繁殖所采用的培养基和培养方式注：培养方法可包括温度、时间或其他规定用于培养的条件术语5/8/202433●微生物鉴定（microbialcharacterization）微生物分类的过程注：可按采用的选择性培养基、菌落或细胞形态、染色特性或其他特征分类●回收率（recoveryefficiency）用某一特定技术从产品上采集和/或培养基微生物能力的测量●样品份额（SIP）被测试的医疗器械规定部分术语5/8/202444检测环境5/8/202455检验所需的主要设备超净工作台5/8/202466检验所需的设备恒温培养箱（至少2台）5/8/202477检验所需的设备压力蒸汽灭菌器5/8/202488检验所需的设备生物安全柜5/8/202499检验所需的设备电热干燥箱5/8/20241010方法判定树：产品初始污染菌的测试5/8/20241111产品初始污染菌测试步骤5/8/20241212产品的选择产品初始污染菌的测试5/8/20241313产品的选择产品初始污染菌的测试5/8/20241414产品的选择产品初始污染菌的测试5/8/20241515产品的选择医疗器械初始污染菌●包装一般不进行微生物测试除非包装作为产品整体的一部分一般情况：—进行产品的微生物检测时，产品应处于正常的包装中—可将产品从包装系统中取出并进行生物负载测试特殊情况：—组成部分预期是无菌—包装是产品的一部分—特定的评估目的5/8/20241616产品初始污染菌的测试样品份额（SIP）的选择5/8/20241717样品份额（SIP）的选择产品初始污染菌的测试5/8/20241818

SIP计算实例产品初始污染菌的测试选SIP依据产品表面积植入物（不可吸收）质量粉末手术服植入物（可吸收）长度管路（直径一致）体积杯量流体5/8/20241919讨论产品初始污染菌的测试5/8/20242020移至实验室产品初始污染菌的测试—宜尽力尽快将试验样品移至实验室—如果一定要推迟转送，试验样品的保存条件宜避免微生物的丢失或改变—宜规定贮存最长时间。5/8/20242121微生物的采集方法（使用洗脱液）产品初始污染菌的测试5/8/20242222微生物的采集方法（使用洗脱液）产品初始污染菌的测试5/8/20242323微生物的采集方法（使用洗脱液）产品初始污染菌的测试5/8/20242424微生物的采集方法（使用洗脱液）产品初始污染菌的测试5/8/20242525洗脱液、稀释液示例产品初始污染菌的测试5/8/20242626微生物采集的方法（不使用洗脱液）产品初始污染菌的测试5/8/20242727培养基和培养条件示例产品初始污染菌的测试5/8/20242828培养基适用性检查产品初始污染菌的测试一般要求：微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按照处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查，包括液体及固体培养基初始污染菌测试常用培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）——需氧菌总数测定沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）——霉菌、酵母菌总数测定5/8/20242929培养基适用性检查产品初始污染菌的测试菌种代数：不超过5代接种数量：不大于100cfu菌种种类：金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003铜绿假单胞菌CMCC(B)10104枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501白色念珠菌CMCC(F)98001黑曲霉CMCC（F）980035/8/20243030培养基适用性检查产品初始污染菌的测试胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）无菌性检查取已灭菌TSA注皿，语30~35℃培养3天，应无菌落生长试验用菌种金葡、铜绿、枯草、白念、黑曲接种方法涂布法：分别接种不大于100cfu试验用菌悬液于TSA平板表面

倾注法：分别接种不大于100cfu试验用菌悬液于无菌平皿中，倾注约15ml该培养基，轻轻摇匀适用性检查枯草芽孢菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌于30~35培养

不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉于20~25℃培养不超过5天判定标准与对照培养基比较，菌落平均数比值在0.5~2（50%~200%

范围内，且菌落形态大小一致。5/8/20243131培养基适用性检查产品初始污染菌的测试沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）无菌性检查取已灭菌TSA注皿，语20~25℃培养5天，应无菌落生长。试验用菌种白色念珠菌、黑曲霉接种方法涂布法：分别接种不大于100cfu试验用菌悬液于该平板表面

倾注法：分别接种不大于100cfu试验用菌悬液于无菌平皿中，倾注约15ml该培养基，轻轻摇匀适用性检查白色念珠菌、黑曲霉于20~25培养不超过5天判定标准与对照培养基比较，菌落平均数比值在0.5~2（50%~200%

范围内，且菌落形态大小一致备注：如该培养基用于控制菌白色念珠菌的检查时，同时需要满足控制菌项下培养基适用性检查要求5/8/20243232培养基适用性检查产品初始污染菌的测试获取菌种的方法A、药检所采购标准菌株/工作菌株，自行培养稀释B、商业化的培养基灵敏度指示剂5/8/20243333培养基适用性检查产品初始污染菌的测试获取对照培养基的方法——中国食品药品检定研究院（中检所）5/8/20243434微生物计数方法产品初始污染菌的测试5/8/20243535微生物计数方法产品初始污染菌的测试5/8/20243636微生物计数方法产品初始污染菌的测试5/8/20243737培养条件产品初始污染菌的测试胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）：30~35℃培养3~5天沙氏葡萄糖胨琼脂培养基(SDA)：20~25℃培养5~7天MPN法和供试品接种，所有试验管在30~35℃培养3~5天5/8/20243838计数规则产品初始污染菌的测试点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上薄膜过滤法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu5/8/20243939菌数报告规则产品初始污染菌的测试5/8/20244040菌数报告规则产品初始污染菌的测试5/8/20244141检测限（LOD）数据的正确使用产品初始污染菌的测试—微生物报告中，当产品的浸提液的一部分被用于检测微生物，并且得到的结果为0个菌落时，最终的结果一般会表示为小于X，其中1/X是浸提液用于检测的比例。—例如当一个产品的浸提液为400ml时，取1/4进行过滤，得到0个菌落，最终报告上会写明<4CFU，因此该方法的检测限为4，<4CFU意味着整个产品上可能会含有0,1,2,或3CFU，但微生物报告的规则要求其表示为<4CFU。5/8/20244242产品生物