高考生物总复习生物技术实践专题3酶的研究与应用选修全国公开课一等奖百校联赛示范课赛课特等奖课件

专题3酶研究与应用第1页考纲内容能力要求命题分析试验：(1)酶活力测定一般原理和方法(2)酶在食品制造和洗涤等方面应用(3)制备和应用固相化酶试验与探究能力试验与探究能力试验与探究能力 1.近几年新课标卷以综合题形式考查了影响微生物代谢中酶活性影响原因等。 2.命题趋势：与酶特征、种类、功效、酶探究试验等知识相结合，综合命题。[考纲导读]第2页一、果胶酶果胶分解酶霉菌

1.定义：果胶酶并不特指某一个酶，而是分解果胶一类酶总称，包含多聚半乳糖醛酸酶、__________和果胶酯酶等。

2.起源：植物、________、酵母菌和细菌均能产生果胶酶。

3.应用：果胶酶能够分解果胶成为可溶性____________，瓦解植物____________及胞间层，使榨取果汁变得更轻易且使果汁变得________。半乳糖醛酸细胞壁澄清第3页二、加酶洗衣粉蛋白酶

1.惯用酶制剂：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶，其中应用最广泛、效果最显著是碱性________和碱性脂肪酶。2.去污机制：蛋白质氨基酸

(1)碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有大分子________水解成可溶性________或小分子肽，使污迹轻易从衣物上脱落。

(2)脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶也能将大分子________、淀粉和________水解为小分子物质。脂肪纤维素

3.酶制剂特点：能够耐酸、耐碱、耐受表面活性剂和较高________，而且经过特殊化学物质将酶层层包裹，与洗衣粉其它成份隔离。温度第4页三、制备和应用固定化酶1.固定化酶技术产生强酸高温(1)酶通常对________、强碱、__________和有机溶剂等条件非常敏感，轻易__________。失活溶液生产成本

(2)因为酶促反应普通是在__________中进行，酶与底物和产物混合在一起，极难回收利用，提升了____________。第5页

2.固定化酶与固定化细胞技术

(1)固定化酶与固定化细胞技术：利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内技术，包含包埋法、化学结正当和物理吸附法。包埋法重复

(2)普通来说，酶更适合采取化学结正当和物理吸附法固定化，而细胞多采取________固定化。

(3)固定化酶优点：酶既能与反应物接触，又能与产物分离，还能够________利用，降低了生产成本。第6页

3.利用包埋法固定化酵母细胞

(1)包埋法：将微生物细胞均匀地包埋在不溶于水多孔性载体中。

(2)惯用载体：明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。不溶于水(3)载体特点：____________。第7页[判断正误]1.加酶洗衣粉中常加入酶制剂有蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶。()2.使用加酶洗衣粉时，应注意水温、水质等问题。()3.固定化酶含有既能与反应物接触，又能与产物分离，还能够重复利用优点。()答案：1.√2.√3.√第8页考点一探究果胶酶活性影响及其最适用量

[考点梳理] 1.试验原理

(1)酶活力测定：酶活力通常以单位时间内底物消耗量或单位时间内产物生成量来表示。

(2)果胶酶活性受温度、pH和酶抑制剂等影响；在最适条件下，果胶酶活性最高；果汁出汁率、澄清度与果胶酶活性大小成正比。果胶酶用量建立在最适温度和pH基础之上，此时研究变量是果胶酶用量，其它原因都应保持不变。

(3)果胶在果胶酶催化下形成半乳糖醛酸。第9页2.试验设计

(1)探究果胶酶最适温度时，设计多个温度梯度，其它条件应保持一致(如pH应保持一致，且最好是最适pH)，经过比较出汁率或者澄清度，确定最适合温度。(2)同理，探究果胶酶最适pH时，设计多个pH梯度，其他条件保持一致。

(3)探究果胶酶最适用量时，能够配制不一样浓度果胶酶溶液，也能够只配制一个浓度果胶酶溶液，然后使用不一样体积即可；其它条件(如温度和pH)应保持一致且是最适合条件。第10页(1)试验中所用果胶酶尽可能使用纯酶制剂或不含抑制物粗酶制剂，以免影响对酶用量估算。

(2)确定最适用量方法：若伴随酶浓度增加，过滤到果汁体积也增加，说明酶用量不足；当酶浓度增加到某个值后，再增加酶用量，过滤到果汁体积不再改变，说明酶用量已经饱和，这个值就是酶最适用量。第11页[高考探究]考向探究果胶酶活性影响及其适用量

[典例1](年海南卷)生产果汁时，用果胶酶处理果泥可提升果汁出汁率。回答以下相关问题：

(1)某同学用三种不一样果胶酶进行三组试验，各组试验除酶起源不一样外，其它条件都相同，测定各组出汁量，据此计算各组果胶酶活性平均值并进行比较。这一试验目标是_______________________________________。

(2)现有一个新分离出来果胶酶，为探究其最适温度，某同学设计了以下试验：取试管16支，分别加入等量果泥、果胶酶、缓冲液，混匀，平均分为4组，分别置于0℃、5℃、第12页10℃、40℃下保温相同时间，然后测定各试管中出汁量并计算各组出汁量平均值。该试验温度设置不足之处有__________________和__________________。

(3)某同学取5组试管(A～E)分别加入等量同种果泥，在A、B、C、D4个试验组试管中分别加入等量缓冲液和不同量同种果胶酶，然后补充蒸馏水使4组试管内液体体积相同；E组加入蒸馏水使试管中液体体积与试验组相同。将5组试管置于适宜温度下保温一定时间后，测定各组出汁量。通过A～D组试验可比较不一样试验组出汁量差异。本试验中，若要检测加入酶量等于0而其它条件均与试验组相同时出汁量，E组设计___________(填“能”或“不能”)到达目标，其原因是_____________________________________________。第13页

[解析](1)依据题意可知，用三种不一样果胶酶进行三组实验，各组试验除酶起源不一样外，其它条件都相同，据此计算各组果胶酶活性平均值并进行比较，说明该试验自变量是果胶酶起源，因变量是果胶酶活性，所以该试验目标是探究不一样起源果胶酶活性。(2)依据试验设计可知，该试验是探究果胶酶最适温度，所以自变量是温度，因变量是果胶酶活性，用出汁量进行衡量，出汁量越多则果胶酶活性越高。该试验方案中，温度应该在常温范围内设置系列温度梯度且梯度差值相等，比如4组温度可分别设置为15℃、20℃、第14页25℃、30℃；另外探究温度对酶活性影响时，应确保酶促反应只能在设定温度下进行，同一试验组反应温度只能是一个，所以试验操作应该是将各组盛有果胶酶试管与盛有果泥试管分别在设定温度下处理一定时间后再将两支试管混合，才能确保试验在设定温度下进行。(3)依据题意，若要检测加入酶量等于0而其它条件均与试验组相同时出汁量，则试验自变量是果胶酶量，因变量是出汁量。对照试验设计应遵循单一变量标准和对照标准，依据试验设置，E组应加入缓冲液而不是蒸馏水，才符合试验设计应遵照单一变量标准。第15页[答案](1)探究不一样起源果胶酶活性(2)温度范围设置不合理温度梯度设置不合理(3)不能E组加入蒸馏水而不是缓冲液违反了单一变量原则第16页[考向预测]

1.果胶是植物细胞壁以及胞间层主要成份之一。果胶酶能够分解果胶，瓦解植物细胞壁及胞间层。在果汁生产中使用果胶酶能够提升出汁率和澄清度。请你完成以下相关果胶酶和果汁生产试验课题。

试验用具和材料：磨浆机、烧杯、试管、量筒、刀片、玻璃棒、漏斗、纱布、苹果、质量分数为2%果胶酶溶液、蒸馏水等。第17页操作次序项目烧杯12①向烧杯中加入苹果泥20mL20mL②____________________2mL/③注入蒸馏水/______④在恒温水浴中保温，并 用玻璃棒不停搅拌10min10min课题一：验证果胶酶在果汁生产中作用。试验方法及步骤：(1)将苹果洗净去皮，用磨浆机制成苹果泥，加入适量蒸馏水备用。(2)取两个100mL洁净烧杯，编号为1、2，按对应程序进行操作，请把表中未填写内容填上。第18页(3)取出两个烧杯，同时进行过滤。观察(或比较)________________________________并统计结果。

预测试验结果及结论：___________________________________________________________________________________，说明果胶酶对果胶水解含有催化作用。课题二：探索果胶酶催化果胶水解适宜pH。

(4)本课题试验步骤中，在完成“烧杯中分别加入苹果泥，试管中分别注入果胶酶溶液，编号，编组”之后有下面两种操作：第19页方法一：将试管中果胶酶溶液和烧杯中苹果泥相混合，再把混合液pH分别调至4、5、6、…、10。

方法二：将试管中果胶酶溶液和烧杯中苹果泥pH分别调至4、5、6、…、10，再把pH相同果胶酶溶液和苹果泥相混合。

哪一个方法更科学？________，请说明理由：________________________________________________________________。

(5)试验步骤中也有玻璃棒搅拌操作，其目标是使__________________________，以降低试验误差。第20页答案：(2)注入果胶酶溶液2mL

(3)相同时间内滤出果汁体积和果汁澄清度 预测试验结果及结论：相同时间内1号烧杯滤出果汁体积比2号烧杯滤出果汁体积大，澄清度高(4)方法二方法二操作能够确保酶反应环境从一开始便到达试验预设pH(或方法一操作会在到达预设pH之前就发生了酶催化作用) (5)果胶酶与底物(果胶)充分接触第21页2.在果汁生产中需要用到果胶酶，某课题研究小组为了探究果胶酶一些特征，进行了以下试验：(1)请将上图所表示操作进行排序：___________。(2)试验结果：对照组与试验组进行了相同时间试验，结果以下列图中曲线甲所表示：第22页①图中自变量是温度，除此之外还可用________表示。A.酶浓度C.水加入量B.苹果泥量D.pH

②图中纵坐标还可用______________来表示。 ③试验步骤中，在果胶酶和苹果泥混合前，将二者分装在不一样试管中并进行恒温处理目标是___________________________________________________________________________。第23页温度/℃1020304050607080果汁量/mL813152515121110

④试验小组改变了试验条件后重复做试验，得到曲线乙，苹果汁澄清度最高点对应横坐标是同一位置原因是_________________________________________________________。 引发曲线乙下移原因可能是________________________________________________________________________________________________________________(最少答出两条)。(3)下表是某试验小组详细试验结果：

依据上述结果，说明当温度为________时果汁量最多，能不能确定该温度就是果胶酶最适温度？________。假如不能，请设计出深入研究果胶酶最适温度试验方案：_________________________________________________________________________________。第24页答案：(1)acdb(2)①D②苹果汁体积③确保底物和酶在混合时温度是相同④同一个酶最适温度是一定，不会因酶浓度、底物量不一样而改变pH、酶浓度和苹果泥量等原因(3)40℃不能再设置多套装置，以40℃为中心，以更小温差(如0.5℃)在更小温度范围内统计果汁产生量，果汁产量最高温度最靠近酶最适宜温度第25页考点二测定酶活力及不一样类型加酶洗衣粉洗涤效果

[考点梳理] 1.酶活力测定

(1)经过测定单位时间内麦芽糖生成量来检测淀粉酶活力。因为麦芽糖与3,5-二硝基水杨酸试剂反应生成红棕色氨基化合物。在一定范围内，麦芽糖量和红棕色物质颜色深浅程度成一定百分比关系，利用分光光度法进行比色，能够测出麦芽糖生成量。

(2)经过测定单位时间内淀粉消耗量来检测淀粉酶活力。第26页种类洗涤原理洗涤实例蛋白酶可将蛋白质水解为易溶解或分散于洗涤液中小分子肽或氨基酸血渍、奶渍及各种食品类蛋白质污垢脂肪酶把脂肪水解为较易溶解甘油和游离脂肪酸食品油渍、人体皮脂、口红淀粉酶能使淀粉快速分解为可溶性麦芽糖、葡萄糖等来自面条、巧克力等污垢纤维素酶使纤维结构变得蓬松，从而使渗透到纤维深处尘土和污垢能够与洗衣粉充分接触，抵达愈加好去污效果衣服去污2.惯用酶制剂种类及其洗涤原理和实例第27页3.探究加酶洗衣粉洗涤效果(1)试验原理①加酶洗衣粉中含有酶制剂(蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶)。②污渍中蛋白质、脂肪、淀粉、纤维素在酶制剂分解下形成小分子物质。③温度、pH、表面活性剂会影响酶活性。④酶含有专一性。第28页试验名称自变量因变量探究普通洗衣粉与加酶洗衣粉洗涤效果洗衣粉种类去污情况探究加酶洗衣粉最适温度水温探究不一样类型加酶洗衣粉洗涤效果不一样类型加酶洗衣粉(2)试验变量第29页[高考探究]考向酶活力测定

[典例2](年辽宁大连模拟)某化工厂生产一个加酶洗衣粉，其包装袋上印有以下说明：

成份：含碱性蛋白酶等。 使用方法：洗涤前先将衣物浸于洗衣粉溶液内一段时间，使用温水效果更佳。 注意：切勿用于丝质及羊毛衣料。

某研究性学习小组为探究该洗衣粉中酶催化作用最适温度，设计了如图1装置进行试验，并将结果用图2曲线图表示。第30页图1图2第31页请回答以下各题：

(1)由图可知，使用该加酶洗衣粉最适宜温度为_______。

(2)在0℃和75℃时，酶催化效率基本都为零。但当温度从75℃降到45℃时，酶催化能力已不能恢复，这是因为________________________。

(3)在试验过程中可经过直接测定_____________________________________(指标)来表示该洗衣粉中酶催化效率。

(4)当前使用加酶洗衣粉都是一次性，某洗涤公司为降低生产成本研制了一个能屡次重复使用加酶洗衣粉设备，他们将酶固定在不溶于水尼龙载体上，洗涤完衣物后，经过简单处理，这些酶还能够屡次重复利用，这种方法制成酶叫________________。第32页

(5)除加酶外，很多洗衣粉中还加有香精，高档洗衣粉中香精都是由植物芳香油制成，当前从植物中提取芳香油方法有______________________。

(6)加酶洗衣粉中淀粉酶能够从霉菌中提取。用固体培养基分离、纯化霉菌方法有__________、______________。

[解析](1)由图1及图2可知，使用该加酶洗衣粉最适宜温度为45℃。(2)当温度从75℃降到45℃时，酶催化能力已不能恢复，这是因为高温条件下酶结构已遭到破坏。(3)在试验过程中可经过直接测定胶片上蛋白膜存在时间长短第33页(指标)来表示该洗衣粉中酶催化效率。(4)将酶固定在不溶于水尼龙载体上，洗涤完衣物后，这些酶经过简单处理，还可以屡次重复利用，这种酶是固定化酶。(5)当前从植物中提取芳香油方法有萃取法、蒸馏法、压榨法等。(6)用固体培养基分离、纯化霉菌惯用方法有平板划线法、稀释涂布平板法。[答案](1)45℃(2)高温条件下酶结构已遭破坏(3)胶片上蛋白膜存在时间长短(其它合理答案亦可)(4)固定化酶(5)萃取法、蒸馏法、压榨法(6)平板划线法稀释涂布平板法第34页[考向预测]

3.(年湖北武汉调研)为了深入增强洗衣粉对血渍、奶渍、油污、土豆泥等衣物上常见污渍去除能力，洗衣粉中经常会添加各种酶类。请回答相关问题：

(1)依据衣物上常见污渍分析，加酶洗衣粉中应添加酶类有蛋白酶、__________________。蛋白酶能将血渍、奶渍等中含有大分子蛋白质水解成可溶性________。

(2)加酶洗衣粉包装袋上产品说明中标明“水温以30～50℃为宜，切忌用60℃以上热水。”依据你所学习相关知识，解释其原因：_________________________________________________。第35页脸盆编号洗涤物

(等量)

洗涤温度/%洗衣粉

(等量)水量/L洗净所需 时间/min1油污布45加酶242油污布45普通273油污布5加酶294油污布5普通28(3)下面表格中数据是探究洗衣粉洗涤效果相关试验结果，请据表回答下列问题：①该试验要探究问题是___________________________。②该试验设计表达了__________________________________________标准。

③若1号试验组中洗净所需时间靠近7min，请分析最可能原因是_______________________________________________________________。第36页答案：(1)脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶多肽(或氨基酸)

(2)酶催化作用受温度影响，30℃～50℃是加酶洗衣粉中酶最适温度范围，60℃以上热水可能会使酶活性丧失

(3)①温度对洗衣粉洗涤效果影响；洗衣粉种类对洗②单一变量标准及对照③加酶洗衣粉中酶涤效果影响变性或失效第37页水温/℃1020304050组别甲乙丙甲乙丙甲乙丙甲乙丙甲乙丙去除血渍时间/min67666852518336347711126891167去除油渍时间/min93789587639182468575277769868

4.(年广东兴宁月考)为探究洗衣粉加酶后洗涤效果，将一个无酶洗衣粉分成3等份，进行3组试验。甲、乙组在洗衣粉中加入1种或2种酶，丙组不加酶，在不一样温度下清洗同种化纤布上2种污渍，其它试验条件均相同，下表为试验记录。请回答以下问题：第38页

(1)提升洗衣粉去污能力方法有______________。甲组在洗衣粉中加入了________。乙组在洗衣粉中加入了________。

(2)甲、乙组洗涤效果差异，说明酶作用含有________________。

(3)假如甲、乙和丙3组均在水温为80℃时洗涤同一个污渍，请比较这3组洗涤效果之间差异并说明理由：____________________________。

(4)加酶洗衣粉中酶是用特殊化学物质包裹，遇水后包裹层很快溶解，释放出来酶快速发挥催化作用。请说明这是否利用了酶固定化技术及其理由：____________________。第39页

解析：(1)由表格数据可知提升洗衣粉去污能力方法有加酶和适当提升温度。甲组去除血渍所需时间相对较短，而血渍主要成份是蛋白质，说明甲组洗衣粉中加入了蛋白酶；乙组去除血渍和油渍时间都相对较短，说明乙组洗衣粉中加入了蛋白酶和脂肪酶。(2)甲、乙组洗涤效果差异，主要原因是其中酶种类不一样，说明酶含有专一性。(3)酶作用条件温和，高温(80℃)会使酶变性失活，所以3组之间没有差异。(4)因为加酶洗衣粉中酶未固定在不溶于水载体上，也不能重复利用，所以没有利用酶固定化技术。第40页答案：(1)加酶和适当提升温度蛋白酶蛋白酶和脂肪酶

(2)专一性

(3)没有差异，因为高温使酶失活

(4)未利用酶固定化技术，因为酶未固定在不溶于水载体上，也不能重复利用第41页项目游离酶固定化酶固定化细胞与底物接触面积充分接触部分接触催化反应催化某种酶促反应催化一系列酶促反应催化效率最高较高回收与重 复利用难能够固定方法—物理吸附法、化学结正当包埋法固定理由—酶分子小，轻易从包埋材料中漏出细胞大，难以被吸附或结合考点三制备和应用固定化酶

[考点梳理]1.游离酶、固定化酶和固定化细胞比较第42页

(1)物理吸附法(吸附法)是将酶吸附在载体表面一种固定方法。特点是工艺简便且条件温和，应用广泛。实质是利用酶与载体之间范德华力实现吸附。(2)化学结正当(交联法)是利用酶与载体之间形成共价键将酶进行固定。第43页操作过程理论依据注意事项成功标识活化酵母细胞新陈代谢旺盛细胞自由水含量多适宜水温，容器要足够大出现大量泡沫配制CaCl2溶液CaCl2溶于水搅拌充分溶解—配制海藻酸钠溶液海藻酸钠难溶于水，固定需要适宜浓度小火或间断加热，边加热边搅拌；定容没有焦糊并完全溶化2.酵母细胞固定化第44页操作过程理论依据注意事项成功标识混合温度过高会杀死活化酵母菌；温度过低海藻酸钠溶液会凝固，不能与活化酵母菌混合冷却至室温，再加入活化酵母菌，充分搅拌，预防出现气泡没有气泡，液体状固定化酵母细胞海藻酸钠形成凝胶能够固定酵母细胞以恒定速率将海藻酸钠溶液迟缓滴加到CaCl2溶液中，要在CaCl2溶液中固定30min左右凝胶珠颜色较深，普通为乳白色或黄色，形状为圆形或椭圆形。凝胶珠普通沉在CaCl2溶液底部(续表)第45页

(1)加热使海藻酸钠溶化是操作中最主要一步。假如海藻酸钠浓度过高，将极难形成凝胶珠；假如浓度过低，形成凝胶珠所包埋酵母细胞数目少，影响试验效果。(2)刚形成凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，方便形成稳定结构。

(3)检验凝胶珠质量是否合格，能够使用以下方法：一是用镊子夹起一个凝胶珠放在试验桌上用手挤压，假如凝胶珠不轻易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠制作成功；二是在试验桌上用力摔打凝胶珠，假如凝胶珠很轻易弹起，也能表明制备凝胶珠是成功。

(4)假如制作凝胶珠颜色过浅，呈白色，说明海藻酸钠浓度偏低，固定酵母细胞数目较少；假如形成凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。第46页3.用固定化酵母细胞发酵(1)配制麦芽汁或葡萄糖溶液：注意浓度适宜，过高会造成固定酵母细胞失水，甚至死亡。

(2)固定化酵母凝胶珠处理：固定好凝胶珠从CaCl2

溶液取出后要用蒸馏水冲洗2～3次。洗去CaCl2溶液目标是防止凝胶珠硬度过大，影响通透性。(3)发酵：开始时凝胶珠沉在发酵液底部，一段时间后慢慢上浮且有气泡产生，发酵液有酒味。第47页[高考探究]考向固定化酶应用

[典例3](年江苏卷)为了探索海藻酸钠固定化对绿球藻

员用筛选到一株绿球藻进行试验，流程及结果以下。请回答以下问题：生长影响，以及固定化藻对含Zn2＋污水净化作用，科研人第48页图1图2

(1)试验中海藻酸钠作用是__________，CaCl2

作用是__________________。

(2)为洗去凝胶球上残余CaCl2

和其它污染物，并保持绿球藻活性，宜采取________洗涤。图1中1.0%海藻酸钠组培养24h后，移去凝胶球，溶液呈绿色，原因是_______________。第49页(3)为探索固定化藻对含Zn2＋污水净化作用，应选取浓度为__________海藻酸钠制备凝胶球。(4)图2中空白凝胶球组Zn2＋浓度下降原因是__________________________________________________________________________________________________。结合图1和图2分析，固定化藻试验组24～48h间Zn2＋浓度下降速度较快主要原因是__________；72～96h间Zn2＋浓度下降速度较慢原因有_____________________________________________________。第50页48h间绿球藻数量增加最快，使Zn2＋

[解析](1)海藻酸钠溶液在CaCl2溶液中形成凝胶球，包埋绿球藻。(2)可使用培养液或生理盐水洗去凝胶球上残余CaCl2和其它污染物，并保持绿球藻活性。溶液呈绿色，说明固定化绿球藻数量少，原因是海藻酸钠浓度过低(或凝胶球孔径过大)。(3)依据图1可知，浓度为2.0%海藻酸钠制备凝胶球最有利于绿球藻繁殖。(4)空白凝胶球可吸附Zn2＋，造成溶液浓度下降速度较快，72～中

Zn2＋

浓度下降；结合图

1和图2分析，固定化藻试验组24～96h间绿球藻数量基本不再增加，故

Zn2＋

浓度下降速度较慢。第51页[答案](1)包埋绿球藻与海藻酸钠反应形成凝胶球(2)培养液(或生理盐水)海藻酸钠浓度过低(凝胶球孔径过大)(3)2.0%(4)凝胶球吸附Zn2＋绿球藻生长(增殖)速度快绿球藻生长(增殖)速度减慢，溶液中Zn2＋浓度较低第52页时间/d游离酵母固定化酵母00021.02.542.14.263.25.083.95.4104.36.0124.66.4[考向预测]

5.某试验小组进行固定化酵母细胞制备，并进行了游离酵母和固定化酵母发酵产酒酒精度比较，结果以下表所表示。请回答以下问题： 产酒酒精度比较第53页

(1)制备固定化酵母细胞试验步骤是：酵母细胞活化→____________________→配制海藻酸钠溶液→_______________________________→固定化酵母细胞。

(2)影响试验成败关键步骤是______________________________