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文档简介
实验五
激素(Su)对血糖浓度的影响
第一页,共十七页。一、实验目(Mu)的1.掌握GOD-POD法测定血糖的原理及方法。2.观察胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响。3.了解家兔耳缘静脉取血的方法。第二页,共十七页。二、实(Shi)验原理1.血糖是指血液中的葡萄糖。
人体生理血糖水平维持在3.89~6.11mol/l。2.血糖的来源与去路第三页,共十七页。3.血糖(Tang)的激素调节降低血糖:胰岛素升高血糖:肾上腺素、胰高血糖素、糖皮质激素和生长素等。胰岛素是唯一降低血糖的激素。
胰岛素促进肝脏和肌肉将葡萄糖氧化合成糖原,又加强糖的氧化作用,故可以降低血糖。升高血糖的激素以肾上腺素作用迅速而明显。肾上腺素通过促进肝糖原分解而升高血糖。第四页,共十七页。4.血糖测定的(De)意义临床:血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。科研:在代谢疾病的研究中,常测定血糖。在某些药物的研究中,也涉及血糖的测定。第五页,共十七页。测定方法无机化学法:Folin-Wu法有机化学法:邻甲苯胺法酶法:葡萄糖氧化酶法5.血糖测定(Ding)的常用方法第六页,共十七页。(1)葡(Pu)萄糖+O2+H2O(2)4-氨基安替吡啉+苯酚+H2O2葡萄糖酸+H2O2葡萄糖氧化酶(GOD)H2O+红色醌类化合物过氧化物酶(POD)505nm光吸收法测定相对血糖浓度6.GOD-POD法原理第七页,共十七页。7.朗伯-比尔定(Ding)律当一束平行的单色光通过均匀、无散射的溶液时,在光强度、温度等条件不变的情况下,溶液吸光度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。
A=KCL第八页,共十七页。标(Biao)准管法测定未知样品含量A标=KC标LA测=KC测L
C测=A测A标×C标第九页,共十七页。722G型分光(Guang)光(Guang)度计的使用1.接通电源,打开开关,调整波长。2.比色杯中加入空白及待测样品,并放入分光光度计中,注意:加入样品量不超过比色杯体积的3/4。3.
调模式为“T(透射比)”,对空白对照进行调“0”(开盖)和调“100”(闭盖)。4.调模式为“A(吸光度)”,测定待测样品的吸光度值。第十页,共十七页。三、主要仪器(Qi)与试剂试剂:胰岛素,肾上腺素
酒精,草酸钠,蛋白沉淀剂
酶酚混合试剂,苯甲酸溶液
葡萄糖标准贮存液(100mmol/L)
葡萄糖标准应用液(5mmol/L)第十一页,共十七页。四(Si)、实验操作1.准备:正常家兔两只,实验前预先饥饿16h,称体重,并记录(kg)。兔子抓取方法:一手抓取颈背部皮肤,另一只手托臀部。2.制备抗凝管:在洁净、干燥的试管中放入一小勺抗凝剂(草酸钠)。3.注射前取血:一般以耳缘静脉取血,拔毛,用乙醇擦洗,使血管充血(弹动几下),在耳缘静脉外侧远心端用三棱针扎破放血,将血液滴入抗凝管中,约取1~2ml,边收集边混匀,以防血液凝固。取血后用干棉球压迫血管止血。第十二页,共十七页。4.注射激素:取血后,一只注射胰岛素,0.75U/kg,60min。
另一只注射肾上腺素,0.5mg/kg,30min。
注射方法:皮下注射。肚皮朝上,掂起皮肤,刺入皮下有落空感,回抽无血,缓慢注入激素。5.制去蛋白血滤液:这是注射前的血液。
制备方法:蛋白沉淀剂4ml+全血0.2ml,混匀,室温放置7分钟后,在漏斗上过滤,取滤液,标记为注射前的去蛋白血滤液。6.注射后取血并制备血滤液:方法同前,选择另一只耳朵,注意做好标记。注射胰岛素的家兔,取血后立(Li)即腹腔或皮下注射25%葡萄糖注射液10ml,以免家兔发生胰岛素性休克。第十三页,共十七页。7.GOD-POD法测血糖(Tang):按下表操作混匀,置37℃水浴15min,调节波长505nm,以空白管调零,分别读取
A测、A标。
读取6个A值并记录:A肾前、A肾后、A标A胰前、A胰后、A标加入物(ml)测定管
(注射前)测定管(注射后)标准管空白管去蛋白血滤液0.50.5––葡萄糖标准应用液––0.5–蛋白沉淀剂–––0.5酶酚混合试剂3.03.03.03.0第十四页,共十七页。五、结果与(Yu)分析按下式分别计算注射胰岛素或肾上腺素前、后血糖浓度:
A测C测=×C标(5mmol/L)A标
5mmol/L为葡萄糖标准应用液的浓度值。通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变化情况。正常人空腹血糖值:3.89~6.11mmol/L第十五页,共十七页。六、注意(Yi)事项1.采血时用耳缘静脉取血,注意安全,防止动物抓伤。采集时要边采集边混匀。2.准确吸取0.2ml的全血。3.采血后要立即制备去蛋白血滤液。4.测定管分胰岛素组和肾上腺素组,应同时测定,比较血糖的变化时才有可比性。比色测定应同时进行。第十六页,共十七页。内容(Rong)总结实验五。升高血糖:肾上腺素、胰高血糖素、糖皮质激素和生长素等。在某些药物的研究中,也涉及血糖的测定。无机化学法:Folin-Wu法。有
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