HYT 228-2018 藻类脂肪酸的测定 气相色谱法

藻类脂肪酸的测定气相色谱法2018-02-13发布I本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家海洋局提出。本标准由全国海洋标准化技术委员会(SAC/TC283)归口。本标准起草单位：国家海洋局第一海洋研究所、中国科学院海洋研究所、中国海洋大学。1藻类脂肪酸的测定气相色谱法本标准规定了藻类中脂肪酸的气相色谱测定方法。本标准适用于藻类中脂肪酸的测定。其他藻类中脂肪酸的测定可参考使用。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法原理藻类样品中的脂肪酸，经氢氧化钠甲醇溶液皂化和盐酸甲醇溶液甲酯化，经正己烷提取后，用气相色谱法测定。4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1.1氢氧化钾(KOH)。4.1.6无水硫酸钠(Na₂SO₄):400℃灼烧4h,冷却后密闭保存，有效期1个月。4.2试剂配制4.2.1饱和氢氧化钾甲醇溶液：称取40g氢氧化钾溶解在100mL甲醇中，搅拌溶解，澄清备用，室温下可放置2个月。4.2.2盐酸甲醇溶液(1mol/L):量取10mL盐酸溶解在110mL甲醇中，混匀，室温下可放置2个月。4.2.3饱和氯化钠溶液：称取360g氯化钠溶解在1L蒸馏水中，搅拌溶解，澄清备用，室温下可放置2个月.4.3标准品4.3.1十一碳酸甘油三酯，纯度大于99%。4.3.2十一碳酸甲酯标准品，纯度大于99%。24.3.3混合脂肪酸甲酯标准品。4.3.4单个脂肪酸甲酯标准品(可根据需求购买),纯度大于99%。4.4.1十一碳酸甘油三酯内标溶液(0.15mg/mL):准确称取15mg十一碳酸甘油三酯(4.3.1)至100mL容量瓶中，用甲醇定容，冰箱4℃避光冷藏保存，有效期1个月。4.4.2单个脂肪酸甲酯标准溶液(1mg/mL):准确称取100mg脂肪酸甲酯标准物质(4.3.4)于100mL容量瓶中，用正己烷定容，贮存于一20℃冰箱4.4.3混合脂肪酸甲酯标准溶液(10μg/mL):取出适量脂肪酸甲酯混合标准溶液(4.3.3)移至10mL容量瓶中，用正已烷定容，配制成脂肪酸甲酯标准物质浓度为10μg/mL溶液。贮存于一20℃冰箱，有效期3个月。5仪器和设备5.1气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。5.2电热恒温水浴锅：控温范围25℃~100℃,控温精度±1℃。5.5具塞离心管。6分析步骤6.1藻粉的制备藻类经冷冻干燥24h。干燥后大型藻经过粉碎机(4.4)粉碎过80目筛，微藻直接进行6.2。用天平称取藻粉约20mg,放入研钵(5.7)中，准确加入0.2mL十一碳酸甘油三酯内标溶液(4.4.1),加入液氮反复研磨2次～3次，每次5min,用6.0mL饱和氢氧化钾甲醇溶液(4.2.1)分2次~3次将研磨后的藻粉转移至具塞离心管(5.5)中，混匀。将离心管放入60℃水浴锅内加热处理60min,每隔10min取出振荡5s～10s,处理结束后取出离心管冷却至室温。皂化后的试样加入4mL1mol/L盐酸甲醇溶液(4.2.2),混匀，将离心管放入60℃水浴锅内加热处理20min,每隔10min取出振荡5s～10s,处理结束后取出离心管冷却至室温。甲基化后的试样准确加入1mL正己烷，加入3mL饱和氯化钠溶液(4.2.3),将管盖拧紧，涡旋振荡2min,静置3min～5min待溶液分层后，取大约0.5mL上层正己烷，用无水硫酸钠脱水后进行气相色谱分析。3 ——升温程序：初温50℃,保持5min,25℃/min升到180℃,1℃/min升到190℃,保持10min,1℃/min升到205℃,保持10min,20℃/min升到240℃,保持5min。A;——藻类中脂肪酸甲酯i组分的峰面积；1.0067——十一碳酸甘油三酯转化成十一碳酸甲酯的转换系数。 (2)4式中：A,'——标准品中脂肪酸i组分的峰面积。)重复性条件下，获得的两次独立测定结果绝对差值不大于两次测定结果算数平均值的10%,以大于这两个测定值的算数平均值的10%的情况下不超过5%为前提。再现性条件下，获得的两次独立测定结果绝对差值不大于两次测定结果算数平均值的15%,以大于这两个测定值的算数平均值的15%的情况下不超过5%为前提。(资料性附录)脂肪酸甲酯标准溶液典型参考图谱参见图A.1。图A.1脂肪酸甲酯标准溶液典型参考图谱6(规范性附录)脂肪酸甲酯的检出限和定量限脂肪酸甲酯的检出限和定量限见表B.1。表B.1脂肪酸甲酯的检出限和定量限检出限/(pg/mL)定量限/(μg/mL)1己酸甲酯2辛酸甲酯3456789二十