9、第九章-配种与人工授精

宠物饲养与繁育技术授课教师谢海强TeQ847207639E-mailxiehaiqiang1115@163.com上课要求与考核方法考勤：不缺勤、不迟到、不睡觉、不玩手机其他：合理化建议会被采纳平时成绩：30%（考勤+提问+实习报告）期中考试成绩：30%期末考试成绩：40%第九章：配种与人工授精第一节犬、猫的配种第二节犬、猫的人工授精

犬、猫在性成熟以后，雌、雄两性个体以各自的性行为表现形式相互协调配合，从而保证有效地交配、繁殖后代。

正确认识和了解犬、猫的交配行为，有利于对处于繁殖期的犬、猫进行饲养管理与配种，有利于开展人工采精与人工授精操作，对提高配种的成功率有着重要的意义。第一节

犬、猫的配种一、交配适期

雌、雄个体的交配时间是否适当，是决定雌性个体受胎率与产仔率的关键因素。交配后，精子和卵子在输卵管内运行、相遇并受精。因此，交配时间决定了精子和卵子能否在输卵管内及时相遇，并是否保持受精能力。

1、犬的交配适期

（1）犬的发情具有周期性，一般是春季（3-5月份）和秋季（9-11月份）各发情1次。

（2）雌犬交配的最佳时间是排卵前1.5d到排卵后4.5d之间，受胎的概率较大。

（3）发情出血后第9-11d首次交配，间隔1-3d复配1次。第一节

犬、猫的配种

2、猫的交配适期

（1）雄猫没有特定的繁殖季节，而雌猫属于季节性多次发情动物，一般是春季（2-3月份）和秋季（8-9月份）发情，每次发情持续3-7d。

（2）雌猫在发情季节中，每隔两周就发情1次。

（3）猫是刺激性排卵动物，在配种时为了提高配种率和受胎率，1只雌猫可以选用1只雄猫连续配种2次，也可选择2只雄猫与其配种。

（4）配种的适当时间是在雌猫发情后的第2天晚上进行。

（5）一般情况下，交配1次就能受孕，保险起见，需要第2天补配1次。第一节

犬、猫的配种二、交配方式

自然交配常采用自由交配和人工辅助交配两种方式。

1、自由交配

（1）概念：指雌、雄两性个体在没有人为帮助的情况下进行的交配。

（2）犬的交配以自由交配为好，个别犬需要人工辅助交配。

（3）猫的交配一般在夜间进行，且需要彼此熟悉的过程。

2、人工辅助交配

（1）概念：指借助于人的辅助，使雌、雄两性个体达成交配配种方式。

（2）对缺乏性经验的初配雄犬，可令其观摩别的雄犬交配，或令其与经验丰富的雌犬交配以激发正常的性行为。

（3）发情明显的经产雌犬性兴奋强烈，可诱引初配雄犬进行交配。

（4）雌犬性反射不强导致自然交配困难时，辅助人员可辅助雄犬，迫使雌犬接受交配。第一节

犬、猫的配种三、交配过程

交配前，将雄性与雌性会面几次，彼此熟悉和调情，不仅可使雄性有强烈的性欲，提高配种效果，而且可避免发生咬架和争斗现象。

1、犬的交配过程

雄犬的性行为链：求偶→爬跨→勃起→交配→射精→锁结→交配结束。雌犬在交配过程中处于被动地位，配合雄犬完成交配。

（1）性激动（性兴奋）：性激动是雄性一种求偶交配的欲望；性兴奋是基于雌性吸引，雌性喜欢接近并与雄性一起奔跑、戏耍，而后期雌性允许雄性交配。

（2）求偶：指雄性向雌性作出特殊的姿态和动作，诱使其接受交配的性行为表现。

（3）爬跨：雄犬经过求偶后，阴茎开始勃起，表现为异常激动，大胆试探雌犬的接纳程度，直至爬上雌犬背上。

（4）勃起：雄犬经发情雌犬刺激后，阴茎勃起，但犬的阴茎勃起机制由于其解剖生理特点与其他动物有明显不同。第一节

犬、猫的配种

（5）交配：雄犬阴茎勃起后，迅速爬到雌犬背上，两前肢抱住雌犬，阴茎插入阴道进行交配。

（6）射精：犬的射精过程分为三个阶段：

①犬阴茎刚插入阴道时，就开始射精，精液呈清水样液体，很少有精子，起到冲洗和消毒阴道的作用。

②阴茎充分勃起后，将含有大量精子的乳白色样精液直接射到子宫颈口或子宫颈口附近，射精过程在很短的时间内即可结束。

③在锁结时发生的射精，此时的精液为不含精子的稀薄液体，主要是前列腺分泌物。

（7）锁结：犬是多次射精动物，完成第二阶段射精后，阴茎上处于完全勃起状态，雌犬阴道括约肌仍在收缩，当雄犬从雌犬背上爬下时，阴茎不能从阴道中拔出来，而是扭转成180°，使雌、雄犬呈臀部触合姿势，此状态称为锁结，也称为闭塞、连锁或连档。

（8）交配结束：第三阶段射精完毕后，阴茎从阴道中抽出，雌、雄犬彼此分开。

第一节

犬、猫的配种注意：

（1）交配结束后，牵住雌犬，让其保持1-2h的安静，避免到处运动，也不准其坐下，以免影响受胎率。

（2）检查外阴，若阴户外翻明显，说明已交配成功，若阴户自然闭合，则说明没有交配成功。

（3）雄犬在交配后，常常出现腰部凹陷，即“掉腰子”现象，切不可剧烈运动，休息0.5h后，稍微活动，给予温热的饮水。

第一节

犬、猫的配种

2、猫的交配过程

（1）猫的交配行为受交配经验及体内激素水平的影响，与周围环境及光照密切相关。因此，猫的交配一般选择在光线较暗的地方，以夜间居多，不愿意让人看见。

（2）猫的交配期平均为2d，最长可达4d，在1个发情周期内，雌猫可以达9次，是否终止交配通常由雌猫决定。

（3）猫的交配时间，短的3-5min，长的达到30min，一般为10-15min。

（4）交配成功后，雌猫外阴部高度充血，呈紫红色或粉红色，阴毛湿润，而未配上者无任何变化。

（5）整个配种期间，雄猫一直处于发情状态，性欲旺盛，因体力消耗和饮食量减少而体重降低，需要有良好的饲养管理，维持雄猫的配种性能和精液品质，以保证雌猫的受胎率、胎产仔数和仔猫成活率。

（6）雌猫交配后，发情持续1周后消失，进入妊娠期；未交配雌猫发情持续10-13d，间隔约3周又开始发情。第一节

犬、猫的配种四、提高配种率的措施

1、影响繁殖力的因素

（1）遗传因素。

（2）环境因素。

（3）营养因素。

（4）管理因素。

（5）年龄因素。

（6）交配频率。第一节

犬、猫的配种

2、提高宠物繁殖力的措施

（1）选择优秀个体做种用。

（2）加强雄性优秀个体的培养，提高精液质量。

（3）做好雌性个体的发情鉴定，适时配种或输精

。

（4）积极推广应用繁殖新技术（人工授精、发情控制和胚胎移植等）。

（5）加强妊娠期的饲养管理工作，减少胚胎死亡和流产。

（6）做好接产和助产工作，提高幼仔成活率。

（7）及时防治繁殖障碍。第一节

犬、猫的配种1、人工授精的概念

人工授精（artificialinsemination,AI）是采用器具采取雄性动物的精液，加以稀释、保存，再利用器具将精液输入雌性动物生殖道内，使精子与卵子结合、受精、发育，以代替自然交配的一种配种方法。第二节

犬、猫的人工授精2、人工授精发展概况试验阶段：1780年，意大利生理学家Spallanzani，首次成功用犬进行了人工授精试验。实用阶段：20世纪40-60年代，人工授精的应用蓬勃发展成为繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，发展最快，技术水平较高。冷冻精液阶段：50年代英国的Smith和Polge研究牛精液的冷冻保存方法，人工授精技术进入了一个新的发展阶段。1969年，Seager首次报道了犬的冷冻精液人工授精。20世纪70年代，美国养犬俱乐部（AKC）详细制定了冷冻精液的生产和人工授精各个主要环节的操作规程。1970年，Scott等进行了猫的人工授精技术研究。第二节

犬、猫的人工授精3、人工授精的优越性能够提高雄性优秀个体的利用率，有利于品种改良。防止疾病传播。改变引种方式和保种方式。克服配种上的困难。提高受胎率。加快育种进展。人工授精是推广繁殖新技术（如繁殖控制技术、胚胎移植、体外受精等）的一项基础措施。第二节

犬、猫的人工授精4、人工授精的限制通过人工授精可能使不良的公畜影响范围更大。必须投入一定资金，进行房舍建设和设备购置。必须进行人员的技术培训，不良的操作会造成更严重的问题。第二节

犬、猫的人工授精5、人工授精的技术环节采精，精液品质检查，精液稀释、分装、保存，运输，精液解冻与检查，输精等。

第二节

犬、猫的人工授精一、采精

采精就是通过一定条件的刺激，激发公畜的交配行为，然后人工收集公畜精液的过程。

采精既是人工授精工作的第一步，也是该工作中的重要技术环节；认真做好采精前的准备，正确掌握采精技术，合理安排采精时间等是保证采集到量多、质优、无污染精液的重要条件。

采精量的多少受品种、个体、年龄、性欲情况、采精方法、技术水平、采精频率和营养状况等因素的影响。第二节

犬、猫的人工授精

1、准备工作

（1）场地的准备

①采精应该在良好的环境中进行，以利于雄犬形成稳定的性条件反射，同时又能够避免精液受到污染。

②采精场地一般选择在室内，由采精室和精液处理室组成，面积为15-20m2，两者相邻，外室为采精室，内室为精液处理室，要求宽敞明亮、平坦、清洁、避风、干燥、安静，最好有较好的环境调控设施，并要彻底消毒，室温应为20℃左右。

（2）采精保定架

①采精保定架根据采精人员的水平和经验选用。

②采用发情的雌犬作为台犬，采精效果好。没有保定架也可以制作假台犬进行采精。

③假台犬：用钢筋、木料、橡塑制品等材料模仿犬的外形制成的，固定在地面上，其大小与真犬相近，外层覆以棉絮、泡沫等柔软之物，亦可用犬皮包裹，以假乱真。第二节

犬、猫的人工授精补充：第二节

犬、猫的人工授精

（3）采精杯及其他器具的准备

①根据采精方法、采精后精液的处理和人员经验准备。

②采用手握采精法时，采精杯用于收集精液，采精前要认真清洗消毒，并放在恒温40℃水浴锅中，以便采精时采精杯温度恒定，避免精子冷打击。第二节

犬、猫的人工授精

（4）假阴道的准备

根据雄犬的阴茎大小制作假阴道，其结构主要由外壳、内胎、采精杯及附件组成。假阴道应具备五个条件：

①适宜温度：采精时假阴道内腔温度应保持在38-40℃，集精杯也应保持34-35℃。

②适当压力：借助注入水和空气来调节假阴道的压力。

③适当润滑度：涂抹润滑剂的部位是假阴道前段1/3-1/2处到外口周围，但涂布不可过长过多。

④无菌：凡接触精液的部分均须经消毒。

⑤无破损漏洞：假阴道不得漏水或漏气。第二节

犬、猫的人工授精补充：第二节

犬、猫的人工授精补充：第二节

犬、猫的人工授精不太理想的状态（但可以用）牛羊假阴道安装充气后理想的状态

（5）雄犬的调教

给雄犬采精时，必须对雄犬进行严格细致和耐心的调教，以使其在采精场地形成良好的条件反射。调教的方法有如下几种：

①在假台畜的后躯涂抹发情母畜的阴道黏液或尿液，公畜则会受到剌激而引起性兴奋并爬跨假台畜，经过几次采精后即可调教成功。

②在假台畜旁边牵一发情母畜，诱使公畜进行爬跨，但不让交配而把其拉下，反复多次，待公畜性冲动达到高峰时，迅速牵走母畜，令其爬跨假台畜采精。

③将待调教的公畜拴系在假台畜附近，让其目睹另一头已调教好的公畜爬跨假台畜，然后再诱其爬跨。第二节

犬、猫的人工授精

注意事项：

①调教过程中，要反复进行训练，耐心诱导，切勿施用强迫、恐吓、抽打等不良剌激，以防止性抑制而给调教造成困难。

②调教时应注意公畜外生殖器的清洁卫生。

③最好选择在早上调教，早上精力充沛，性欲盛。

④调教时间、地点要固定，每次调教时间不宜长。第二节

犬、猫的人工授精

（6）采精人员的准备

采精员应具有熟练的技术，动作敏捷，操作时要注意人、犬的安全。操作前，最好脚穿长筒靴，着紧身工作服，避免与公畜及周围物体钩挂，影响操作。指甲需剪短磨光，手臂要清洗消毒。第二节

犬、猫的人工授精

2、采精方法

对雄犬采精的方法有假阴道采精法、手握按摩采精法和电刺激采精法三种。

（1）电刺激采精法

①电刺激法是利用电刺激采精器，通过电流刺激公畜引起射精而进行采精的一种方法。是雄猫采精的首选方法适用于各种家畜及动物。尤其对那些种用价值高而失去爬跨能力的优良个体公畜或不宜用其他方法采精的驯养小动物和野生动物等。

②电刺激采精法容易使雄犬休克，而且精液中容易混入尿液。第二节

犬、猫的人工授精补充：第二节

犬、猫的人工授精补充：第二节

犬、猫的人工授精补充：第二节

犬、猫的人工授精各种动物电刺激采精参数

（2）假阴道采精法

①假阴道采精法是模拟母畜阴道环境条件的人工阴道，诱导公畜射精而采集精液的方法。它是较理想的采精方法，由于该法既不降低精液品质，又不影响公畜的生殖器官和性功能，所以应用最为广泛，适用于各种家畜和部分驯兽。

②假阴道采精法对犬无刺激，但是在分段采精时，不容易掌握射精时机。第二节

犬、猫的人工授精补充：第二节

犬、猫的人工授精补充：第二节

犬、猫的人工授精补充：第二节

犬、猫的人工授精

（3）手握按摩采精法

①手握按摩采精法简单实用，同时辅以发情雌犬的刺激或者发情雌犬分泌物刺激，基本可以采集到雄犬各个阶段的精液，同时不降低精液品质，也不会伤及雄犬的生殖器官，操作相对简单。

②一般适用于雄犬和公猪的采精，具有设备简单、操作方便、能选择采集精子浓稠部分的精液的特点，但也存在精液容易被污染和精子易受低温打击等缺点，应加以注意。第二节

犬、猫的人工授精补充：第二节

犬、猫的人工授精

3、采精频率

采精频率是指雄性每周采精的次数。为了既能持续地获取大量优质精液，又能维持公畜的健康水平和正常生殖生理机能，必须合理安排公畜的采精频率。犬：每周2-3次。采精过程中，发现公畜性欲下降，精子密度降低则需减少采精次数，加强营养。第二节

犬、猫的人工授精二、精液品质检查

（一）检查的目的

1、鉴定精液品质的优劣，作为精液是否做进一步处理和精液稀释倍数计算的依据。2、评估公畜管理水平和生殖机能状态，可作为诊断公畜不育或确定种用价值的重要手段。3、评估采精员、人工授精实验室人员技术操作水平。4、作为精液稀释、保存、冷冻和运输过程中的品质变化及处理效果的重要判断依据。5、评估购买的商品精液质量。第二节

犬、猫的人工授精（二）感官检查

1、射精量

指1次采集所收集的精液容量，可从采精杯上直接读取或用移液管测量。犬的射精量一般为10-13ml，大型犬射精量可达30ml，而小型犬仅有2-3ml。

平均射精量以连续3次以上正常采集到的射精量的平均值来代表。

射精量不正常的原因过多：①公畜睾丸发达（正常）；②副性腺分泌物过多或其他异物混入。过少：①只收集了浓份精液；②采精方法不当；③采精过频；④生殖器官机能衰退。第二节

犬、猫的人工授精畜种猫犬射精量ml0.01-0.32-25精子浓度1.5-280.6-5.4繁殖活动开始月龄910-122、色泽

犬、猫的精液为乳白色或灰白色，精子密度越大，乳白色越深，密度低时则色清淡。不正常精液原因分析：

淡红（鲜红）：生殖道下段出血或龟头出血；

淡红（暗红）：副性腺或生殖道出血；

褐色：混有陈血；

淡绿：副性腺或尿生殖道化脓；

黄色：混有尿液。

颜色异常的精液应该丢弃，立即停止采精，查明原因，及时对症治疗。第二节

犬、猫的人工授精3、气味

犬、猫的精液应为无味或微腥味。

气味异常者，常伴有颜色改变，应废弃。

腐败臭味：有脓液。

臊味：有尿液或包皮液。

第二节

犬、猫的人工授精4、云雾状

犬、猫的精液因精子密度不大，不呈现上下翻滚的云雾状。

采集有些动物的精液，虽然集精瓶（或杯）静止不动，但肉眼仔细观察时，可看到精液呈翻滚运动现象，似云雾状。

一般多见于牛、羊、鹿的精液和采集猪的浓份部分精液。云雾状的明显程度代表高浓度的精液中精子活力的高低。+++（强）

较快的翻滚状态++（中）

明显但翻滚较慢+（弱）

仔细观察可看到精液缓慢移动-（无）

无翻动现象

第二节

犬、猫的人工授精（三）精子密度检查

精子密度是指单位体积精液内所含精子的数目，是评定精液品质的一项重要指标，也称精子浓度，用个/ml或亿/ml表示。

测定精子密度的方法主要有估测法、计算法和光电比色法3种。第二节

犬、猫的人工授精1、估测法

通常结合精子活力检查（不做稀释）来进行，根据显微镜下精子的密集程度，把精子的密度大致分为“稠密”、“中等”、“稀薄”三个等级，这种方法能大致估计精子的密度，主观性强，误差较大。第二节

犬、猫的人工授精2、计算法

用血细胞计数板在显微镜下计数，是估计精子密度比较准确的方法。精子密度计数板(器)简介精液的稀释精液注入计数室精子计数精子密度计算第二节

犬、猫的人工授精2、计算法

（1）血细胞计数板

①精子计数室长宽各1mm，面积1mm2高度0.1mm，体积0.1mm3。

②由双线或三线组成25个（5×5）中方格。

③每个中方格内有16个小方格（4×4）。

④共计400个小方格。第二节

犬、猫的人工授精第二节

犬、猫的人工授精精子计数室及一个中方格

（2）稀释

①将精液注入计数室前必须对精液进行稀释，以便于计数。②稀释的比例根据动物精液的密度范围确定。③稀释方法：用5-25ul移液器和100-1000ul移液器，在小试管中进行组合不同的稀释。④稀释液：3%氯化钠（NaCl）溶液，用以杀死精子，便于计数。第二节

犬、猫的人工授精

（3）镜检

①将洁净的计数板放在载物台上固定好，盖上干净的盖玻片；②取25ul稀释后的精液，将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处；③缓慢注入精液，使精液依靠毛细作用吸入计数室。第二节

犬、猫的人工授精第二节

犬、猫的人工授精注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入用吸管稀释精液后注入计数室共有两个对称的计数室第二节

犬、猫的人工授精用移液器注入精液

（4）计数

①将计数板固定在显微镜的推进器内，用100倍放大找到计数室，再用400倍找到计数室的第一个中方格；②计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的原则进行计数格线上的精子。第二节

犬、猫的人工授精第二节

犬、猫的人工授精进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共5个中方格也可以是从左角到右下角五个中方格第二节

犬、猫的人工授精以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数

（4）精子密度计算

1mL原精液内的精子数=5个大方格内的精子数×5（等于整个计算室25个大方格内的精子数）×10（等于1mm3内的精子数）×1000（等于1mL被检稀释精液样品内的精子数）×被检精液稀释倍数。

雄犬精液中精子总数为3×108—20×108个，精子浓度为0.4×108—4×108/ml。雄猫精子浓度检查可作40-100倍稀释后进行，其浓度与采精方法有关。第二节

犬、猫的人工授精第二节

犬、猫的人工授精精子密度测定程序放计数板于载物台上取样稀释精液精液注入计数室镜检精子计数计数板和盖玻片一定要清洁取500ul3%氯化钠于小试管中,加入5ul原精液,混合均匀取25ul小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入,使其自行吸入计数室中用100倍和400倍观察精子密度=5个中方格总精子数5×10×1000×100计数五个中方格的总精子数,计数以头部为准,在格线上的数上不数下,数左不数右密度计算3、光电比色法

（1）优点：此法快速、准确、操作简便。其原理是根据精液透光性的强弱来测定精子密度。

（2）原理：精子密度越大，透光性就越差；反之，透光性就越强。

（3）注意事项：采用此方法测定精子密度时，应该避免精液内的杂质、细胞碎片等干扰透光性，以免造成误差。测定结果最好与血细胞计数板法进行对比检验，消除误差。第二节

犬、猫的人工授精（四）精子活力检查

精子活力又称精子活率，是指精液中作直线运动的精子占整个精子数的百分比，是精子结构和功能正常的反应，是评定精液品质优劣的重要指标之一。

在采精后、稀释前后、保存和运输前后、输精前都要进行活力检查。第二节

犬、猫的人工授精1、检查方法

检查精子活力主要采用目测法进行评定，简便快速，但主观性强。温度对精子活力影响较大，为使评定结果准确，要求检查温度在37℃左右，需用有恒温装置的显微镜。

主要测定方法：平板压片法、悬滴检查法。第二节

犬、猫的人工授精活力测定时精液的稀释用品2、评定

评定精子活力多采用“十级评分制”，即精液中100%的精子呈直线前进运动评定为1.0分，90%的精子呈直线前进运动评定为0.9分，以此类推。

评定精子活力的准确度与经验有关，具有主观性，检查是要多看几个视野，取平均值。

新鲜精液的精子活力应大于0.7，液态保存精液的精子活力应大于0.6。用于人工输精的精子活率不可低于60%。通常，犬与猫的精液没有牛精液那样的精子运动波。

采用计算机辅助精子分析系统可以对精液样品中精子细胞的许多特性进行深入研究，评价精子的运动方式和运动质量等。第二节

犬、猫的人工授精第二节

犬、猫的人工授精载玻片预温精液稀释取样检查镜检活力估测活力记录将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37℃，然后放在载玻片将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片用100倍和400倍观察判断视野中前进运动精子占的百分率

按10级制评分和记录精子活力检查程序（五）精子形态检查

精子的形态检查主要是检查其畸形率，即形态不正常和顶体缺失的精子。

1、精子的形态结构

犬与猫的精子形态结构基本相似，表面有一层脂蛋白性质的薄膜，分头部、颈部、尾部三部分。

2、精子畸形率

（1）定义：凡形态和结构不正常的精子都属于畸形精子。精子畸形率是精液中畸形精子数占精子总数的百分率。

（2）分类：畸形精子一般分为四类：头部畸形（如头部巨大、瘦小、细长、圆形、轮廓不清、皱缩、缺损、双头等）、颈部畸形（如颈部膨大、纤细、曲折、双颈等）、中段畸形（如膨大、纤细、带有原生质滴等）和主段畸形（如弯曲、曲折、回旋、短小、双尾等）。

（3）畸形率的检查，主要是通过使用各种染色法进行。

（4）犬精子畸形率不得超过20%，如果超过则应废弃。第二节

犬、猫的人工授精补充：

一般优良品质的精液中精子畸形率不超过：

牛18%，水牛15%，羊14%，猪18%，马12%，犬20%，鸡10%。

第二节

犬、猫的人工授精

3、检查方法

（1）染色剂吉姆萨染液、苏木精伊红液、龙胆紫酒精液、红墨水、蓝墨水等。（2）稀释稀释液0.9%NaCl：犬：1:2；牛：1:10；羊：1:20；猪：1:2。

（3）抹片左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态；取10ul稀释后的精液滴至载玻片右侧；右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的45度角，并使其接触面在精液滴的左侧；将载玻片向右拉至精液刚好进入两载（盖）玻片形成的角缝中，然后平稳地向左推至左边；抹片后，使其自然风干。第二节

犬、猫的人工授精

（4）固定在抹片上滴95%的酒精数滴，固定3-5min，甩去多余的酒精。

（5）染色

将载玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的龙胆紫或其它染色剂5-10滴，5min后，用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂，甩去水分凉干。（6）检查畸形率将载玻片放在400或600倍的显微镜下进行观察，共记录若干个视野不少于200个左右的精子。（7）检查畸形率。第二节

犬、猫的人工授精第二节

犬、猫的人工授精第二节

犬、猫的人工授精畸形精子第二节

犬、猫的人工授精畸形精子

（五）精子的存活时间及存活指数

1、精子的存活时间是指离体精子在一定条件下的寿命，这是判断精子受精能力的一项指标。

2、精子的存活时间越长，指数越大，说明精子活力越强，品质也越好，受精率也越高。第二节

犬、猫的人工授精（五）精子的存活时间及存活指数

1、精子的存活时间：指离体精子在一定条件下的寿命，这是判断精子受精能力的一项指标。

2、精子的存活时间越长，指数越大，说明精子活力越强，品质也越好，受精率也越高。第二节

犬、猫的人工授精（六）有效精子数

1、有效精子数：具有受精能力的正常精子数量，即精液中精子总数与精子活力的乘积。

2、精子的存活时间越长，指数越大，说明精子活力越强，品质也越好，受精率也越高。第二节

犬、猫的人工授精（七）微生物检查

国内外都十分重视精液中微生物的检查，精液中是否含有病原微生物及菌落数量已经列入精液品质检查的最重要指标，并作为进口精液的检查项目。要求精液中不含有致病微生物，菌落数不超过1个/ml，否则视为不合格。第二节

犬、猫的人工授精三、精液的稀释

（一）精液稀释的目的与倍数

1、精液稀释是向精液中加入适宜于精子存活的稀释液。其目的有两个：

（1）扩大精液的容量，延长精子的存活时间，增强精子受精能力。

（2）增加受配母畜头数，充分提高优良种公畜的配种效率。2、精液稀释的倍数

根据原精液的密度和活力来决定，通常犬精液可稀释3-5倍，猫的精液一般稀释3-8倍。第二节

犬、猫的人工授精

（二）稀释液的成分稀释液这主要包括稀释剂、营养剂、保护剂和添加剂等成分。

1、稀释剂

主要用于扩大精液容量，要求所选的药液必须与精液具有相同的渗透压，如等渗的氯化钠、葡萄糖、蔗糖等。

2、营养剂

主要为精子体外代谢提供养分，补充精子消耗的能量，延长精子体外的存活时间。如糖类、奶类、卵黄和乳类（鲜全乳、脱脂乳或乳粉）等。3、保护剂

（1）缓冲物质。保护精液的pH，利于精子存活。

柠檬酸钠、酒石酸钾钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、碳酸氢钠等盐类，以及近年来常用的一些有机缓冲物质，如Tris、EDTA等。第二节

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（2）降低电解质浓度。精液中如果含有强电解质浓度过高，需向精液中加入非电解质或弱电解质。

各种糖类、氨基己酸等。

（3）抗冷物质。在静夜的低温及冷冻保存过程中需降温处理，精子易受冷刺激，长发生冷休克。

卵黄、乳类等，如二者合用，效果更佳；

（4）抗冻物质。在精液冷冻保存过程中，精液由液态向固态转化，对精子的危害较大，不使用抗冻物质精子冷冻后的复苏率很低。

甘油、乙二醇、二甲基亚砜（DMSO）等。

（5）抗菌物质。在静夜稀释液中加入一定剂量的抗生素，目的是抑制细菌的繁衍。

青霉素、链霉素、氨苯磺胺等，此外，还有氯霉素、林肯霉素、卡那霉素、多黏霉素等。

4、其他添加剂

①酶类；②激素类；③维生素类。第二节

犬、猫的人工授精

（四）稀释液的配置

1、犬常用精液稀释液

牛奶稀释液，奶粉、卵黄稀释液，柠甘糖稀释液，托果柠稀释液，柠檬酸钠稀释液。

2、猫常用精液稀释液

托果柠稀释液，甘糖稀释液。

3、配置要点

（1）稀释液应现用现配。

（2）配置稀释液的蒸馏水要新鲜，最好现用现制或采用灭菌的双蒸水。

（3）配置稀释液所用的一切量具及物品，事先均应彻底清洗、严格消毒，并用稀释液冲洗后才能使用。

（4）所用药品（如糖类和盐类等物质）要纯净，一般使用化学分析纯制剂。

（5）所用乳类（包括全乳和脱脂乳、纯乳粉或脱脂乳粉等）必须是新鲜的，而且不应含有其他物质，如趟、果汁、微量元素或其他添加剂等。第二节

犬、猫的人工授精

（6）卵黄要取自新鲜鸡蛋，抽取时尽量不要混入蛋清，待稀释液消毒冷却后加入。

（7）精液稀释应在采集后尽快进行。

（8）稀释前，必须调整稀释液的温度与精液温度一致。

4、稀释液种类

（1）现用稀释液；

适用于采集的鲜精液经稀释后立即输精，不能进行保存。

（2）常温保存稀释液；

适用于室内短期常温保存，具有pH较低的特点。

（3）低温保存稀释液；

适用于精液低温保存，其成分较复杂。

（4）冷冻保存稀释液。

用于精液的冷冻保存，此类稀释液比较复杂。第二节

犬、猫的人工授精（五）稀释操作

1、精液稀释倍数的确定

（1）影响精液稀释倍数的因素如下：

①原精液的品质；

②稀释液的种类和保存方法；

③输精要求或输精剂型不同；

（2）一般犬的精液稀释倍数为：精子浓度为密者稀释3-8倍，中者稀释0.5-3倍，稀者全份精液不稀释，不保存而直接用于输精，并需要加大输精量。第二节

犬、猫的人工授精

2、精液稀释方法

（1）精液经检查合格后应立即进行稀释，越快越好。

（2）稀释时，稀释液的温度和精液的温度必须调整一致，以30-35℃为宜；

（3）稀释时，将稀释液沿精液瓶或插入的灭菌玻璃棒缓慢倒入，防止剧烈震荡；

（4）若作高倍稀释，应先低倍后高倍，分次进行稀释；

（5）稀释后立即镜检，活力应和稀释前一样；

（6）稀释后精液立即进行分装（一般按一头母畜的输精量）保存。第二节

犬、猫的人工授精四、精液的保存与运输

现行精液保存的方法按保存的温度分：

常温保存（15-25℃）低温保存（0-5℃）冷冻保存（-79至-196℃）。

按精液的状态分：液态保存：常温保存和低温保存温度都在0℃以上，故称液态精液保存；冷冻保存：超低温保存精液以冻结形式作长期保存，故称冷冻精液保存。第二节

犬、猫的人工授精（一）常温保存

1、原理：精子自身所产生的酸性物质和稀释液中的酸性物质使精液的pH降低到一定的水平，能够抑制精子的代谢，从而延长精子的存活时间。抗生素能够抑制微生物的繁殖；2、稀释液主要成分：稀释液成分：抗生素、单糖、缓冲剂；3、保存温度：15-25℃。第二节

犬、猫的人工授精（二）低温保存

1、原理：低温能抑制精子的代谢和微生物的繁殖，但迅速降温会使精子遭受冷休克，加低温保护剂和缓慢降温并保持较低温度，可使精液保存数天；2、稀释液主要成分：抗生素、15-25%的卵黄、基础液；3、保存方法：用纱布包数层于装冰块的保温瓶中或冰箱中保存；4、保存温度：0-5℃。第二节

犬、猫的人工授精（三）冷冻保存

1、精液冷冻保存历史概述

（1）1950年英国科学家Polge和Smith采用卵黄和甘油作保护剂，用干冰作冷源进行精液的冷冻，解冻后授精成功，开创了世界人工授精的新世代；（2）到20世纪90年代，发达国家的全部奶牛和绝大多数肉牛采用冻精输精。精液冷冻保存成为最可靠的保存方法。2、精液冷冻原理

（1）超低温使精子处于零代谢状态，升温后能使精子复苏并且不失去受精能力。

（2）但精子冷冻过程会由于形成冰晶使精子受到损害，这些损害包括：精子外的水分先形成冰晶，而形成精子内外的渗透压差，导致精子水分外渗，精子内渗透压增高，电解质浓度提高，酸碱失去平衡。第二节

犬、猫的人工授精

（3）冰晶的形成造成：

①产生机械压力，导致细胞表层破坏。

②冰晶渗透入精子内部，破坏精子结构。

（4）如果在冷冻过程只形成微小冰晶，即玻璃化状态，则精子就不容易受到损伤，解冻后能恢复活力。

（5）形成玻璃化状态的条件：

①防冻剂干扰晶格的排列形成“过冷溶液”。

②快速降温，使水分子来不及移动和排列，就失去了能量，形成更“过冷溶液”。

③快速降温使液体只能形成极微小的“微晶”。（6）保存和解冻过程的变化：

①冰晶很微小，所以表面能很高，微晶总是力图合并成大冰晶，一旦吸收一定的能量，冰晶就会合并成大冰晶，从而使精子受到破坏。

②保存过程中，即使冻精温度只升高到-60℃，也可能使精子死亡。

③冻精在解冻时也需要快速升温，才能保证防止微晶在解冻过程中形成大冰晶。第二节

犬、猫的人工授精3、精液冷冻的稀释液成分（1）低温保护剂。

（2）糖类：蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖。

（3）卵黄、奶类。

（4）冷冻保护剂：

①甘油。

②二甲基亚砜。

③乙二醇。

（5）抗生素类：庆大霉素、青霉素、链霉素等。第二节

犬、猫的人工授精4、冷冻精液稀释液的组成（1）基础液：由糖类和盐类、水配制的等渗液；

（2）第I液：由基础液和卵黄（20%）组成的低温保存稀释液。用于在30℃下稀释和逐步降温；

（3）第II液：由第I液和甘油或其他防冻剂组成。甘油含量通常比稀释后浓度高一倍。第二节

犬、猫的人工授精5、冷冻精液的程序（1）精液的采集：牛羊采精可采用一次采精两个射精量的方法；

（2）品质检查：精液的密度和活力都必须符合要求；

（3）稀释前处理：羊、猪的精液在稀释前进行离心或清洗（羊）有利于提高解冻后活力；

（4）稀释：可采用一次稀释也可采用二次或三次稀释。最常用的是二次稀释。第二节

犬、猫的人工授精6、冷冻精液的程序（1）精液的采集：牛羊采精可采用一次采精两个射精量的方法；

（2）品质检查：精液的密度和活力都必须符合要求；

（3）稀释前处理：羊、猪的精液在稀释前进行离心或清洗（羊）有利于提高解冻后活力；

（4）稀释：可采用一次稀释也可采用二次或三次稀释。最常用的是二次稀释。

第一次稀释：在30℃温度下，根据计算的稀释倍数进行第一次稀释，放在500ml的烧杯中与第I液（不含甘油的稀释液）一起稀释至最后稀释倍数的一半；第二次稀释：将稀释后的精液与第II液一起降温至0-5℃；平衡：是精液与防冻剂（甘油）相互的时间。一般2-4h。温度为0-4℃；分装：冻精的剂型有细管（0.25ml、0.5ml），安瓿（2.5ml、5ml)、颗粒（0.1ml）、袋装等。第二节

犬、猫的人工授精（5）冷冻；冷源：干冰（-79℃）、液氮（-196℃）冷冻用品：冷冻面：铜网、氟板（聚四氟乙烯）、铝板冷冻槽：广口液氮罐、液氮槽钢匙、镊子、低温温度计冷冻方法：干冰埋藏法、液氮熏蒸法不同剂型冷冻方法：颗粒冻精、细管冻精活力检查：活力0.3以上第二节

犬、猫的人工授精第二节

犬、猫的人工授精

7、冻精的解冻（1）解冻温度：有冰水解冻（30-40℃），高温解冻（50-75℃），以第二种方法最常用；

（2）解冻方法：

1）湿解冻法：在试管中加入0.5-1ml解冻液，升温到30-40℃，投入一粒冻精，摇动并取出；

2）干解冻法：先将试管预热至30-40℃，投入冻精颗粒后，至融化一半时，取出加入2