3.1.2DNA的粗提取与鉴定课件112022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第3章基因工程探究▪实验DNA的粗提取与鉴定如何将DNA提取出来，并进行鉴定呢?DNA的粗提取与鉴定探究和实践一、实验原理1.提取DNA的原理利用DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，对它们进行提取。(1)DNA

酒精，某些蛋白质

酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质。(2)DNA在不同浓度的

中的溶解度不同，它能溶于

的NaCl溶液。不溶于溶于NaCl溶液2mol/L2.鉴定DNA的原理在一定温度下（沸水浴），DNA遇

试剂会呈现

。二苯胺蓝色当NaCl浓度为

2mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为0.14mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。DNA的粗提取与鉴定探究和实践二、目的要求：1.了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取和鉴定的原理。2.学会DNA粗提取的方法以及利用二苯胺试剂对DNA进行鉴定。三、材料用具：1.材料：DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。（注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。）洋葱花菜香蕉猪肝鸡血菠菜DNA的粗提取与鉴定探究和实践2.试剂及作用：(1)研磨液(2)体积分数为95%的酒精(3)2mol/L的NaCl溶液(4)二苯胺试剂(5)蒸馏水——溶解并提取DNA——析出DNA——溶解DNA——鉴定DNA，要现配现用滴入NaCl溶液中，使其浓度逐渐下降至0.14mol/L，从而析出DNA研磨液成分作用SDS使蛋白质变性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl缓冲液稳定DNADNA的粗提取与鉴定探究和实践离心机

电子天平烧杯、量筒、玻璃棒、研钵、纱布、漏斗、试管、试管架、剪刀DNA的粗提取与鉴定探究和实践四、方法步骤：1.研磨洋葱:研磨洋葱称取约30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL

，充分研磨。2.过滤获取含DNA的上清液:过滤取上清液方案一：在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取

。方案二：也可以直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500r/min的转速下离心5min，再取

放入烧杯中。研磨液上清液上清液目的：破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中上清液中除DNA之外，可能含有核蛋白、多糖等杂质抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；DNA的粗提取与鉴定探究和实践四、方法步骤：3.冷却酒精析出DNA:方案一：在上清液中加入体积相等的、

溶液（体积分数为95%），静置2～3min，溶液中出现的

就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；方案二：将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。用冷却的酒精析出DNA预冷的酒精白色丝状物减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子低温可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；低温抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；低温有利于增加DNA的柔韧性，减少断裂。DNA的粗提取与鉴定探究和实践四、方法步骤：4.DNA的鉴定：取两支20mL的试管，各加入

溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中。然后，向两支试管中各加入4mL的

。混合均匀后，将试管置于

中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。DNA的鉴定对照组如何设计？2mol/L的NaCl二苯胺试剂沸水在等体积的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，将试管置于同等沸水浴中加热5min。实验组对照组溶液蓝色的深浅与溶液中DNA的含量的多少有关DNA的粗提取与鉴定探究和实践(1)选什么样的材料实验更易成功？用洋葱做材料，为什么要充分研磨？(2)猪血和鸡血，哪个适合用作提取DNA的材料？操作时如何防止血液凝固？(3)如果用鸡血动物细胞做材料，也需要研磨裂解释放细胞中的DNA吗？猪血（哺乳动物的成熟红细胞）无细胞核，不适合；鸡血中红细胞有核DNA，且核DNA的量较多，适合。含DNA的生