兽医化验室检验分析技术

血液生化检验一、血糖的测定

血糖的测定采用光电比色法（福林-吴法）。原理无蛋白血滤液与碱性硫酸铜试剂混合加热后，滤液内的葡萄糖将二价的高铜[Cu(OH)2]还原为一价的低铜[Cu2O]，再加磷钼酸试剂后，生成蓝色的化合物钼蓝[Mo2O8]，蓝色的深浅与葡萄糖浓度成正比。与同样处理的标准管比色，即可求得血液中葡萄糖的浓度1．特制的血糖测定管2．碱性硫酸铜溶液3．磷钼酸试剂4．0.25%安息香酸和10%钨酸钠5．1/3mol/L硫酸6．葡萄糖标准贮备液7．葡萄糖标准使用液材料与设备一、血糖的测定1.制备无蛋白血滤液2.测血糖

取血糖测定管3支，标明标准、测定和空白操作方法一、血糖的测定葡萄糖（mg/dl）＝单位转换：（葡萄糖）mmol/L＝mg/dl×0.05551

正常值（mmol/L）：犬3.89～5.55计算判定标准一、血糖的测定二、血清总蛋白、白蛋白及球蛋白的测定原理与方法：

蛋白质中的肽键，与碱性酒石酸钾、碱性酒石酸钠、碱性酒石酸铜作用，产生紫色反应，称为双缩脲反应。根据颜色深浅，与经同样处理的蛋白标准溶液比色，即可求得血蛋白质含量参考值：犬总蛋白为54～78g/L，白蛋白为24～38g/L；猫的总蛋白为58～78g/L，白蛋白为26～41g/L临床意义总蛋白增高

见于重症脱水、水分摄入障碍的失水、糖尿病、酸中毒和休克总蛋白减少

见于长时间重度蛋白尿的各种肾病、肝硬化、营养不良、重度甲状腺亢进、中毒、大量出血及贫血分光光度法原理

分光光度法，常被用来测定溶液中存在的光吸收物质的浓度，其基本原理是根据Lambert和Beer定律。

Lambert定律

一束平行单色光垂直照射于一均匀物质（溶液）时，由于溶液吸收一部分光能，使光的强度减弱，若溶液的浓度不变，则溶液的厚度愈大，光线强度的减弱也愈显著。设：入射光强度为I0L表示溶液的厚度（即光程）出射光（透过光）强度为I根据辐射能理论推导，I0与I之间关系为lg（I0/I）=K1L（1）K1是常数，受光线波长、溶液性质、溶液浓度的影响。

Beer定律

当一束单色光通过一溶液时，光能被溶液介质吸收一部分，若溶液的厚度不变，则溶液浓度C愈大，光吸收愈大，透射光线强度的减弱也愈显著，光强度减弱的量与溶液浓度增加量成正比

lg（I0/I）=K2C（2）K2为吸收系数，是常数，溶液对光吸收的大小与溶液浓度C成正比。Lambert-Beer定律（又称吸收定律）

上二式合并（即（l）与（2）合并）

lg（I0/I）=

CL令A=lg（I0/I），T=I/I0

；则A=

CL，A=-lgT。T为透光率，A为吸光度（光密度、消光度）。其中

为常数，又称消光系数（extinctioncoefficient），表示物质对光线吸收的能力，其值因物质种类和光线波长而异。对于相同物质和相同波长的单色光则消光系数不变。分光光度计的结构

光源：钨灯和氢灯（或氘灯）单色器：分解为单一波长光的装置狭缝：调节入射单色光的强度，形成平行光线吸收池：又称比色杯、比色皿、比色池，装待测溶液用检测系统：感受光能，转化为电能，输出A值、T值。几类分光光度计S54型紫外分光光度计UV8500型紫外分光光度计比色杯（比色皿）玻璃比色杯石英比色杯荧光比色杯比色杯使用注意事项

1、拿取比色皿时，只能用手指接触两侧的毛玻璃，避免接触光学面,光玻璃面对着光路。

2、不得将光学面与硬物或脏物接触。盛装溶液时，液面高于光路,高度为比色皿的2/3处即可，光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附，然后再用檫镜纸擦拭。

3、测定时浓度由低到高，进行润洗。比色皿在使用后，应立即用水冲洗干净。必要时可用1：1的盐酸浸泡，然后用水冲洗干净。

4、不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤；

5、在测量时如对比色皿有怀疑，可自行检测。微量移液器吸嘴装在吸液杆上，应套牢避免间隙。依据所需容量旋转手轮，使数轮显示所需值。轻轻地将推动按钮下压，使推动按钮推移至第一停点位置。手持取液器垂直浸入溶液中，吸嘴浸入深度为2-4mm，停留2-3秒后缓慢放松按钮，即回到原来位置，溶液吸入后稍停即可将吸嘴移出液面。将取液器吸嘴置于排液容器内。使吸嘴尖紧贴容器内壁，按压推动按钮至第二停点位置，使溶液排尽，松开按钮。移液完毕，按压卸嘴按钮，将吸嘴脱卸。分光光度计的使用样品测试操作①打开电源开关，使仪器预热20分钟②用“波长设置”按钮将波长设置在您将要使用的分析波长位置上③

打开样品室盖，将参比溶液倒入比色皿中放入比色皿架靠近测定者一端位置，并将样品溶液倒入比色皿中放入比色皿架的其它位置，盖好样品室盖。④拉动比色皿架拉杆一小格使比色皿架挡住光路，按“0%T”键调透射比零⑤

推入比色皿架使参比溶液位于光路中，盖好样品室盖，按“100%T”调100%透射比⑥按“方式键”（MODE）将测试方式设置为吸光度方式(A)⑦打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖⑧将参比溶液推入或拉入光路中，按“100%T”调A零⑨

将被测溶液拉入光路中，此时，显示器上所显示是被测样品的吸光度参数⑩实验完成后，关闭电源，洗净比色皿，并盖好盖布。光路光路血液葡萄糖测定(费吴氏法)血液非蛋白氮测定血清总蛋白、白蛋白及球蛋白测定（双缩脲法）血清尿素测定（二乙酰-肟法）(一)血液葡萄糖测定(费吴氏法)原理无蛋白血滤液中的葡萄糖，具有还原性，与碱性高铜混合加热后，将高铜还原成氧化低铜而呈红色沉淀，此沉淀物再被磷钼酸氧化成蓝色物质。与同样处理的标准葡萄糖管比色，而求得血糖含量。试剂0.25％苯甲酸溶液葡萄糖贮存标准液(1ml含10mg葡萄糖)

葡萄糖应用标准液(1ml≌0.1毫克葡萄糖)

碱性铜溶液磷钼酸试剂

10％钨酸钠溶液

1/3mol／L硫酸溶液操作方法

钨酸钠法制备无蛋白血滤液50ml：取小烧杯或大试管一支，先加入蒸馏水7ml，再加入新鲜抗凝血1ml，充分混匀，使之溶血。然后，加入10％钨酸钠溶液1.0ml，混匀。最后，徐徐加入2／3N硫酸溶液1ml，随加随摇，充分混匀。放置5～10min后，用优质滤纸过滤或离心沉淀，即可获得无色清亮无蛋白血滤液以供备用。

此法所得无蛋白血滤液近中性，不仅适用于葡萄糖的测定，还可用于非蛋白氮、尿素氮，肌酐等的测定。

步骤测定管标准管空白管1无蛋白血滤液（ml）葡萄糖标准应用液（ml）蒸馏水（ml）碱性铜溶液（ml）2002020200222混合后，在沸水中煮沸8min，取出后浸于冷水中2-3min（不可摇动）3磷钼酸试剂2ml2ml2ml4混合后，于室温下静置2min5蒸馏水加至25ml25ml25ml6混匀，待管内二氧化碳逸出后比色，选用620nm滤光板比色，读取各管密度值取血糖测定管3支，分别标明测定管、标准管及空白管，按表操作。全血血糖含量（mg/100ml）＝测定管光密度/标准管光密度×0.2×100/0.2临床意义增高病理性增高糖尿病、甲状腺机能亢进肾上腺皮质机能亢进暂时性增高全麻后、肺炎、肾炎、颅内压增高、中枢神经感染缺氧窒息减低生理性减低病理性减低胰岛素分泌过多、严重贫血肾功能衰竭的慢性肾炎及功能减弱、甲状腺功能减弱、脑垂休功能减退。多见长时间的剧烈运动过后、过分饥饿及哺乳期竺(二)血液非蛋白氮测定原理血中的非蛋白氮物质主要有尿素、尿酸、肌酸和肌醇等，均为蛋白质代谢中间产物或最终产物。由于这些化合物不被蛋白沉淀，故测定无蛋白血滤液的含氮量即为非蛋白氮含量。试剂硫酸铵贮存标准液(1ml≌1mg氮)

硫酸铵应用标准液(1ml≌0.03mg氮)50%硫酸溶液碘化汞钾试剂贮存液碘化汞钾试剂应用液步骤测定管标准管空白管1无蛋白血滤液（ml）硫酸铵标准应用液（ml）50%硫酸溶液（ml）玻璃珠（粒）100.21010.21000.202

将测定管置酒精灯上以小火加热消化，至管内充满白烟，管底液体有黑色转变为无色透明时为止，冷却30min。3蒸馏水加至（ml）7774碘化汞钾试剂应用液（ml）3335

混合后，待10min，用480nm波长或蓝色滤光板光电比色，以空白管校正光密度至0点，分别读取各管读数。此项操作应在20min内完成。

操作方法取草酸钾抗凝全血（不能用双草酸盐抗凝血），以钨酸钠法制备无蛋白血滤液后，按表操作。全血非蛋白氮含量（mg/100ml）＝测定管光密度/标准管光密度×0.03×100/0.1降低增高急、慢性肾炎尿毒症肾盂积水泌尿系结核、结石阻塞严重烧伤大量呕吐腹泻肠梗阻血红蛋白尿甲状腺机能亢进末期肾上腺机能不全重金属中毒等中毒性肝炎胆道术后妊娠晚期临床意义(三)血清总蛋白、白蛋白及球蛋白测定原理蛋白质中的肽键，与碱性酒石酸钾/纳/铜作用，产生紫色反应，成为双缩脲反应。根据颜色的深浅，与经同样处理的蛋白标准溶液比色，即可求得血液蛋白质含量。试剂27.8%硫酸钠-亚硫酸钠混合液双缩脲试剂原理：当脲加热至180℃时，两分子脲缩合，放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性条件下能与硫酸铜生成紫红色络合物，即发生双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键，与双缩脲结构相似，故蛋白质与碱性硫酸铜也能形成紫红色络合物,在一定条件下其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，可用来进行蛋白质定量。最大波长位于540nm处。本法测定蛋白质范围1-10mg。双缩脲法测定蛋白质浓度操作方法1、制备标准血清及测定其总蛋白量若无已备标准血清时，可收集多份健畜血清混合而成标准血清，并用微量定氮法测其总蛋白量。微量定氮法取血清1ml置于50ml量瓶中，用生理盐水做50倍稀释，混匀，供测总蛋白。另用血清制备无蛋白血滤液（同全血制备无蛋白血滤液法），供测非蛋白氮。然后按后表操作：步骤总蛋白测定管非蛋白氮测定管标准管空白管1硫酸铵标准应用液（ml）0.9%氯化钠稀释血清（ml）无蛋白血滤液（ml）50%硫酸溶液（ml）玻璃珠（粒）00.200.21001.00.211.0000.210000.202除空白管外，均需加热消化，至管内充满白烟，管底液体有黑色转变为无色透明为止，冷却3蒸馏水加至（ml）77774碘化汞钾试剂应用液（ml）33335

混匀后，用440nm波长或蓝色滤光板光电比色，以空白管校正光密度至0点，分别读取各管读数。记录。血清氮含量（mg/100ml）＝总蛋白测定管光密度/标准管光密度×0.03×1000/0.004血清非蛋白氮含量（mg/100ml）＝非蛋白测定管光密度/标准管光密度×0.03×1000/0.1血清总蛋白质含量（g/100ml）＝（含氮量－非蛋白氮）×6.25/10002、制备标准血清应用液未经稀释标准血清0.2ml，加27.8%硫酸钠-亚硫酸钠混合液3.8ml，混匀，备用。3、制备被检血清总蛋白混悬液和白蛋白澄清液被检血清0.2ml置试管中加入27.8%硫酸钠-亚硫酸钠混合液3.8ml，混匀即得总蛋白混悬液。放置片刻，待气泡上升后，取此混悬液1ml，做总蛋白测定。想剩余部分内加入乙醚2.5ml，振摇混匀，2500rpm离心5min。后斜执试管，用1ml吸管小心吸取下层澄清的白蛋白液1ml，供测白蛋白用。步骤总蛋白测定管非蛋白氮测定管标准管空白管1被检血清总蛋白混悬液液（ml）被检血清白蛋白澄清液（ml）标准血清应用液（ml）27.8%硫酸钠-亚硫酸钠混合液（ml）双缩脲试剂（ml）00.200.21001.00.211.0000.210000.202充分混合均匀，置37℃恒温箱或室温暗处30min后，以540nm或绿色滤光板光电比色，以空白管校正光密度到0点，读取各管读数，记录被检血清总蛋白含量（g/100ml）＝总蛋白测定管光密度/标准管光密度×标准血清总蛋白被检血清白蛋白含量（g/100ml）＝白蛋白测定管光密度/标准管光密度×标准血清总蛋白被检血清球蛋白含量（g/100ml）＝被检血清总蛋白量－被检血清白蛋白量总蛋白升高重症脱水、水分摄入障碍的失水、糖尿病、酸中毒、休克总蛋白减低长时间中毒蛋白尿的各种肾病、肝硬化腹水、营养不良、重度甲状腺功能亢进、中毒、大量出血、贫血白蛋白增高严重腹泻、呕吐、饮水不足、烧伤造成脱水及大出血，致使血浆浓缩而白蛋白相对增高白蛋白减少

白蛋白丢失过多肾病综合征、严重出血、大面积烧伤、胸腹腔积水

白蛋白合成功能不全慢性肝脏疾病、恶性贫血和感染

蛋白质摄入量不足营养不良、消化吸收功能不良、蛋白摄入不足

蛋白质消耗过大甲状腺功能亢进、各种慢性消耗性疾病、感染、外伤球蛋白增高肝硬化、丝虫病、肺炎、细菌性心内膜炎、结合活动期临床意义(四)血清尿素测定（二乙酰-肟法）原理在酸性反应环境中加热，二乙酰-肟分解二乙酰和羟胺，二乙酰与样品中的尿素反应，缩合成红色的二嗪衍生物，成为Fearon反应。反应中加入硫胺脲和硫酸镉，可提高反应的灵敏度和显色的稳定性试剂酸性试剂

二乙酰-肟溶液

50%硫酸溶液尿素标准贮存液尿素标准应用液操作方法步骤测定管标准管空白管1二乙酰-肟溶液（ml）血清（ml）尿素标准应用液（ml）蒸馏水（ml）酸性试剂（ml）100.21010.21000.202

混匀，置沸水浴中加热12min，置冷水中冷却5min，以空白管校正光密度至0点，540nm波长比色血清尿素含量（mmol/L）＝测定管光密度/标准管光密度×5尿素含量增高肾前性

失水，引起血液浓缩，肾血流量减少，肾小球滤过率降低，使血中尿素潴留。肾性

急性肾衰竭时肾功能轻度受损肾后性

因尿道狭窄、尿路结石、膀胱肿瘤等致使尿道受压临床意义五、自动生化分析仪及其在兽医临床上的应用检测系统样品、试剂处理系统反应系统清洗系统数据处理系统

三、血清各类离子的测定

血清钠测定

常用的测定方法有醋酸铀镁比色法、火焰光度计法、原子吸收分光光度计法和离子选择电极法等参考值：犬

138～156mmol/L

猫

147～

156mmol/L临床意义：1.血清钠含量升高

临床上少见，但也可见肾上腺皮质机能亢进或原发性醛固酮增多症、失水性脱水和过多输入高渗盐水及食盐中毒

2.血清钠含量降低

（1）胃肠道失钠

可见幽门梗阻、呕吐、腹泻、引流等都可丢失大量消化液而发生缺钙

（2）钠排出增多

可见严重肾盂肾炎、肾小管严重损害、肾上腺皮质机能不全、糖尿病、应用利尿剂治疗、皮肤失钠等（3）抗利尿激素过多

肾病综合征的低蛋白血症、肝硬化腹水等

常用的测定方法有四苯硼钠比浊法、亚硝酸钴铀法、火焰光度计法、原子吸收分光光度计法和离子选择电极法等

血清钾测定正常值：犬

3.80～5.80mmol/L，猫

3.80～4.60mmol/L临床意义：

血清钾含量增高

见于肾上腺皮质功能减退症、急性或慢性肾功能衰竭、休克、组织挤压伤、严重溶血、口服或注射含钾液过多等

血清钾含量低

常见于钾盐摄入不足，严重腹泻、呕吐、肾上腺皮质机能亢进，服用利尿剂，胰岛素作用等

常见的测定方法有钛黄比色法和原子吸收分光光度计法等参考值：犬

0.79～1.06mmol/L，猫

0.62～1.03mmol/L

血清镁测定临床意义1.血清镁含量升高

见于肾衰竭、甲状腺、甲状旁腺机能减退及多发性骨髓瘤2.血清镁含量降低

消化道丢失、消化吸收不良、尿路丢失、甲状腺、甲状旁腺机能亢进等

常用的测定方法有乙二胺四乙酸二钠滴定法、火焰分光光度计法、高锰酸钾滴定法和离子选择电极法等参考值：犬

2.57～2.97mmol/L猫

2.09～2.74mmol/L

血清钙测定临床意义1.血清钙含量升高

见于甲状旁腺机能亢进、内服和注射维生素D过量、多发性骨髓瘤、胃肠炎和由于脱水而发生酸中毒时2.血清钙含量降低

见于甲状旁腺机能减退、维生素D缺乏、骨软病、产后低钙血症及慢性肾炎和尿毒症等

四、血浆二氧化碳结合力的测定原理临床意义1．二氧化碳结合力增加（1）代谢性碱中毒：由于碳酸氢钠过多所致，如胃酸分泌过多、小肠阻塞、呕吐、摄入碱过多等（2）呼吸性酸中毒：由于二氧化碳过多所致。当呼吸发生障碍时，二氧化碳不能自由呼出，血液中碳酸浓度增加，见于肺气肿、肺炎、心力衰竭等

2.二氧化碳结合力降低（1）代谢性酸中毒由于碳酸氢钠不足所致，见于长期饥饿、肾炎后期、严重腹泻、服用氯化铵过多等（2）呼吸性碱中毒由于二氧化碳不足所致，如换气过度呼出二氧化碳过多，见于发热性疾病、脑炎等

五、血清酶学检验

小动物临床检验常测定的血清酶有转氨酶、肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶同工酶等。主要了解以上酶简单的测定方法和理解其临床意义。常用的测定方法为肌酸显色法犬正常值为60～359IU/L，猫正常值为95～1294IU/L

对心肌、骨骼肌损失及肌营养不良的诊断有特异性。当各种类型进行性肌萎缩、脑损伤时，CPK增高；不适当地注射抗生素可引起CPK增高。CPK数值降低时，无临床意义肌酸磷酸激酶（CPK）测定常用的测定方法有金氏比色法和赖氏比色法正常参考值：犬

23～56IU/L；猫

26～43IU/L谷草转氨酶（AST/GOT）测定临床意义

血清谷草转氨酶活性升高，见于急性肝炎、肝硬变、心肌炎及骨骼肌损伤

血清谷草转氨酶活性降低，见于维生素吡哆醇缺乏和大面积肝坏死降低

GPT又称丙氨酸转氨酶（ALT），测定方法常用金氏比色法和赖氏比色法正常参考值:犬

21～66IU/L；猫

6～64IU/L谷丙转氨酶（GPT/ALT）测定临床意义

犬许多组织、器官中含有谷丙转氨酶，其中以肝脏中含量最高

血清谷丙转氨酶活性升高，见于犬传染性肝炎、猫传染性腹膜炎、马传染性贫血、肝脓肿和胆管组塞、甲状腺机能降低、心脏功能不足、严重贫血和休克等

常用的测定方法为醋酸纤维薄膜电泳法正常参考值:犬

45～233IU/L；猫

63～273IU/L乳酸脱氢酶（LDH）测定临床意义：

LDH存在于肝脏、心肌、骨骼肌、肾脏等组织、器官。肌肉损伤、肝脏疾病、贫血或急性白血病时，血液中LDH会升高血液学检查红细胞沉降率的测定红细胞压积容量测定红细胞渗透脆性的测定血液凝固时间测定血红蛋白(Hb)含量测定血细胞检验血小板计数红细胞计数白细胞计数白细胞分类计数内容任务2血细胞相关性检查定义:血液加入抗凝剂后，一定时间内红细胞向下沉降的毫米数，叫做红细胞沉降速度，简称血沉（ESP）。红细胞沉降率测定魏氏法先向10ml刻度试管中加入3.8%枸橼酸1ml，再自静脉采血4ml，颠倒混合数次，然后用魏氏血沉管吸取抗凝剂至刻度0处，擦去管外血液，在室温条件下，垂直放于血沉管架上，经15、30、45、60min，分别观察并记录细胞沉降数值。▲方法

1魏氏血沉管长30cm，内径2.5mm管上有0~200的刻度，每一刻度的距离为1mm，其溶积为1ml。“六五”型血沉管法于血沉管中加入抗凝剂（草酸钠0.015~0.02g，枸橼酸钠粉末0.04~0.05g）,自颈静脉直接采血至刻度“0”处，立即充分混合，于室温垂直立于试管架上，镜15、30、45、60min各观察一次，并记录红细胞沉降的数值。▲方法

2“六五”型血沉管法内径0.9cm，全长17~20cm，管上有100个刻度容积为10ml。各种动物的正常血沉值动物种类15min30min45min60min测定方法马驴黄牛水牛奶牛山羊猪31329.80.33497530.80.785396.7650.752055110.70.891.61.20.630六五型法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏法六五型法①测定血沉时必须用新配制的抗凝血；②血液与抗凝剂混合要充分，柱面上不应有气泡，它可使血沉变慢；③用魏氏法测定时，事先应检查血沉架是否好用，以防漏液；④测定时室温以20℃左右为宜，温度过低可以减慢血沉。血沉值没有独立的诊断意义。血沉加快，见于马传染性贫血、梨形虫病、结核、鼻疽、猪瘟、化脓性炎症、风湿症等。血沉减慢，见于大出汗、多尿、剧烈腹泻、马流行性脑脊髓炎、破伤风、牛瓣胃阻塞、腹痛症等。临床意义定义:是指压紧的红细胞在全血中所占的百分率,是鉴别贫血的一项不可缺少的指标,简称比容。红细胞压积容量测定红细胞压积容量测定管（温氏测定管）长约11cm,内径约2.5mm，管壁刻有0-10cm刻度，分度刻度1mm。用毛细玻璃吸管或长针头吸满抗凝全血，将血液自上而下挤入温氏测定管内，至刻度10处；3000rpm离心30-40min。读取红细胞柱层的刻度数，即为红细胞压积容量数值，数值用百分率表示。▲方法1、压积升高2、压积降低各种贫血生理性升高病理性升高各种脱水每超出高限一个小格（１mm)一天的补液量＝８００－１０００毫升临床意义定义:是指红细胞在低渗氯化钠溶液中的抵抗力，故又称为红细胞抵抗。红细胞渗透脆性的测定取10ml刻度试管22支，分别标明管号，每管分别加入个浓度低渗氯化钠溶液5ml，再加入10%红细胞生理盐水悬浮液2滴，混匀。室温下放置10-15min，离心5min并观察结果。抗凝血1份，先用生理盐水将红细胞洗涤1次，然后做成10%红细胞生理盐水悬浮液备用。配制1%NaCl溶液，以0.02%为浓度梯度配制从0.76%-0.34%共22份浓度的低渗溶液。分别装入100ml细口瓶中备用，每6-8周更换一次。溶液变为浅桃红色，管底有大量红细胞沉淀，即开始溶血，此管的盐水浓度代表红细胞的最小抵抗；溶液呈深红色，管底无红细胞沉淀，即完全溶血，此管的盐水浓度代表红细胞最大抵抗。▲方法增高降低缺铁性贫血免疫性溶血性贫血临床意义定义:是指血液自血管流出直到完全凝固所需的时间，用以测定血液的凝固能力。血液凝固时间测定颈静脉采血，见到出血后立即用秒表记录时间。取血一滴，滴在玻片一端，随即玻片稍稍倾斜，滴血一端向上。此时未凝固血液自上而下流动，形成一条血线，放在室温下的平皿内，防止血液中水分蒸发，静置2min，之后每隔30s用针尖跳动血线一次，待针头挑起纤维丝时，即停止秒表，记录时间，即为血凝时间。▲方法玻片法简单易行，但不及试管法准确试管法采血前准备刻度小试管3支，并预先放在25-37℃恒温水浴箱内。颈静脉采血，剪刀出血立即开始计时。随之将血液分别加入3支试管内，每支试管各加1ml，再将试管放回水浴箱。放置3min后，先从第一管做起，每隔30s逐次倾斜试管一次，直到翻转试管血液不能流出为止，并记录时间。3支小试管的平均时间即为血凝时间。适用于出血性疾病的研究与诊断延长缩短重度贫血血斑病肝脏病炭疽病偶见于纤维素性肺炎临床意义红细胞遇酸溶解，游离出血红蛋白，并被酸化为褐色的酸性血红素，稀释后与标准色柱比色，即可求得血红蛋白的含量。血红蛋白试纸测定法器材应备有测定血红蛋白试纸和4g%~15g%血红蛋白标准比色板。测定时，取试纸一条，吸附被检血液一小滴，待血完全浸透后，立即置于所附标准色板的小孔下，肉眼与色板色泽进行比较，选择颜色相同或近似者，即得100ml血液所含血红蛋白的克数。血红蛋白测定沙利氏血红蛋白测定法沙利氏血红蛋白计由比色架、标准比色柱、血红蛋白测定管及血红蛋白吸管组成。测定管有两个刻度标志，一侧的2~24刻度表示100ml血液中含有的血红蛋白克数；另一侧有20~160刻度，表示100ml血液中所含血红蛋白的百分数。在血红蛋白稀释管内加入0.1mol/L盐酸溶液至刻度10%处。用血红蛋白吸管吸取血液至20mm3刻度处，，拭净管外附着血液，迅速将试管内血液缓缓吹入血红蛋白洗试管内的盐酸溶液中，再吸取上层盐酸溶液反复吹洗数次，勿使产生气泡。移去血红蛋白吸管，用小玻璃棒搅拌或轻轻摇振，使血液与盐酸溶液混合而呈褐色。将测定管插入比色架内，静置10min。慢慢分次沿测定管壁滴加蒸馏水，边加边混匀，边比色，直至血红蛋白测定管液体的颜色与标准比色柱一致为止，读取测定管液体凹面最低处的刻度数，即为100ml血液内所含血红蛋白的克数或百分数。▲方法动物种类血红蛋白值（克/100毫升）马、骡11.0（9.0~13.0）牛10.0（9.0~11.0）水牛8.3（8.0~9.0）羊9.8（7.8~11.6）猪10.5（9.5~12.0）鸡12.5（10.0~14.5）血红蛋白增高见于各种原因引起的血液浓缩，如腹泻、呕吐、大汗、多尿及肠梗阻等。血红蛋白减少见于各种贫血，如马鼻疽、牛结核、牛羊肝片吸虫病、仔猪蛔虫等。临床意义红细胞计数白细胞计数白细胞分类计数血细胞检验红细胞计数是将一定量的供检全血经一定倍数（200倍）稀释后，在血细胞计数板的计数室内，数一定体积的红细胞数，然后再推算出1mm3血液内的红细胞数。红细胞计数

（redbloodcellcount，RBC）冲液

计数方法

临床上最常用的是改良纽巴（Neubauer）氏计数板，它是由一块特制的玻璃板构成，玻璃板中间有横沟将其分为三个狭窄的平台，两边的平台较中间的平台高0.1mm。中央平台又有一纵沟相隔，其上各刻有一个计数室。每个计数室划分为9个大方格，每一大方格面积为1.0mm2，深度为0.1mm；四角每一大方格划分为16个中方格，为计数白细胞用。中央一大方格用双线划分为25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格，共计400个小方格，此为红细胞计数之用。血细胞计数板

用5ml吸管吸取红细胞稀释液3.98ml（或4ml亦可）置于试管中。用沙利氏吸血管吸取全血样品至2020mm3刻度处（或吸血至刻度10处，红细胞稀释液用2ml）。擦去吸管外壁多余的血液，将此血液吹入试管底部，再吸、吹数次，以洗出沙利氏管内粘附的血细胞，然后试管口加塞，颠倒混合数次，再用毛细吸管（或玻棒）吸取已稀释好的血液，放于计数室与盖玻片接触处，即可自然流入计数室中。注意充液不可过多或过少，过多则溢出而流入两侧槽内，过少则计数池中形成气泡，致使无法计数。

计数时，先用低倍镜，光线要稍暗些，找到计数室的格后，把中央的大方格置于视野之中，然后转用高倍镜。在此中央大方格内选择四角与最中的五个中方格（或用对角线的方法数五个中方格），每个中方格有16个小方格，所以共计数80个小方格。计数时注意压在左边双线上的红细胞计在内，压在右边双线上的红细胞则不计数在内；同样，压在上线的计入，压在下线的不计入，此所谓“数左不数右，数上不数下”的计数法则。计算1mm3血液中红细胞个数=X/80×400×200×10。X:5个中方格(即80个小方格)内的红细胞总数。400:一个大方格，即1mm2面积内共有400个小方格。200:稀释倍数。10:血盖片与计数板的实际高度是1/10mm，乘10后则为1.0mm。上式简化后为:1mm3红细胞数=X×10,000充液量不可过多或过少，过多可使血盖片浮起，过少则计数室中形成小的空气泡，使计数结果偏低甚至无法计数。显微镜台应保持水平，否则计数室内的液体流向一侧而计数不准。沙利氏吸血管或试管，每次用完后，先用清水吸吹数次，然后用蒸馏水、酒精、乙醚，按次序分别吸吹数次，干后备下次使用。血细胞计数板用蒸馏水冲洗后，用绒布轻轻擦干即可，切不可用粗布擦试，也不可用酒精、乙醚等溶液冲洗。注意事项健康猪红细胞数为5.5×1012/L；奶牛5.98×1012/L；奶山羊17.2×1012/L；健康犬红细胞数为6.8×1012/L，变动范围为5.5-8.5×1012/L；健康猫红细胞数为6.5-9.5×1012/L。红细胞增多

可见于因各种原因引起的脱水，进而使血液浓缩，表现为红细胞相对增多，如大出汗、胸膜炎和腹膜炎的渗出期等。红细胞减少

多见于各种类型贫血，如失血性贫血、营养性贫血、溶血病等。此外，红细胞生成不足或破坏增多，亦可导致红细胞数减少。临床意义白细胞计数

whitebloodcellcount，WBC

一定量的血液用冰醋酸溶液稀释后，可将红细胞破坏，然后在细胞计数板的计数室内计数一定容积的白细胞数，一次推算出每立方毫米内白细胞总数。用1ml吸管吸取白细胞稀释液0.38ml（也可吸0.4ml）置一小试管中。用沙利氏管吸取被检血至20mm3处，擦去管外粘附的血液，吹入小试管中，反复吸吹数次，以洗净管内所粘附的白细胞，充分振荡混合。再用毛细吸管或沙利氏吸血管吸取被稀释的血液，充入已盖好盖玻片的计数室内，静置1～2min，低倍镜检查。将计数室四角四个大方格内的全部白细胞依次数完，注意压在左线和上线的计入，压在右线和下线的不计入。1mm3血液中白细胞数=x/4×20×10X：四角四个大方格内的白细胞总数。x/4：一个大方格（面积为1mm2）内的白细胞数。20：稀释倍数10：血盖片与计数板的实际高度是0.1mm，乘10后则为1mm。上式简化后为1mm3血液中白细胞数=x×50计算白细胞增多可见于多数细菌性感染和炎症，如猪丹毒、猪肺疫、结核、马鼻疽、马腺疫、肺炎、胸膜炎、腹膜炎等。白血病时以白细胞的显著增多为特征。白细胞减少主要见于某些病毒性传染病，如猪瘟、流感等；某些重度疾病的后期；长期应用某些药物（如氯霉素等）；梨形虫病等。临床意义健康猪白细胞总数14.0±0.93×109/L；奶牛白细胞总数9.41±2.13×109/L；奶山羊白细胞总数13.2±1.88×109/L；健康犬白细胞总数为6.0-17.0×109/L。健康猫白细胞总数为9.0-24.0×109/L。白细胞分类计数

differentialcountofwhitebloodcell，DC

外周血液中的白细胞主要有5种，即嗜中性白细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞、淋巴细胞、单核细胞，它们各有其特定的生理机能，在正常时这5种白细胞之间有一定的比例。但在病理情况下，白细胞总数的变化反映机体防御机能的一般状态，各种白细胞之间百分比的变化，则反映机体防御机能的特殊状态。由于白细胞总数的增减并不一定表示各类白细胞平均增多或减少，常常仅限于某一种或两种白细胞数的变化，从而引起白细胞之间百分比的相对改变。因此，白细胞计数对疾病的诊断具有一般意义，而白细胞分类计数则具有具体意义，在分析临床意义时，必须把二者结合起来。

镜检技术将被检血液涂片，经瑞氏染色或姬姆萨染色，水洗，干燥后镜检。先用低倍镜全面观察血片上细胞分布情况及染色质量，然后选择染色良好，细胞分布均匀的部分，用油镜进行分类。由于比重大的细胞(粒细胞，单核细胞等)多分布在血片的边缘和尾部，比重小的细胞(如小淋巴细胞等)则多分布在血片的头部和中间。为减少这种细胞分布的固有误差并避免重复计数，血片必须按一定方向曲折移动而分类计数。计数时，为避免重复和遗漏，可用四区、三区或中央曲折计数法推移血片，记录每一区的各种白细胞数。每张血片最少计数100个细胞(如果计数200-300个白细胞，当然其百分率更为准确)，连续观察2～3张血片，求出各种白细胞的百分比。记录时，可用白细胞分类计数器，也可事先设计一表格，用画“正”字的方法记录，以便于统计百分数。

各类白细胞的形态特征

在镜下辨认各种白细胞时，必须掌握其主要特征，如细胞大小，核的形状结构及染色性，胞浆颜色、有无颗粒及颗粒特点等。在同一张血片上对照比较，互相鉴别。1．嗜中性白细胞。圆形，直径约10—15μm。胞浆淡红色，胞浆内有多量紫红色细小颗粒(染色不佳时则看不清楚)。核染成深紫色，其形状多样，核微呈肾形，染色稍淡的称幼年核，呈带形或S形，两边平行的称杆状核，分成2—3叶，在叶之间有细丝相连的称分叶核。有时因核叶重叠看不到细丝，但核量较多，染色质致密，也可认为是分叶核。2．嗜酸性白细胞。大小，形态与嗜中性白细胞大体相似，唯胞浆内含有粗大的鲜红色颗粒(马的这种嗜酸性颗粒明显大于其它家畜)。核多数为两叶。3．嗜碱性白细胞。大小、形态与嗜中性白细胞相似，但胞浆内含有粗大的深蓝色颗粒，常遮盖在核上。核分叶不明显。4．淋巴细胞。分大小两种，小淋巴细胞圆形，直径约7—10μm，核染成深紫色，圆形或肾形。胞浆很少，常仅呈一小片月牙状，染成蓝色。大淋巴细胞直径约10—19μm，核圆形或肾形。胞浆相对较多，染成天蓝色，在胞浆与核之间有淡染带。有时内含少数紫红色大颗粒。5．单核细胞。是外周血液中最大的细胞，直径约为12—24μm。核染成紫色，其染色质疏松，核形不规则，呈肾形，多角形，折叠状等。胞浆较多，染成浅灰蓝色，有时内含少量灰尘样淡红色小颗粒。临床意义白细胞增多嗜中性白细胞增多：见于急性炎症及外伤感染、化脓性感染等。嗜酸性白细胞增多：见于某些寄生虫病、过敏性疾病及湿疹等。淋巴细胞增多：见于结核、布氏杆菌病及犬瘟热、流感等病毒病。单核细胞增多：见于败血性疾病，某些焦虫病及李氏杆菌等。白细胞减少嗜中性白细胞减少：见于病毒性传染病、药物中毒（如长期服用抗生素）、各种疾病的垂危期。嗜酸性白细胞减少：见于败血症、毒血症、尿毒症等。淋巴细胞减少：放射性损伤，多为嗜中性白细胞增多而造成的相对性变化。在分析嗜中性白细胞增、减变化时，还应注意嗜中性白细胞的成熟情况。若未成熟的嗜中性白细胞增多，即出现嗜中性髓样细胞、幼稚型和杆状核嗜中性白细胞的比例增多，则称为核左移。若血液内分叶核嗜中性白细胞大量增多，而且核的分叶数目也增多，则称为核右移。白细胞总数增多的同时，出现核左移，表示骨髓造血机能加强，机体处于积极防御阶段；而白细胞总数减少时见有核左移，则表示骨髓造血机能减退，机体的抗病力降低。至于核右移，乃骨髓造血功能衰退的标志，多因机体高度衰竭而引起，常提示预后慎重。临床意义尿素能溶解红细胞及白细胞而保存完整形态的血小板，经稀释后再细胞计数室内直接计数，以求得1mm3血液内的血小板数。稀释液中的枸橼酸钠有抗凝作用，甲醛可以固定血小板的形态。血小板计数(plateletcount)

血小板具有重要的保护机能，参与血液凝固。血小板计数对于评价血液凝固机制提供一定的依据用1ml吸管吸取稀释液0.38ml置一小试管中。用沙利氏管吸取被检血至20mm3处，擦去管外粘附的血液，吹入小试管中，吸吹数次，充分混允。静置20min以上，使红细胞溶解。充分混匀后再用毛细吸管或沙利氏吸血管吸取被稀释的血液，充入已盖好盖玻片的计数室内，静置10min，高倍镜观察。任选计数室内一个大方格，按计数法计数。血小板在高倍镜下，呈椭圆形、原形或不规则折光小体，注意切勿误将尘埃等异物计入。

1mm3血液中血小板数=x×20×10X：一个大方格内的白细胞总数。20：稀释倍数10：血盖片与计数板的实际高度是0.1mm，乘10后则为1mm。上式简化后为1mm3血液中血小板数=x×200计算临床意义血小板减少：血小板增多：生成减少破坏增多消耗过多原发性增多继发性增多急性感染、急性出血急性溶血再生障碍性贫血、急性白血病放化疗等原发性血小板减少性紫癜/脾功能亢进血管内凝血、血栓性血小板减少性紫癜/任务三血液分析仪及其在宠物临床上的应用

血液分析仪是目前临床血液检验常用检测仪器。20世纪40年代后期，美国人库尔特（W.H.Coulter）发明电子血细胞计数仪并申请专利。其特点是检测速度快、精确度高、操作简便。目前，各类血液分析仪主要能完成两大功能：①细胞计数功能。②细胞分类功能。血液分析仪检测原理主要是电阻抗法。

电阻抗法血液分析仪器组成

①信号发生器：通过小孔的各种血细胞都能产生电阻信号，信号电平的高低与细胞的大小成正比。②放大器：血细胞通过小孔时产生的脉冲信号非常微弱，需通过电子放大器，将微伏级信号放大为伏级脉冲信号，才可触发电路。③阈值调节：在计数不同细胞时，应调节阈值电平，以给出合适的阈值度，使计数结果尽量符合实际水平。④甄别器：各种微粒(血细胞、细胞碎片、杂质等)通过小孔时均可产生相应脉冲信号；甄别器则根据阈值提供的参考电平，将低于参考电平的各种非计数目标的假信号去掉，以提高计数的准确性。⑤整形器：经放大和甄别后的细胞脉冲信号，波形不一致，必须经过整形器调整为一致标准的平顶波形后，才可触发计数电路。⑥计数系统：血细胞产生的脉冲信号，经过放大、甄别、整形后，送入计数系统；仪器对大小不同的脉冲进行选择，区分出不同类型的细胞并分别进行计数。

电阻抗法检测原理

又称库尔特原理(Coulterprinciple)白细胞计数和分类计数原理

仪器将体积为35～450fL的血细胞，分为256个通道（channel）。每个通道：1.64fl。根据细胞大小，分别置于不同的通道中，显示血细胞体积分布直方图(Histogram)。经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生了变化！第一群（35～90fl）小细胞区：淋巴细胞（体积最小）。第二群（90～160fl）单个核细胞区，（中间细胞）：单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等。第三群（160fl以上）大细胞区：嗜中性粒细胞（体积最大）。3590160300400450(fl)正常白细胞分类模式图（直方图）%正常参考值：各种常见宠物白细胞分类平均值(%)

红细胞检测原理

红细胞计数和血细胞比容测定与白细胞计数相似100200300400(fl)%血小板检测原理

血小板计数（platelet,PLT）：随红细胞在一个系统中进行检测%

102030(fl)直方图在2～28fl，主要在2～

15fl（不同仪器不一）实验室检验分析技术项目1血液学检查任务1血液样品采集与抗凝血液样品采集1.保定2.消毒3.采样禽类：翅根静脉、心脏猪：耳静脉、前腔静脉牛羊：颈静脉犬猫：前臂头静脉、后肢隐小静脉血液全血血浆血清血液学检查血细胞计数分类与形态检查血浆生理和病理检验内分泌激素生化与免疫学检查血液的抗凝草酸盐是常用的抗凝剂，每1.5-2.0mg可抗凝1.0ml血液，可用于血液常规检验。因对红细胞大小有影响，故不能用红细胞压积测定，如测定红细胞压积时，可用双草酸盐抗凝剂或乙二胺四乙酸二钠。双草酸盐抗凝剂

草酸钾0.8g草酸铵1.2g蒸馏水加至100ml溶解后吸取0.5ml，加入供采血试管或小瓶中，置干燥箱内（温度不超过80℃）烘干备用，可供5ml全血抗凝。血液检验乙二胺四乙酸（EDTA

）盐可适用于一般的血液学检查，特别是血小板计数，但因为影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，不适合于血象及血小板功能检查。（EDTA－Na2－H2O）每10mg可使5ml全血抗凝；或配成10%的溶液，每2滴可使5ml全血抗凝。（EDTA－K2－2H2O）1%溶液0.1ml可使5ml血液不凝固。全血细胞分析及血细胞比容测定。3.8%枸橼酸钠溶液每1ml可使4ml全血抗凝。常用于血沉、凝血因子和血小板功能检查。因其毒性小又可作为血液保养液。但不适用于血液化学检验。由于抗凝剂溶解缓慢，故只能配成溶液，不能用粉剂。血液检验肝素肝素价格最贵，其优点是抗凝作用强，不影响血细胞的体积，不致溶血等，可用于多种血液生物化学分析和红细胞压积测定。但过量的肝素可引起白细胞聚集和血小板减少，故不适用于白细胞和血小板计数，也不适用于血涂片检查，因其在瑞氏染色时会出现蓝色背景，更不能用于血液学一般检查。肝素是生理性抗凝剂,广泛存在于肺、肝、脾等几乎所有的组织和细胞周围，肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的黏多糖。抗凝机制较为复杂，主要是加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶的作用，从而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用。通常用肝素粉剂配成1g/L水溶液。取0.5ml置小瓶内，放于37～50℃中烘干后贮于冰箱内保存。能使5ml血液不凝固，肝素抗凝剂应及时使用，放置过久易失效。

如分离血清，应将全血采集在试管中（不加抗凝剂），在室温下或25-37℃温水中斜置，血清析出后即可分离。血浆应在抗凝血采集后离心分离。血液采集后应尽快送检和检测。不能立即送检的血样，血片应固定，抗凝血、血浆和血清应冷藏。送检血样应编号，并避免剧烈振摇。血液学检查项目与血样保存的期限见下表

血样的处理检查项目保存时间（h）检查项目保存时间（h）白细胞计数2-3血红蛋白含量48红细胞计数24红细胞压积容量24血小板计数1红细胞沉降速率2-3网织红细胞计数2-3白细胞分类计数1-2注意:怀疑传染病时，采血应防止到处流散，检后残余血液及所用器皿应进行消毒处理。红细胞背景知识

红细胞也称红血球，是血液中数量最多的一种血细胞，同时也是脊椎动物体内通过血液运送氧气的最主要的媒介。在所有的脊椎动物及若干无脊椎动物，其血红素包含在特定的细胞中来进行其机能活动，这种血球称为红细胞。其它的血细胞，如白血球，则是免疫细胞。红细胞中含有血红蛋白，因而使血液呈红色。血红蛋白能和空气中的氧结合，因此红细胞能通过血红蛋白将吸入肺泡中的氧运送给组织，而组织中新陈代谢产生的二氧化碳也通过红细胞运到肺部并被排出体外。血红蛋白更易和一氧化碳相合，当空气中一氧化碳含量增高时，可引起一氧化碳中毒。红细胞和血红蛋白的数量减少到一定程度时，称为贫血。红细胞大量被破坏可引起溶血性黄疸。红细胞描述：多，小而圆，中央着色较浅，无核。禽类称为凝血细胞，一般为卵圆形，有细胞核，比哺乳动物的大得多，数量少。血液涂片的制备和细胞染色１、涂片的制作

选取一张边缘平滑的载玻片作为推片(最好此载玻片稍窄或磨去两角),用左手的拇指与中指夹持一张载玻片，取被检血液一滴(最好是未加抗凝剂的新鲜血)置载玻片的一端，然后右手持推片倾斜30-40°角，由血滴的前方向后接触血滴，待血液扩散成线状后，立即以均等的速度轻而平稳地向前推进，即形成血膜。涂片时，血滴越大，角度越大，推片速度越快，则血膜越厚，反之则血膜越薄。白细胞分类计数的血片宜稍厚，进行红细胞形态及血原虫检查的血片宜稍薄。一张良好的血片，要求厚薄适宜，血液分布均匀，对光观察呈霓虹色，边缘整齐，能明显分出头，体，尾三部分，两侧留有空隙(以写明畜别，编号、日期)。血膜分布不匀，主要是由于推片不齐，用力不匀，玻片不洁所致。推好的血片可在空气中挥动，使其迅速干燥，以防细胞皱缩变形，并尽快固定染色。为了观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须进行染色。原理染色是染料透入被染物并留存其内部的一种过程，此过程既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对染料的亲和力也不一样。例如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染成红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染成紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态，与伊红和美蓝均可结合，染成紫红色，称为中性物质。２、细胞染色瑞氏染色法姬姆萨氏染色法瑞－姬氏复合染色法（１）瑞氏染色法●瑞氏染料：酸性染料伊红、碱性染料亚甲蓝●瑞氏染液：瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml。将染色粉置于研钵中，加少量甲醇研磨，使其溶解，将已溶解的染液倒入洁净的棕色玻璃瓶中，剩下未溶解的染料再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直至全部染料溶解并用完甲醇为止。在室温中保存7日，每日震摇一次，过滤后即可应用。新配的染液偏碱性，放置后可呈酸性。保存时间愈久，染色能力愈佳。●涂片——滴加染色液——置１～２min——加磷酸盐缓冲液混合均匀——３～5min——水冲洗——自然干燥——镜检(所得血片呈樱红色者为佳)（２）姬姆萨氏染色法●姬姆萨氏染料：酸性染料伊红、碱性染料天青●姬姆萨氏染液：姬姆萨氏染粉0.5g，中性甘油33ml，中性甲醇33ml。将染色粉置于研钵中，加少量甘油，充分研磨；加入所余甘油，在50～60℃水溶液中保温1～2h，并用玻棒搅拌，使染粉溶解；最后加入甲醇，混