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文档简介

经典柱色谱技术

——凝胶柱色谱操作技术江苏农牧科技职业学院动物药学院仪器分析技术凝胶柱色谱操作技术主要包括五个步骤3、加样2、装柱1、溶胀4、洗脱5、再生仪器分析技术凝胶是干燥的颗粒，使用前需要在洗脱液中充分溶胀一至数天，溶胀一定要完全，否则会导致色谱柱的不均匀。

如在沸水中将湿凝胶逐渐升温到近沸，则溶胀时间可以缩短1-2小时，同时还可以杀死凝胶中产生的细菌、脱掉凝胶中的气泡。1、溶胀凝胶溶胀仪器分析技术2、装柱湿法装柱：1）凝胶装柱前，去除凝胶中单体、粉末、杂质，并排除其中的气泡；2）将空柱垂直固定，加入少许流动相排除柱底起泡，并加约1/4柱高度的流动相；3）柱顶部链接一个漏斗，在搅拌下缓慢均匀连续地加入凝胶悬浮液，同时打开柱的出口，维持适当流速，使凝胶颗粒水平沉积到所需高度；4）拆除漏斗，用滤纸片盖住凝胶床表面，再用大量洗脱剂将凝胶床洗涤一段时间。仪器分析技术用流动相平横处理；样品过滤或离心；打开色谱柱活塞，让流动相与凝胶床刚好平齐，关闭出口；将样品沿管壁轻轻加入到色谱柱中，打开流出口，使样品渗入到凝胶床；当样品液面恰与凝胶床表面齐平，再次加入少量的洗脱剂冲洗管壁，使样品全部渗入凝胶床。3、加样仪器分析技术流动相一般采用水或缓冲液，少数用水与一些有机溶剂的混合液。可设置好流速，定量分布收集洗脱液。4、洗脱仪器分析技术用恰当的方法除去凝胶中的污染物，使其恢复其原来的性质。交联葡萄糖凝胶温热的0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠的混合液浸泡，用水冲洗到中性聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶

盐溶液浸泡

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