实验一安全与仪器使用

实验一、分子生物学实验安全及实验常用仪器设备2016-5分子生物学实验1一、分子生物学实验安全注意事项1.易燃易爆、有毒的化学试剂有毒的化学试剂：较小剂量疾病/死亡通过皮肤、呼吸道：丙烯酰胺、过硫酸铵、甲醛、氯仿、十二烷基磺酸钠（SDS）、四甲基二乙胺（TEMED）、冰醋酸、异戊醇、异丁醇、正丁醇致癌物或诱变剂：溴化乙锭（EB）、焦碳酸二乙酯（DEPC）易燃易爆化学试剂：苦味酸、酒精腐蚀性化学试剂：酸和碱、苯酚防护先行！22.放射性试剂：如32P或其它放射性物质，在实验中要确实保证遵守使用这类物质的所有守则；对放射性废弃物要小心。3.生物学管制试剂：物理防护主要是：有技术熟练的工作人员，具有正确的物理防护设备，如高压灭菌锅及安全操作箱等。生物防护主要包括选择非病原的生物体作外源DNA的克隆工具等。4.设备方面的危险：实验室内所有设备都有潜在危险，操作方法不正确，就会出现意外，所以实验室中的所有仪器的使用都应在老师的指导下进行，或者阅读本仪器的使用说明书后，方可使用。例如，紫外线。3化学试剂的安全使用

提取组织和细胞RNA的一种重要试剂，在提取RNA时一定要在通风橱进行。如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，废液埋入地下。Trizol

RNA酶的强抑制剂，一种潜在的致癌物质。操作时戴口罩，在通风橱中进行。沾到手上立即冲洗，废液通过废液道排泄。DEPC(二乙基焦碳酸酯)4

常用于DNA和RNA提取，对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有强烈的刺激作用和腐蚀性，易损害肝和肾。操作时戴手套在通风橱里进行，废液收集后埋入地下。CHCl3（Chloroform，氯仿）Acrylamide（丙烯酰胺）

蛋白质分离技术中作电泳支持物，具神经毒性，聚合后毒性消失。操作时戴手套在通风橱内进行，聚合后的聚丙烯酰胺凝胶没有毒性，可随普通垃圾一起扔掉，千万不要倒入下水道。化学试剂的安全使用5

有毒，易损害眼睛。质粒提取时作裂解液破坏细胞膜和Southern杂交时的洗膜液中的去垢剂。戴合适的手套和安全护目镜，不要吸入其粉末。十二烷基硫酸钠(SDS)

强神经毒性，防止误吸，操作时快速，存放时密封。

四甲基二乙胺（TEMED）化学试剂的安全使用6紫外线辐射的危害和防护

在分子实验室里常用的紫外光源包括手提式紫外灯和紫外透射仪、凝胶成像系统。只能通过安全玻璃片才能观察。在紫外光下操作时要戴合适的预防性手套，带护目镜并遮蔽暴露的皮肤。使用新的无毒DNA染料:SYBRGreen,SYBRGold等,避免了EthidiumBromide(EB)染料对人体的伤害。7

紫外照射消毒后由于空气中臭氧富集，不宜立即开始工作，应在停止紫外照射30min后开始工作。

超净工作台中进行紫外照射消毒后，也应用强风进行吹扫后再进行工作，以免臭氧危害身体健康。超净工作台生物安全柜8二、做好分子学实验应注意的有关问题1．克服畏惧心理2、克服轻视心理3．克服用微量试剂不习惯

4．防止粗心大意

5．防止缺乏整体实验的概念

6．侥幸心理

7、试剂问题

：严格按各种试剂的特定要求来操作8、背景知识问题

9三、分子生物学实验室常用仪器设备1．灭菌设备2．高速冷冻离心机3．冷冻设备4．光学测量5．天平7．凝胶电泳装置8．恒温箱9．温控摇床10．磁力搅拌器11．微波炉12．PH计（酸度计）13．0.1μL-5000μL范围的微量移液器14．PCR仪（热循环仪）15．紫外观测仪16．旋涡混合器（Vortex）17．水浴装置18．纯水仪/双蒸水仪19．玻璃器皿及塑料制品20．相应的分子生物学试剂及试剂盒1011四、一些常用精密仪器的使用方法1．微量移液器的使用方法1-1微量移液器的使用调量程1-3大龙移液器的使用_正向移液法_1-4大龙移液器的使用反向移液法：黏稠液体的移取1-2大龙移液器的使用_装配管嘴12微量移液器使用常见的错误操作1)吸液时，移液器本身倾斜，导致移液不准确(应该垂直吸液，慢吸慢放)。2)装配吸头时，用力过猛，导致吸头难以脱卸(无需用力过猛，选择与移液器匹配的吸头)。3)平放带有残余液体吸头的移液器(应将移液器挂在移液器架上)。吸嘴内有未排出液体时将移液器平放于桌面，或进行走动，吸嘴内液体会回流入套筒内，大量程移液器回流的液体会腐蚀活塞组件。正确方法：在进行实验前，应将实验用品放在触手可及的地方，避免在进行实验时走动，养成即吸即排，即排即卸的习惯，使用后的移液器放回至移液器架。4)用大量程的移液器移取小体积样品(应该选择合适量程范围的移液器)。5)直接按到第二档吸液(应该按照上述标准方法操作，反向移液法外)。6)使用丙酮或强腐蚀性的液体清洗移液器。吸取强挥发性液体后应及时拆开移液器用医用酒精进行清洗，避免活塞组件受到腐蚀。7）吸液体或排液速度过快，吸液速度过快会影响准确度，特殊液体会产生气泡。对于大量程移液器，过快的吸液速度会造成液体倒吸腐蚀活塞组件。正确方法：平稳缓慢的进行移液工作。132．高速冷冻离心机的使用方法以eppendorf5430R高速冷冻离心机为例实物讲解eppendorf5920型高速冷冻离心机的使用143．超纯水仪的使用方法以MILLIPOREDirect-Q3型超纯水仪为例实物讲解15五、学生练习1.微量移液器、旋涡混合器和小型离心机的使用取196ulddH2O于1.5mL离心管中（请反复练习）；取1ul6×上样缓冲液于4只0.2mlPCR管中；将上述1.5ml离心管中的196ulddH2O平均加样到0.2mlPCR管中；将上述4只PCR管在旋涡混合器上混合；在小型离心机上离心（低速，5-10s），使溶液均处于PCR管底部。选择合适量程！162.电泳上样练习材料：琼脂糖凝胶吸取6×上样缓冲液2ul+