检验中级考试小结

临床检验根底血液检验真空采血管灰色--氟化钠、草酸钾抗凝测定血糖金黄色-别离胶血涂片制备技术：血滴越大、角度越大、推片速度越快那么血膜越厚。进行红细胞渗透脆性试验时使用的抗凝剂为肝素凝血工程使用109mmol/l枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例1:9。血沉用枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例1:4。血细胞手工检验〔1〕血细胞形态嗜多色红细胞属于未完全成熟的红细胞，由于胞质中含有RNA而被染成灰色、蓝色，嗜多色性红细胞增多提示骨髓造红细胞功能活泼，常见于溶血性贫血。H-J小体位于成熟或幼红细胞胞质中，是保内残留的RNA，常见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血及脾切除术后。点彩红细胞见于铅中毒、溶血性贫血患者等。卡波环出现原因是核膜剩余物或胞质脂蛋白变性。Russell小体是浆细胞胞质内的一种数目不等、大小不一、染成肉红色的球形小体，是浆细胞内质网分泌免疫球蛋白受阻或黏蛋白变性所致，常见于多发性骨髓瘤、伤寒、疟疾。粒细胞自晚幼粒开始失去分裂能力，逐渐发育成熟。涂片法白细胞分类时，涂片尾部幼稚细胞多中性粒细胞增多并核左移称再生性左移，常见于各种病原体的感染，特别是急性化脓性细菌感染。核左移伴中性粒细胞减少或者正常称为退行性核左移，多见于机体抵抗力低下的严重感染，常见于伤寒感染。杆状粒细胞》5%称轻度左移》10%中度》25%并出现幼稚粒细胞时成为重度核左移〔2〕血细胞计数血细胞计数板手工计数白细胞四角大方格N/4*10*106*稀释倍数红细胞、血小板中央大方格中的四角+中央中方格N*5*10*106*稀释倍数嗜酸性粒细胞、精子10个大方格N*106*稀释倍数*计数域的误差属于固有误差，无法防止，不属于技术性误差。Miller窥盘计数Ret大、小方格面积比为9:1小方格计数红细胞数，大方格计数网织红细胞数。少儿在6-9天和4-5岁时，外周血淋巴细胞与中性粒细胞根本相等约为50%。正常人外周血涂片中，中性杆状粒细胞比例为1-5%。HCT测定WHO推荐的首选常规方法为微量离心管，经典方法--温氏法。温氏法血细胞比容测定，EDTA-K2抗凝血参加温氏管中离心后血液分为5层，自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞层和有核红细胞层、复原红细胞层、帯氧红细胞层。读数时读取复原红细胞层柱高即为血细胞比容。典型MCHC增高仅见于球形红细胞增多症，但罕见超过380g/l。巨幼细胞性贫血直方图波峰右移，峰底增宽，明显的大细胞不均一性。缺铁性贫血时RDW最早出现变化。嗜酸性粒细胞稀释液中乙醇、丙酮、乙二醇等作用为嗜酸性粒细胞保护剂，伊红、固绿等为嗜酸性粒细胞着色剂，甘油可以防止乙醇等液体挥发，碳酸钾、草酸铵可破坏其他细胞和增强嗜酸性粒细胞着色。嗜酸性粒细胞计数结果可应用于观察急性传染病的预后、判断肾上腺皮质功能、观察大手术患者和烧伤患者的预后。猩红热急性期，可能乙型溶血性链球菌产生酶激活补体，引起嗜酸性粒细胞增多。血沉减慢见于红细胞数量明显增多以及纤维蛋白原含量下降。红细胞渗透脆性试验多用于红细胞膜缺陷筛查，对遗传性球形红细胞增多症具有重要诊断价值。Ham试验对诊断PNH有重要价值。Coombs试验对免疫性溶血性贫血有重要诊断价值。血红蛋白电泳对异常血红蛋白病有重要诊断价值。纤维蛋白原、球蛋白、CM、胆固醇等升高均加快血沉；清蛋白、卵磷脂增加能减缓红细胞沉降率。正常人血浆比密约为1.025-1.030。浓缩血小板在20-24度温度下，保存期为7天。再生障碍性贫血中MPV降低2.血细胞分析仪国际血液学标准化委员会公布的血细胞分析仪的性能评价指标：可比性、准确性、总重复性、精密度、线性范围。血细胞计数参考方法：红细胞、白细胞计数参考方法为单通道电阻抗法；血小板为流式细胞仪。网织红细胞生成指数〔RPI〕=网织红细胞计数〔%〕*〔患者HCT/正常人HCT〕*〔1/网织红细胞成熟天数〕，反映的是网织红细胞生成速度是正常人的多少倍。使用血细胞分析仪计数网织红细胞时，血小板聚集可引起假性升高。Hb测定：1.ICSH推荐参考方法--氰化高铁血红蛋白比色法：高铁氰化钾将各种血红蛋白转化为高铁血红蛋白〔SHb除外，无法转化SHb〕，而后与CN-结合成HiCN，最大吸收峰540nm，转化液推荐使用文-齐液。试剂保存不得使用塑料瓶，可冷藏，不可冰冻，因前两者均会造成CN-丧失造成HB转化不完全，测定结果偏低。缺点：试剂有毒；SHb无法转化为氰化高铁血红蛋白。SDS-Hb法无公害血细胞分析仪采用多角度偏振光散射法〔MAPSS〕测定时：1、0度前角光散射可粗略测定细胞大小；2、10度狭角光散射可测定细胞内部结构相对特征3、90度垂直光散射测定细胞内部颗粒和核分叶情况；4、90度垂直去偏振散射光区分中粒与嗜酸粒。激光与细胞化学法即应用激光散射与细胞化学法进行白细胞分类过氧化物酶活性：嗜酸性粒细胞》中性粒细胞》单核》淋巴、嗜碱性粒细胞=0激光散射法血小板计数时，高角度〔5-10〕主要检测细胞折射指数；低角度〔2-3〕主要测量细胞大小。电阻抗法血小板计数时采用浮动界标技术。电阻抗、射频及特殊染色法进行血细胞分类时，检测幼稚细胞参加硫化氨基酸，幼稚细胞结合更多硫化氨基酸，因此幼稚细胞对溶血剂有抵抗作用，成熟细胞随后被破坏。3.血型检验卫生部要求：抗A、抗B效价》128，亲和力《15s，凝集素效价《1:4，必须具有检出A2、A2B的能力。Rh血型阴性确证应做弱D鉴定，弱D抗原较弱一般不与盐水中抗D试剂反响凝聚，必须采用酶法、抗球蛋白法、凝集胺试验等检测。低离子凝聚胺技术对kell血型系统中的抗K不敏感。简易致敏红细胞血小板血清试验是检测血小板血型较为理想的方法。ABO血型4种表现型、6种基因型ABO基因位于9号染色体短臂ABO基因中B编码的糖基转移酶是D-半乳糖转移酶，A编码的是N-乙酰-D-半乳糖转移酶。血型物质不存在于脑脊液中RH抗原目前仅发现在红细胞上存在，血小板外表存在血小板特异抗原以及ABO、HLA等相关抗原。患者红细胞直接抗人球蛋白试验阳性可以导致Rh血型鉴定出现假阳性。孟买血型基因型为hh，但h基因为无效基因，其红细胞外表无A、B、H抗原，血清中含有抗A、抗B、抗H抗体。稀有血型血液保存方式一般选用冷冻红细胞。引起非溶血性发热反响最常见的原因是抗白细胞抗原的抗体，因此可用少白红细胞预防非溶血性发热反响。为预防TA-GVHD，临床选用辐照红细胞，破坏免疫活性淋巴细胞。选用洗涤红细胞来预防因输血发生的严重过敏反响。输注全血补充血小板时12h内的全血视为新鲜血；补充粒细胞时8h内全血视为新鲜血；补充凝血因子时24h内全血视为新鲜血。用酶处理过的红细胞进行血型鉴定时，MN抗原会被破坏。尿液检验：尿液理化检验甲醛对尿中细胞、管型有固定作用，用于Addis计数防腐甲苯可在尿液外表形成一层薄膜，常用于尿糖、尿肌酐、蛋白等化学成分测定防腐；浓盐酸用于17羟、17酮类固醇激素测定的防腐；冰乙酸用于24H尿醛固酮测定的防腐。痰液观察分层情况，可用少量苯酚防腐。正常人尿液中GLU含量为《5.0mmol/24h尿液T-H蛋白紫外光谱分析出现最大吸收峰的波长为277nm尿本周蛋白检测：筛选方法-热沉淀-溶解法、对甲苯磺酸法确诊方法SDS、免疫电泳、免疫固定电泳本周蛋白的本质是免疫球蛋白轻链。肾小管重吸收功能受损多为小分子蛋白尿，肾病综合征多为选择性蛋白尿。重金属中毒多引起肾间质性肾炎，主要表现为肾小管损伤，重吸收与浓缩功能减退。Mb蛋白尿的特点Mb能溶于80%饱和硫酸铵溶液正常人尿胆红素阴性，尿胆原阴性或弱阳性。苯丙酮酸尿症患者新鲜尿液具有“老鼠屎”样臭味。尿胆原测定常用Ehrlich法，苯丙酮酸尿症的筛查试验为三氯化铁定性法，酪氨酸尿的过筛试验为亚硝基萘酚定性法。加热乙酸法测定本周蛋白尿PH要求为4.5-5.5。尿沉渣检验肾移植后发生排斥反响尿液细胞学检查改变：核退变，红细胞、白细胞、上皮细胞形成混合细胞团块，淋巴细胞，肾小管细胞，管型和背景坏死物。其中两项恒定指征为淋巴细胞和肾小管细胞。人巨细胞病毒感染，尿液中含有巨细胞病毒包涵体的细胞是上皮细胞。尿管型显微镜检查应在低倍镜下观察20个视野，正常人尿液检查RBC0-3/HP，WBC0-5/HP。Addis1h尿白细胞计数，正常女性白细胞《14万/小时。正常人尿渗量为600-1000mOsm/(KgH2O)尿液分析仪检验干化学法中，高浓度尿蛋白可使尿比重测定偏高；Vc可尿糖测定假阴性；青霉素药物偏酸可使尿蛋白测定假阴性；青霉素类药物可使尿白细胞测定减少或假阴性；Vc可使尿隐血试验假阴性。干化学法测定尿胆原时，胆色素原、胆红素、吲哚、吩噻嗪类都可产生干扰；大多数尿液试剂带没有测定尿胆原阴性，因此干化学不能用于梗阻性黄疸尿胆原测定。干化学法测定尿胆红素时，维生素C、亚硝酸盐、氯丙嗪、盐酸苯偶氮吡啶都可产生干扰。CCCLS规定：干化学法确实证实验尿蛋白确证实验磺基水杨酸法；尿葡萄糖确证实验葡萄糖氧化酶定量法；尿胆红素确证实验Harrison法；尿白细胞和红细胞镜检；尿比重折射仪法三、排泄物与分泌物检验1.粪便检验：检查钩虫卵用饱和盐水漂浮法，蛲虫卵用透明膜试纸法，蛔虫卵用离心沉淀集卵法，血吸虫卵用毛蚴孵化法；阿米巴滋养体直接镜检大便镜检到巨噬细胞常见于急性菌痢。消化道出血》50ml开始出现黑便，粪便隐血阳性消化道出血5ml左右。消化道寄生虫虫卵中体积最小的是华支睾吸虫卵。艾滋病相关性腹泻，由寄生虫引起腹泻最常见的是隐孢子虫。2..阴道分泌物检验：BV的常见病原体是阴道加德纳菌，患者白带性状多为奶油状，含大量粘液与中性粒细胞。诊断加德纳菌性阴道炎的指标是：1.线索细胞；2.分泌物PH》4.5；3.胺试验阳性；4.阴道分泌物稀薄均匀。四、体腔液检验1.脑脊液检验：脑脊液蛋白质定量比色法优于比浊法，正常人脑脊液中蛋白质含量不到血浆蛋白的1%；Froin综合征是一种梗阻性脑病；潘氏实验灵敏度高，局部正常脑脊液可以呈极弱阳性。脑脊液蛋白电泳有前清蛋白带，血清蛋白电泳一般无前清蛋白带。化脓性脑膜炎LDH明显增高，经治疗，LDH无明显减低甚至进一步增高，提示预后不好。结核性脑膜炎ADA增高明显，多发性硬化症脑脊液中髓鞘碱性蛋白MBP含量上升，MBP可以作为多发性硬化症的辅助诊断指标。正常人脑脊液无红细胞，白细胞(0-10)*106主要是淋巴与单核细胞。化脓性脑膜炎，脑脊液明显浑浊，静置后可形成凝块或沉淀；结核性脑膜炎，脑脊液毛玻璃样轻度浑浊，静置后外表可有网膜形成；蛛网膜下腔梗阻，脑脊液可呈黄色胶冻样。脑脊液同时出现胶样凝固、黄变症和蛋白质-细胞别离，称为Froin-Nonne综合征，是蛛网膜下腔梗阻的特点。正常人脑脊液压力为80-180mmH2O，健康人腰穿所得脑脊液比密为1.006-1.008，正常人脑脊液PH为7.31-7.34。2.浆膜腔积液检验：引起胸腔积液最常见的恶性肿瘤是肺癌，以周围型肺癌常见。恶性间皮瘤染色质分布于核的一侧，病理性核分裂象多见，多核瘤细胞多见。小细胞未分化癌特征性表现-癌细胞体积小、胞质少、裸核样，核染色深呈墨水滴样。心包积液草黄色常见于尿毒症引起的心包积液，黄色多见于黄疸。胸腔积液中最常见的肺癌细胞类型为腺癌女性腹水常见类型为浆液性乳头状囊腺癌3.关节积液检验：类风湿患者关节积液中可发现胆固醇结晶RA主要累及小关节、肿大僵硬；关节腔积液白细胞《5000*106葡萄糖不明显降低。化脓性关节炎时WBC》6000*106葡萄糖明显降低。正常人关节积液WBC〔0-50〕*106/L。4.羊水检验：粘多糖沉积病产前诊断简易指标是羊水细胞内甲苯胺蓝定性试验和糖醛酸半定量测定，胰腺纤维囊性病产前诊断最正确指标是羊水r-谷氨酰转移酶测定五、脱落细胞学检验：绝经期妇女阴道涂片中可见到阴道上皮高度萎缩，细胞出现退化现象，核染色质疏松或消失，称为“早熟角化细胞”。挖空细胞特指HPV感染出现的核周空穴细胞；瓢形核是产后性外底层细胞的特征；核内包涵体多见于HSV病毒感染，印戒细胞是胃腺癌的一种细胞。宫颈癌以鳞状细胞癌为主，脱落细胞中找到挖空细胞应做HPV分型或活检。宫颈鳞癌以非角质化型常见。支气管肺泡灌洗液，结节病时以T淋巴细胞为主；特发性肺间质纤维化以中性粒细胞增多为主，伴嗜酸粒增多；卡氏肺孢子虫感染时，以淋巴细胞增多为主；急性呼吸窘迫综合征以中性粒细胞为主。判断细胞良性或恶性，主要依靠细胞核的改变判断细胞分化倾向主要依靠细胞质的改变临床免疫学检验免疫分子及其检测抗原抗体抗原制备：颗粒性抗原可溶性抗原：组织和细胞破碎，抗原粗提，而后是抗抗原抗体反响与制备原提纯〔超速离心、选择性沉淀、层析、电泳法〕免疫球蛋白片段与人工抗原制备抗体制备：多抗〔纯化--SPA与IgG结合亲和层析、鉴定〕单抗制备基因工程抗体木瓜蛋白酶可以将IgG裂解成一个Fc和两个Fab片段胃蛋白酶将IgG裂解成F(ab’)2与小肽片段。制备单抗隆抗体时常用的细胞融合剂是PEG1000-2000。基因工程抗体较于杂交瘤单抗隆抗体最重要特点：非异源性免疫球蛋白分型依据是CL抗原性不同进行分类PEG沉淀法或比浊法常用于检测CIC，简单易行，但特异性差；常用PEG最终浓度为3-4%，PEG沉淀试验不能反映小分子循环免疫复合物，2%只能沉淀大分子，》5%选择性沉淀CIC的能力消失。PEG沉淀法中PH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，所用PEG浓度越小，别离血清免疫复合物一般采用PEG6000。补体参与检测CIC方法包括C1q固相法、抗C3-CIC-ELISA法，由于IgA不能结合补体，所以补体参与检测CIC法不能检测IgA抗体。离子种类对免疫复合物形成速度的影响：H2P04->SO42->NO3->CLO4->SCN-单克隆抗体的特异性取决于克隆细胞的筛选免疫监视功能肿瘤发生免疫自稳功能--自身免疫病抗原抗体反响类型：凝集与沉淀反响〔1〕凝集反响RF采用散射比浊法检测的主要是IgM胶乳凝集试验所用载体多为0.8um聚苯乙烯胶乳，〔2〕沉淀反响免疫散射比浊中，颗粒直径远小于入射波长时，那么散射光分布比拟均匀，称为Ray-leigh散射。假设颗粒直径接近或大于入射波长时，那么散射光分布不均匀，称为Mie散射。介于两者之间，那么称为Rayleigh-Mie散射。速率散射比浊中，参加PEG的目的是加速抗原抗体复合物的形成，缩短反响时间，常用PEG8000。速率散射比浊免疫分析是抗原抗体结合反响的动态测定。速率散射比浊法，为防止出现后带现象，常使抗体过量；此外还参加了抗原过量检测系统，反响后再参加适量抗原，假设出现第二峰信号，那么提示第一峰信号均由待测抗原产生且结果可靠；假设未出现第二峰信号提示待测抗原过量。火箭免疫电泳作为抗原定量只能测定ug/ml单向扩散试验假设应用多克隆抗体测量M蛋白时，测定会偏高？双向扩散试验试管法先后参加试管的是：含抗体的琼脂、普通琼脂、含抗原的琼脂。目前临床检验中不推荐使用对流免疫电泳与火箭免疫电泳，共同原因是电泳载体的电渗作用？火箭免疫电泳结合放射自显影技术灵敏度可提升1000倍CIEPcounterimmunnoelectrophoresisRIErocketimmunoelectrophoresisIEPimmunoelectrophoresisIFEimmunofixationelectrophoresis对流免疫电泳中IgG抗体四个亚型表现不同，IgG1和IgG2由于电渗作用向阴极移动，而IgG3和IgG4向阳极移动。化学交联法常用炭化二亚胺将胶乳上的羟基与被交联物上的氨基缩合在一起包被过程中最常用的缓冲液为PH9.6PBS标记免疫技术〔1〕荧光免疫技术FITC激发光490-495nm发射光520-530nm黄绿色荧光RB200570nm600nm橘红色荧光TRITC550nm620nm橙红色荧光，适合与FITC配对双标记PE490nm595nm红色，多与FITC用于流式细胞仪双标荧光抗体效价常用倍比稀释，非特异性染色最弱的稀释度作为其效价；假设采用琼脂双扩散法测定，荧光抗体效价需大于1:16.荧光抗体染色技术中直接法较其他方法特异性高、非特异性染色少。FITC在酸性溶液中荧光强度显著降低荧光素标记抗体的鉴定：抗体效价〔抗体活性〕、荧光素和蛋白质结合比〔F/P〕。F/P越高，说明抗体上结合的荧光素越多，反之越少。一般用于固定标本的抗体F/P=1.5左右，用于活细胞染色F/P=2.4为宜。荧光偏振免疫测定主要用于测定小分子抗原，是临床药物浓度检测的首选方法；缺点是不适用于大分子物质。〔2〕放射免疫技术RIA为标记抗原竞争法测定抗原；IRMA分为直接和双抗体夹心法均为标记抗体测定抗原。125I衰变产生r射线，3H衰变产生的是β射线比放射性是指单位质量标记物的放射强度，常用Bq/ug，Ci/g或Ci/mol表示，一般标记抗原的比放射性越高，试验灵敏度高。放射化学纯度是指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率，一般要求》95%放免技术中滴度常采用一株抗血清做系列稀释后再与标记抗原反响。酶免疫技术〔4〕化学发光免疫分析技术发光免疫分析根据化学反响不同可以分为三类：1、直接参与发光反响，如吖啶酯类标记物以发光酶标记，如AP；3、以能量传递参与氧化复原反响的非酶标记物，如三联吡啶钌标记物。〔5〕胶体金免疫技术〔6〕免疫组化免疫复合物与游离标记物别离的方法：活性炭吸附法主要用于测定小分子抗原或药物。补体及检测CRP、甘露糖结合凝集素〔MBL〕与IgM、IgG1/2/3免疫复合物可以激活补体经典途径，而凝集的Ig、病原微生物〔内毒素等〕可以激活补体替代途径。补体结合试验含三个系统：反响系统、补体系统、指示系统。有五种成分参与：抗体、待测抗原、绵羊红细胞、溶血素、补体。假设标本中无待测抗原，那么抗体与溶血素-绵阳红细胞结合，激活补体，产生溶血作用，假设标本中含待测抗原，那么抗体与抗原结合，不产生溶血现象。补体成分测定：CH50测定经典途径总补体活性，免疫溶血法测定的是单个补体的活性；补体结合试验是用于检测某种抗原或者抗体，火箭免疫电泳可用于测定单个补体的含量。血清补体C3含量最高，C2含量最低抗体与相应抗原结合后，CH2补体结合位点暴露出来才能激活补体。补体激活后C2b裂解为小片段。补体参与的溶血试验应使用2个单位的溶血素，CH50法测定的是总补体活性，单位U/ml经典途径激活补体的IC，可以用C1q结合试验来测定。细胞因子及其受体检测IL-4能够促进免疫球蛋白类别转换，IL-2能促进B细胞增生、分泌抗体，同时IL-2可以促进T细胞增殖与活化。IFN-r是由受抗原刺激后活化的T细胞产生〔Th1细胞产生〕，抑制Th0向Th2分化。IL-5不仅能刺激嗜酸性粒细胞增殖和分化，而且对嗜酸性粒细胞有趋化作用IL-1、TNF-ɑ可阻止或减轻革兰阴性菌感染所致休克的发生。IL-6常用于刺激B细胞杂交瘤细胞增殖。IL-1、IL-6刺激肝脏分泌急性期蛋白，TNF-ɑ刺激产生IL-1、IL-6。IL-18具有趋化活性细胞因子多数是低分子量蛋白质、多以单体形式存在，以非特异性方式发挥作用，不受MHC限制。粘附因子与白细胞分化抗原检测免疫细胞别离及检测〔一〕免疫细胞别离、检测淋巴细胞别离外周单个核细胞别离聚蔗糖-泛影葡胺分层液法最为常用Ficoll别离液法是一种单次差速密度梯度离心的别离方法，Percoll别离液法是一种连续密度梯度离心别离法。淋巴细胞与单核细胞别离经别离后的PBMC中主要是单核细胞与淋巴细胞，少量血小板与RBC〔RBC可用NH4Cl或低渗法去除，血小板可屡次离心去除〕单核细胞去除可以利用单核细胞粘附玻璃、塑料和葡聚糖的特性以及吞噬铁粉的能力去除。对玻璃和塑料制品的粘附性：巨噬细胞》树突状细胞》B细胞》T=RBC，常利用单核细胞这个特性将其别离。另外也可以用Percoll连续密度梯度离心法，四层：死细胞层〔死细胞、血小板〕、单核细胞层、淋巴细胞层、红细胞和粒细胞层。淋巴细胞亚群的别离=1\*GB3①E花环别离法成熟T细胞都表达CD2，即E受体〔绵羊红细胞受体〕=2\*GB3②尼龙绵柱别离法利用B细胞易粘附于尼龙棉外表=3\*GB3③补体细胞毒法剔除表达特定抗原的细胞，借助补体介导的细胞毒作用=4\*GB3④亲和板别离利用特定抗原抗体结合=5\*GB3⑤免疫磁珠=6\*GB3⑥流式细胞仪分选淋巴细胞数量检测：正常人外周血B细胞占淋巴细胞的8%-15%，T细胞占淋巴细胞的60%-80%，NK细胞占5%-8%。外表CD抗原：所有T细胞外表均表达CD3、TCR；成熟T细胞均表达CD2；局部表达CD4/CD8。微量细胞毒试验利用抗原抗体反响激活补体依赖的细胞毒作用，以此作为显示系统花环试验B细胞数量检测：外表标志物所有B细胞均表达SmIgM，成熟B表达SmIgM、SmIgD、CD19、CD20，B1细胞CD5+、CD23-；B2那么CD5-/CD23+B细胞外表具有IgGFc受体及补体受体，用相应抗体致敏的红细胞〔EA〕能与B细胞结合成EA花环，或EA与补体结合后，借助补体受体与B细胞结合成EAC花环。B细胞外表EB病毒受体--C3d受体。Raji细胞是由B细胞建株而来，外表有大量C3b、C1q和C3d受体，没有SmIg，利用这些受体与结合补体的循环免疫复合物结合，再参加标记的抗人球蛋白，可检测循环免疫复合物。CD19主要表达于外周血成熟B细胞，CD5用于区分B1/B2细胞。外周血中，未成熟B细胞表达mIgM，成熟B表达SmIgM和SmIgD，根据是否表达CD5可以将B细胞分为：B1和B2细胞。B1细胞表达CD5，不表达CD23；B2不表达CD5，表达CD23；B1、B2细胞都表达CD19、CD20、CD22。B1细胞与机体的免疫调节、自身免疫病以及B细胞源性肿瘤有关。B2细胞是执行体液免疫的主要细胞，是外周血主要的B细胞群。CD2表达在全部T细胞和局部NK细胞，CD3表达于全部T细胞，是T细胞的共同抗原；CD4、CD8只表达于局部T细胞。CD80主要表达在活化的B淋巴细胞外表，能与T细胞外表的CD28分子相互作用，刺激T细胞活化。淋巴细胞功能检测：T细胞增生试验，也称淋巴细胞转化试验体外刺激T细胞增生的刺激物可分为非特异性〔PHA、刀豆素、美洲商陆〕和特异性〔PPD和白假丝酵母菌、白喉类毒素等〕，PHA仅能刺激T细胞增殖，LPS仅能刺激B细胞增殖。刀豆蛋白A、PHA、美洲商陆能刺激T细胞增殖分化，细菌脂多糖只能刺激B细胞增殖活化，PPD主要特异性刺激T细胞，也能刺激B细胞增殖。T细胞介导细胞毒试验主要用于检测Tc细胞T细胞分泌功能测定细胞因子测定Th1细胞分泌IL-2、IFN-r、TNF-β，促进细胞免疫Th2细胞分泌IL-4、IL-10、IL-5、IL-13，促进体液免疫，抑制细胞免疫IL-4能够增强Th2细胞反响，促进IgE类别转换的一类细胞因子，支气管哮喘与过敏反响可见其上升。IL-4启动休止期B细胞进入DNA合成期。IL-6是支持浆细胞增殖分化的关键因子，骨髓瘤患者的骨髓间质细胞和浆细胞瘤本身可以分泌高水平的IL-6。体内试验OT试验、PHA试验等当特异性抗原记忆T细胞再次与过敏原接触时，可迅速增殖分化为CD4+Th1细胞〔TTDH细胞〕和CTL细胞。DiGeorge综合征发病机制先天性胸腺发育不良B细胞功能检测1、B细胞增生试验刺激物有LPS、SPA等2、酶联免疫斑点试验酶联免疫斑点试验是一种既能检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量的方法。原理是利用抗原包被固相载体，再参加抗体产生细胞，诱导抗体分泌，ELISA，测定出抗体分泌量，并且可以在光镜下观察抗体形成细胞。3、溶血空斑试验反向溶血空斑试验是一种体外检测人类Ig分泌细胞的方法，利用SPA-RBC与IgG结合。4、各种Ig量定量测定重要指标NK活性测定测定人NK细胞活性多以K562细胞株为靶细胞，测定小鼠NK细胞活性那么以YAC细胞株为靶细胞。吞噬细胞功能检测中粒细胞功能检测趋化功能：1、Boyden小室、皮窗试验Chediak-Higashi综合征时中性粒细胞趋化功能下降吞噬、杀菌能力与单核巨噬细胞比拟，中粒细胞的吞噬杀伤活性最强。中粒吞噬能力明显下降见于补体或抗体缺陷中粒细胞酶代谢能力降低慢性肉芽肿显微镜检查白假丝酵母菌吞噬率溶菌法硝基蓝四氮唑复原试验〔NBT〕〔活性与磷酸己糖旁路代谢活性相关，即与G6PD酶活性相关；慢性肉芽肿患者NBT阳性细胞降低〕巨噬细胞功能检测1、炭粒廓清试验2、斑蝥敷贴法测吞噬功能3、溶酶体酶测定4、细胞毒作用测定巨噬细胞具有直接吞噬和杀伤病原体和肿瘤细胞的能力，还具有抗原加工、提呈和免疫调节的作用，巨噬细胞直接参与II和IV型超敏反响，不直接参与I、III型超敏反响。巨噬细胞外表含清道夫受体、FcrR、TLR、补体受体。淋巴细胞转化试验是检测淋巴细胞免疫功能的经典试验，其中PHA属于非特异性刺激物。临床常见的B细胞功能缺陷是X连锁无丙种球蛋白血症。锡克试验是接种白喉类毒素，观察机体是否产生抗毒素反响；该实验用以评价体液免疫功能流式细胞术流式细胞仪测定细胞内细胞因子浓度要防止细胞因子向细胞外释放和漏出，所以活化时需要参加莫能菌素等阻止蛋白质运输到细胞膜。流式细胞仪中收获率与纯度之间有负向对应关系，鞘液的主要作用是包裹在样本流周围，使其处于喷嘴中心位置保证检测精确性，同时可防止样本细胞靠近喷孔壁堵塞喷孔。免疫器官〔略〕临床免疫疾病与检验1、超敏反响性疾病与免疫检验变应原在偏酸或偏碱环境可出现假阳性IgE与IgG4参与I型超敏反响I型超敏反响效应细胞是肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞。目前诊断I型超敏反响方法多用：皮内试验+特异性IgE测定，放射变应原吸附试验RAST用于检测特异性IgE，斑贴试验主要用于寻找接触性皮炎的过敏原。放射变应原吸附试验〔RAST〕是将纯化的变应原吸附于固相载体，参加待测血清，再用放射性核素标记的抗IgE抗体，定量检测特异性IgE水平。皮试时常设置阴性和阳性对照，变应原的稀释保存液或生理盐水用于作阴性对照。阳性对照用盐酸组胺。皮试假阳性见于：变应原变质或污染，变应原稀释液偏酸或偏碱，患者有皮肤划痕症。II型超敏反响〔ADCC效应〕IgG和IgM与NK、巨噬细胞外表FcrR结合，激活补体产生溶细胞复合体，损伤细胞。糖尿病患者反复注射胰岛素，体内产生了大量抗胰岛素抗体，再次注射胰岛素时，形成免疫复合物沉积于血管基底膜上，激活补体，血管通透性增加，局部出现红肿、出血，为人类局部过敏。使用化装品引起面部水肿、渗出、痒痛等，属于皮肤再次接触相同抗原发生的IV型变态反响，即接触性皮炎。接触性皮炎-IV型变态反响血清病-、SLE、RA、链球菌感染后肾小球肾炎等III型变态反响新生儿溶血-II型荨麻疹-I型自身免疫病与免疫检验ANA性质主要是IgG，无器官特异性和种属特异性，间接免疫荧光法为抗核抗体检测的最正确方法，免疫芯片法最敏感。高滴度抗RNP见于混合结缔组织病〔MCTD〕I型自身免疫性肝炎血清标记性抗体是高滴度的ASMA抗体。柯萨奇病毒能够感染机体并激发机体免疫系统攻击胰岛β细胞引起糖尿病。抗着丝点抗体对CREST综合征有很高的敏感性和特异性自身红细胞凝集试验所用标本为受检者的全血免疫增生病与检验IL-4可启动休止期B细胞进入DNA合成期，IL-5促进B细胞增生，IL-6促使B细胞分化为浆细胞，正常情况下IL-6可反响抑制IL-4。高水平IL-6是浆细胞瘤的原因之一。M区带的电泳位置可以大致反映出免疫球蛋白的类型，一般IgG型多位于α-慢r区，IgA型位于β-快r区，IgM型多位于β2或r区，IgD多位于β或r区。轻链病患者尿中可以检测到本周蛋白，由于其分子量小，容易迅速从肾脏排出，故血中反而呈阴性，检出率不如尿标本。免疫缺陷病与检验HIV除感染CD4+T细胞外，还能感染巨噬细胞、树突状细胞、B细胞和脑组织中的小胶质细胞。〔抗原递呈细胞〕HIV早中期B细胞克隆增多、Ig增多。ADA缺陷是种联合免疫缺陷病，见于婴儿。普通易变型免疫缺陷病属于B细胞免疫缺陷病。感染性疾病与检验肿瘤与免疫检验移植免疫检验同系移植是指移植物取自遗传基因与受者完全相同或根本相似的供者，如同卵双生者。HLAI类分子表达于各种有核细胞外表，以淋巴细胞、白细胞外表最高；血小板与网织红细胞也有表达，但成熟红细胞、神经细胞与滋养层细胞不表达。HLAII类抗原主要表达于B细胞、单核/巨噬细胞、树突状细胞及其他抗原递呈细胞外表。移植反响中受者T细胞对供者MHC分子直接识别称为直接途径，间接途径是受者T细胞识别经过受者APC加工处理的、来源于供者MHC分子肽。间接识别以CD4+T细胞为主。移植物保存或处理不当时，血液中存在微生物等可导致超急性排斥反响。HLA分型试验可用细胞分型、血清分型、基因分型和混合淋巴细胞反响，淋巴细胞转化试验用于检测T细胞功能。常用于检测HLA抗原的血清学试验是补体依赖的细胞毒试验--微量淋巴细胞毒试验。混合淋巴细胞反响，常用于检测HLA-D抗原的细胞反响。B受者细胞与经丝裂霉素C处理的A供体细胞之间的单相混合淋巴细胞反响可以预测相容性，结果可靠。移植前如果受者血清中存在抗供者淋巴细胞抗体，80%会发生超急性排斥反响，因此必须做HLA交叉配型，常用交叉配型试验是淋巴细胞交叉毒性试验。HLA-DR、DQ等II类抗原仅分布于B细胞或巨噬细胞等递呈细胞外表，其检测需排除HLAI类抗原干扰，多采用待测细胞为纯化的B细胞。PCR-SBT方法是一种通过对扩增后的HLA基因片段进行核酸序列测定。MHCII类基因决定免疫应答发生及强弱。MHC基因是复等位基因，均为共显性，决定MHC分子多态性。HLAII类分子的免疫球蛋白样区是ɑ1、β1区衰老免疫检验生殖免疫检验神经系统免疫检验临床生物化学检验三大营养物质、维生素、微量元素等生化检验蛋白质和含氮化合物生化检验清蛋白功能：1、维持血浆胶体渗透压2、运输营养物质与其他3、组织修补材料前清蛋白功能：1、运输甲状腺激素、视黄醇等2、组织修补材料醋酸膜纤维蛋白电泳时，ɑ1带含α1抗胰蛋白酶、α1酸性糖蛋白以及HDL、AFPα2带主要含铜蓝蛋白、结合珠蛋白以及α2巨球蛋白β带有LDL、转铁蛋白、C3/C4以及β2微球蛋白、纤维蛋白原r带主要是免疫球蛋白与CRP正常人血清蛋白电泳中白蛋白染色带最深，α1带最浅。凝胶过滤法利用蛋白质分子量大小不同进行别离琼脂糖凝胶电泳主要利用蛋白所带电荷以及分子量大小不同别离，SDS去除蛋白所带电荷大小的影响，主要根据分子量大小精密别离。稳态电泳，又称为置换电泳，是指分子颗粒的电泳迁移在一定时间后到达稳态，如等电聚焦电泳和等速电泳。电泳按原理可以分为：移动界面电泳、区带电泳和稳态电泳双缩脲测定蛋白质波长为546nm。改进酚试剂测定蛋白质反响后有色物质最大吸收峰在750nm附近。成人体内水分占70%〔二〕糖代谢生化检验糖原中主要化学键是1,6糖苷键糖原合成：由1-磷酸葡萄糖与UTP生成UDP葡萄糖，即葡萄糖的活化，而后每分子UDP葡萄糖参加糖原链。肌肉中含糖原的量最多饥饿一天时血糖主要来源是糖异生小肠上皮细胞吸收葡萄糖的主要形式是继发性主动运输，I型糖原累积症缺乏葡萄糖-6-磷酸酶，6-PG不能转化为GLU，智力低下多早亡。II型糖原累积症全身糖原堆积，多早亡。III型糖原累积症脱枝酶缺乏IV型糖原累积症分枝酶缺乏葡萄糖测定IFCC推荐参考方法为己糖激酶法，我国常用方法为葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法。糖尿病出现白内障，主要是由于过高的葡萄糖计入晶状体转化成山梨醇，而山梨醇脱氢酶减少导致山梨醇堆积溢出晶状体，最终导致蛋白质变性沉淀，形成白内障。OGTT试验--75g葡萄糖，250ml水溶解，5min内口服完IGT--血浆FPG<7.0mmol/l，OGTT>=7.8mmol/l且<11.1mmol/l。ADP/AMP促进糖分解产能，ATP促进糖异生低血糖是指GLU<2.8mmol/lHbA1c>6.5%说明糖尿病控制不良脂质和脂蛋白代谢生化检验正常人血清胆固醇酯占总胆固醇的70%甘油三酯合成过程中第一个中间产物是磷脂酸，而后才是甘油一酯。甘油本身并不是脂类肝内脂肪运出障碍是导致脂肪肝的主要原因LDL受体能与ApoB、ApoE以及氧化修饰的LDL结合，介导LDL/VLDL、ox-LDL等进入细胞代谢。清道夫受体能与残粒ApoE、ox-LDL等有高亲和力，是LDL受体途径以外的脂质摄取途径。ApoCII激活脂蛋白脂肪酶LPL，ApoAI能激活卵磷脂脂蛋白脂酰转移酶〔LCAT〕。脂肪发动中限速酶是脂蛋白脂肪酶即甘油三酯脂肪酶，其他参与酶有：肝脂酶、LCAT等。TG酶法测定是先将TG水解为甘油和脂肪酸，然后利用甘油激酶测定甘油，所以TG酶法测定实际上是测定游离甘油+甘油三酯。HDL-C测定的参考方法是超速离心法，超速离心后HPLC测定。Friedewald公式：LDL-C=TC-(HDL-C+TG*0.2)使用条件：1、空腹血清不含CM；2、TG<4.6mmol/l；3、III型高脂血症除外。酶学生化检验一级标准品：已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高度准确的假设干方法确定，所含杂质已经定量。主要用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品”定值。二级标准品：这类标准品可以是纯溶液〔水或有机溶剂的溶液〕，也可以存在于相似基质中。可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级标准品比拟而确定。主要用于常规方法的标化和控制物的定值。决定性方法--一级标准品--参考方法二级标准品常规方法在形成酶-底物复合物时，主要是酶的构象发生变化对维持红细胞正常生理环境具有极其重要意义的氧化复原体系是谷胱甘肽〔GSH〕人体中GGT含量最高组织是肾，血中GGT主要来自肝脏，红细胞中几乎没有GGT。rGT同工酶中，rGT2/3见于正常人，rGT1仅见于重症肝炎者，rGT4与胆红素升高有关。朗伯比尔定律A=K〔摩尔吸光系数〕C〔溶液浓度〕L〔光径〕，同一溶液A只与溶液浓度和光径相关，与光强度无关。K=〔V总*106〕/(E*V样品*L光径)POD作为工具酶时，4-氨基安替比林〔4-AAP〕最后呈色为红色；邻联甲苯胺最后呈蓝色。Α1-抗胰蛋白酶缺乏可导致青壮年肺气肿，延胡索酸乙酰乙酸水解酶缺陷可导致I型酪氨酸血症；甲硫氨酸合成酶缺陷可导致同型胱氨酸尿症，苯丙氨酸羟化酶缺陷可导致苯丙酮尿症，患儿有智力障碍。生物芯片利用介电电泳别离待测标记样品，大大提高了别离效率盐析法常用于粗提蛋白，吸附别离法多用于酶的粗制品别离，酶活性不受影响，有机溶剂沉淀法分辨率高，不需拖延，但易失活。维生素和微量元素代谢生化检验宏量元素主要是：Na、K、Cl、Ca、Mg、N、S、P等微量元素是指占人体重量的1/10000以下，每人每天需要量在100mg以下，主要是铁、锰、锌、铜、铬、钴、硒、碘、氟等。有害元素主要：镉、汞、铅、铝肝豆状核变性又称为Wilson病，是常染色体遗传的铜代谢障碍病。慢性铜中毒会在眼角膜形成沉积环，可有语音模糊不清、震颤等病症。锌缺乏可表现异食癖、性发育障碍。VD缺乏-佝偻病B2缺乏--口角炎PP缺乏--癞皮病VC坏血病B12--恶性贫血甲硫氨酸合成酶的辅酶是维生素B12，四氢叶酸是一碳传递单位。胰岛素辅助因子的元素是铬，LDH与ALP中含有Cu微量元素硒能调节维生素A、C、E、K吸收与消耗原子吸收分光光度法测定锌时，光源应采用锌元素空心阴极灯。体液、酸碱平衡紊乱检验高渗性脱水，细胞外液水丧失多于钠丧失，细胞内外液均减少，水从细胞内流向细胞外，以细胞内液减少为主。等渗性脱水以血液浓缩为主，组织间液与细胞内液变化不明显。低渗性脱水，细胞内外液均减少，以组织间液减少为主，细胞外渗透压下降，水从组织间液流入细胞。血清钠、钾测定的参考方法是火焰光度法，常用方法为离子选择性电极法。神经细胞动作电位产生是由于细胞外钾离子顺电势差流入细胞内，静息时神经细胞外正内负，复极时是Ca2+外流。所以钾升高时，神经细胞兴奋性增强，而心肌细胞静息电位差下降，兴奋性下降。心肌细胞动作电位由Na离子快速流入，Ca流入也参与其中，复极时主要是钾离子流出与钠钾泵。Ca离子上升时，心肌细胞兴奋性增强，而神经细胞由于复极效率下降，兴奋性下降。光谱技术可以分为发射光谱、吸收光谱和散射光谱分析；紫外分光光度、原子吸收分光光度法都属于吸收光谱分析，原子吸收分光光度法按激发原子化的方式分为火焰原子吸收分光光度法、化学原子吸收分光光度法、石墨炉原子吸收光度法。血氧含量是指隔绝空气条件下，血液中实际含氧量。氧容量是指HB最大结合氧量。血液中缓冲碱BB包括HB、血浆蛋白、HCO3-/H2PO4-等波尔效应是指PH改变会影响Hb携氧能力的现象，何尔登效应是氧气与血红蛋白的结合促使CO2释放。血气标本不能及时测定，需要保存在有冰块的水中，目的是防止糖代谢消耗O2，产生CO2，PH下降。持续呕吐或鼻胃吸入使大量H+丧失，肾脏对HCO3-重吸收减少，使尿Cl-排除减少，引起Cl-响应型代谢性碱中毒。原发性醛固酮增多使H+、K+排除增多，HCO3-与Na重吸收增加，Cl-排出增多，引起Cl-抵抗型代谢性碱中毒。酸中毒，HCO3-/H2CO3<20;碱中毒，HCO3-/H2CO3>20。二、各器官、各系统疾病生化检验肝胆疾病生化检验AFP半衰期4-5天结合胆红素中葡萄糖醛酸的主要供体是UDPGA血胆红素测定标本须防止阳光直接照射，以免胆红素结构变型。肝脏是生成尿素的唯一器官，是因为肝脏含有精氨酸酶，能催化精氨酸水解成鸟氨酸和尿素，还含有CPS-I，胞质中含有精氨酸代琥珀酸合成酶、精氨酸酶。人体内次级胆汁酸包括脱氧胆酸和石胆酸以及甘氨酸、牛磺酸的结合物。初级胆汁酸是指鹅脱氧胆酸和胆酸及其结合物。游离胆红素与重氮试剂反响慢，为间接反映阳性；结合胆红素与重氮试剂迅速作用产生颜色反响，称为直接反响阳性。溶血性黄疸，IBIL高度增加，尿胆原强阳性，尿胆红素阴性肝细胞性黄疸DBIL、IBIL均增加〔肝细胞活性下降与胆道堵塞均存在〕，尿胆原正常或升高，尿胆红素增加。阻塞性黄疸时DBIL高度增加，尿胆原减少或消失，尿胆红素强阳性肾脏疾病生化检验慢性肾衰竭时活性VD3生成缺乏是导致低钙血症的主要原因。NAG反映肾小管〔近曲小管〕损伤一次性尿渗量可鉴别肾前性少尿与肾小管坏死导致的少尿，肾前性少尿，其肾小管浓缩稀释功能正常，一次性尿渗量>450mOsm/(kg*H2O)；肾小管坏死那么一次性尿渗量<350mOsm/(kg*H2O)。肾小管酸中毒是指近端肾小管重吸收HCO3-或远端肾小管排H+障碍所致的代谢性酸中毒，根据肾小管损伤部位及其病理生理分为：I型远端肾小管酸中毒，远端肾小管排H+障碍引起；II型肾小管酸中毒，近端小管重吸收HCO3-障碍；III型肾小管酸中毒，混合型近曲、远曲肾小管均有障碍；IV型肾小管酸中毒由于醛固酮缺乏或醛固酮耐受，使总排H+减少，代酸合并高血钾。碱性苦味酸显色反响是一个非特异性反响，肌酸不与其发生显色反响；葡萄糖、丙酮、丙酮酸、肌酐均与其产生反响生成红色物质。心脏疾病生化检验Mb阴性预测值100%，是排除AMI最有效的心肌标志物。0.5-2h即可升高CK/CK-MB4-6h开始升高，48-72h恢复CTnT、CTnI3-6h开始升高，10d左右才恢复胃肠胰疾病生化检验卓-艾综合征是指促胃液素瘤骨代谢异常生化检验成骨细胞合成骨钙素骨是脱氧吡啶酚的主要来源，所以脱氧吡啶酚作为骨吸收标志物特异性及灵敏度均较高。骨形成标志物包括骨钙素、骨ALP、前胶原肽。胶原交联是骨吸收标志物。慢性肾衰时β2微球蛋白排泄受损，沉积于骨可发生骨淀粉样变。依替膦酸钠影响肝脏对维生素D的代谢，干扰肠道对钙的吸收和骨细胞的功能，引起骨软化症。变形性骨炎是指一种病因不明，以进行性风湿样骨关节痛、脊柱和四肢畸形、病理性骨折及脑、脊髓压迫病症为主要表现的慢性骨病，又称佩吉特病、畸形性骨炎。内分泌疾病生化检验甲状腺紊乱的检查指标TSH为首选指标，游离T3、T4为确诊指标。131I摄取试验对甲亢患者有诱发严重心脏反响的危险。TRH兴奋试验〔TRHstimulatingtest〕是利用促甲状腺激素释放激素〔TRH〕具有兴奋腺垂体〔垂体前叶〕合成分泌TSH的作用。当给受试者外源性TRH后，连续取血观察血清中TSH浓度的变化，可以反映垂体对TRH的反响能力，用于评价下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节功能。甲状腺病变性甲亢过高甲状腺激素抑制TSH分泌，因此TRH兴奋试验〔-〕；垂体腺瘤性甲亢TRH兴奋试验〔+〕；原发性甲减时TRH兴奋试验〔++〕，垂体性甲减阴性反响，下丘脑性加减呈延迟反响。高血糖素激发试验对嗜铬细胞瘤的诊断特异性为100%，灵敏度81%。可乐定抑制试验特异性93%，灵敏度87%。成人血浆皮质醇峰值与谷值比大于2肾上腺皮质功能紊乱首选检查工程为皮质醇水平及昼夜规律，血浆ACTH一般不作为筛查首选，多配合皮质醇用于鉴别皮质功能紊乱的种类和病变部位。ACTH兴奋试验用于判断肾上腺皮质功能紊乱病变部位。ACTH、皮质醇均升高，提示下丘脑、垂体病变〔库欣病〕或异源性ACTH综合征，ACTH降低，而皮质醇升高提示原发性肾上腺皮质功能亢进及单纯性肥胖，ACTH升高，皮质醇下降提示原发性肾上腺皮质功能减退二者均下降提示继发性肾上腺皮质功能减退。肾上腺皮质功能亢进者，皮质醇水平升高，尤其午夜水平异常升高，昼夜节律消失；肾上腺皮质功能减退者，皮质醇水平下降，尤其清晨水平显著下降，昼夜节律消失。胰岛素原比胰岛素多一段C肽。神经及精神疾病生化检验病毒性脑炎，脑脊液中葡萄糖含量常正常。妊娠期相关疾病生化检验肿瘤标志物遗传代谢疾病生化检验一般染色体基因突变或连锁分析采用外周血有核细胞DNA，胎儿产前诊断多采用绒毛膜或羊水DNA，肿瘤基因分析多采用脱落细胞DNA。治疗药物检测氨基糖苷类药物可与肝素形成复合物影响测定，因此不宜用肝素抗凝血测定。三环类抗抑郁药存在特殊“治疗窗”，即低于治疗窗范围无效，高于治疗窗范围不但毒副作用增强，疗效也下降。稳态电泳，又称为置换电泳，是指分子颗粒的电泳迁移在一定时间后到达稳态，如等电聚焦电泳和等速电泳。电泳按原理可以分为：移动界面电泳、区带电泳和稳态电泳荧光强度影响因素：1、荧光物质浓度，荧光物质浓度太高会发生自熄灭现象2、温度升高荧光效率下降3、溶液PH4、溶剂极性增强，荧光强度下降临床细菌学检验微生物检验技术干烤法主要用于玻璃器皿、瓷器消毒；紫外线照射法只能用于消毒物体外表和手术室、无菌操作室等空气及不耐热物外表消毒；高压蒸汽灭菌适于耐高压不怕湿热的物体，过滤除菌法用于空气消毒及一些不耐高温的血清、抗生素等；巴氏消毒主要用于牛乳等消毒。紫外线消毒效果生物学监测指示菌常用枯草芽孢黑色变种ATCC9372。标本采集细菌检验技术未染色活菌检查常用暗视野显微镜，在不染色微生物或者组织切片中寻找微生物多用相差显微镜。别离L型细菌常用的高深培养基属于特殊培养基，胆盐肉汤管属于选择培养基。碳水化合物代谢试验：糖发酵、O/F、ONPG、七叶苷水解试验、甲基红试验、VP蛋白质和氨基酸代谢试验：吲哚试验、氨基酸脱羧酶试验、明胶液化实验、尿素分解试验、硫化氢试验均为蛋白质和氨基酸代谢试验。酶类试验：CAMP试验、凝固酶试验、脂酶试验、硝酸盐复原试验、胆汁溶菌试验。抑菌试验：杆菌肽试验、Optochin、O/129DNA琼脂阳性质控菌粘质沙雷菌，阴性质控菌表皮葡萄球菌苯丙氨酸脱氨酶阳性质控菌雷极变形杆菌，阴性质控菌弗劳地枸橼酸杆菌胆汁-七叶苷阳性质控菌粪肠球菌，阴性质控菌化脓性链球菌。细菌耐药性检测转化受体菌直接摄取外界游离DNA接合--细菌通过性菌毛传递质粒转导噬菌体将供体菌的DNA片段带到受体菌中并整合溶原性转换噬菌体的遗传物质整合到受体菌中原生质融合两种不同细菌除去细胞壁后直接融合。大环内酯类药物：阻碍核蛋白体50S亚基联接，通过抑制蛋白合成产生抑菌作用。环丙沙星作用机制：抑制DNA旋转酶，阻碍DNA合成呋喃妥因作用机制：干扰细菌的氧化复原系统AmpC酶能水解一、二、三代头孢菌素、单酰胺类抗生素如氨曲南和头霉素类抗生素如头孢西丁。细菌对氯霉素耐药机制多为细菌获得编码氯霉素转乙酰基酶的质粒，编码乙酰转移酶灭活氯霉素。自然界细菌多四环素耐药多为产生泵出系统。革兰阴性菌由于含有外膜，使其免受溶菌酶的水解，也因此万古霉素对革兰阴性菌无杀菌作用。抑菌浓度指数FIC<0.5协同作用0.5-1相加作用1-2无关作用>2拮抗作用CAZ≤22mm、ATM≤27mm、CTX≤27mm、CRO≤25mm其中一个，那么提示菌株可能产ESBLs；那么对青霉素类、第三代头孢菌素〔头孢噻肟、头孢他啶、头孢哌酮、头孢曲松等〕、单环β-内酰胺类抗生素〔氨曲南〕耐药。通常不水解头霉素类〔头孢西丁、头孢美唑等〕和碳青霉烯类〔亚胺培南、美罗培南等〕。其活性可以被克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦等β-内酰胺酶抑制剂所抑制。我国的产ESBLs菌株主要是分解头孢噻肟的CTX-M型。肺炎链球菌K-B法测定青霉素类敏感性用苯唑西林代替，MICs〔如ETest〕可以测定青霉素敏感。MRSA不管体外药敏试验结果，对所有β-内酰胺类药物均无疗效，包括加酶抑制剂者均无效。β-内酰胺酶检测推荐采用头孢硝噻酚纸片法；超广谱β-内酰胺酶检测对象为大肠埃希菌、克雷伯菌、奇异变形等；碳青霉烯酶检测包括EDTA协同试验和改进Hodge试验；耐甲氧西林葡萄球菌检测包括头孢西丁纸片法和苯唑西林琼脂稀释法；氨基糖苷高水平耐药的肠球菌有纸片法、液体稀释法和琼脂稀释法；万古霉素耐药常用液体稀释法和琼脂稀释法。二、临床细菌学外毒素主要由革兰阳性菌产生，少数革兰阴性菌也可以产生；外毒素大多数是多肽，对组织具有高度选择性；外毒素经甲醛作用脱毒后，保存免疫原性，称为类毒素。第一局部需氧菌球菌凝固酶试验：金葡、中间葡萄球菌均呈阳性，路登葡萄球菌结合型凝固酶阳性而不分泌游离凝固酶。肺炎链球菌胆汁溶菌试验阳性，多数菌株分解菊糖；草绿色链球菌不被胆汁溶解，不分解菊糖。A群链球菌产生红疹毒素导致猩红热。龋齿--变异性链球菌。肠杆菌科我国饮水标准规定大肠杆菌数应小于或等于3/LETEC主要引起旅行者腹泻EIEC引起志贺样腹泻〔粘液脓血便〕EHEC又称产志贺样毒素大肠埃希菌，O157：H7引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征EPEC主要引起婴幼儿腹泻。伤寒沙门菌周身鞭毛食物中毒是最常见的沙门菌感染。伤寒最早表现为发热、腹泻持续一周，可见玫瑰疹，脉搏出现相对缓脉，血常规检查白细胞不升高，嗜酸粒细胞消失。志贺菌属一般不侵入血流，产生内毒素，易形成内毒素血症，另外A群志贺菌能产生一种外毒素志贺毒素〔ST〕,能引起Vero细胞病变，又称为Vero毒素〔VT〕。肠道杆菌菌落S-R变异，是由于失去了特异性多糖。七叶苷水解试验中，Fe2+与七叶素反响生成黑色化合物。非发酵格兰阴性杆菌荧光假单胞菌能在4摄氏度环境下生长，故可以在冰箱储存的血液制品中生长繁殖，易导致医源性感染。鲍曼不动杆菌对全部氨基青霉素、一代二代头孢和一代喹诺酮类天然耐药。其他革兰阴性杆菌气单胞菌属肠道外感染，主要为皮肤和软组织感染，主要由嗜水气单胞菌和维隆气单胞菌引起。棒状杆菌白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大的革兰阳性菌，无荚膜、无芽孢、无鞭毛、无菌毛。在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，和菌体着色不均一，称为异染颗粒。白喉棒状杆菌能在亚碲酸盐琼脂平板上将碲盐复原为元素碲，使菌落呈黑色。白喉棒状杆菌致病主要靠外毒素。锡克试验是利用毒素和抗毒素的中和试验，用以检测机体对白喉有无免疫力，还可以用于白喉预防接种后检测是否产生免疫力。其他革兰阳性杆菌分枝杆菌、放线菌、诺卡菌卡介苗是减毒牛型结核分枝杆菌结核分支杆菌细胞壁含有大量脂质，故抗酸染色时不易着色，且因此对理化因素抵抗力较强，但对湿热敏感。结核分枝杆菌不产生内、外毒素以及侵袭酶，其致病性可能与菌体成分以及代谢物质的毒性及菌体成分产生的免疫损伤有关。麻风杆菌是典型的胞内寄生菌，有麻风杆菌存在的细胞呈泡沫状称为麻风细胞，是与结核分枝杆菌区别的重要标志。诺卡菌属形态与放线菌相似，但菌丝末端不膨大，革兰染色着色不均，抗酸染色弱阳性。压碎颗粒，中心部位革兰阳性，边缘的流苏样小体革兰阴性。引起人类放线菌病的常见菌种为牛放线菌，衣氏放线菌在牛心脑浸液琼脂上可形成面包屑营养菌落。第二局部厌氧菌脆弱类拟杆菌为革兰阴性，着色不均，中间不着色或较浅，培养物图片染色呈明显多形性，胆汁七叶苷中生长旺盛。常寄生于人口腔、肠道和女性生殖道。第三局部非典型细菌〔细菌门中其他原核生物〕螺旋体腓肠肌痛，接触污水等是钩体病比拟典型的特征。钩端螺旋体可接种于含10%兔血清的Kothof培养基，28摄氏度培养最正确疏螺旋体接种于改进Kelly培养基。伯氏螺旋体莱姆病--移行性红斑蜱传播梅毒螺旋体检测中非特异性密螺旋体抗原试验：VDRL、USR、快速血浆反响素环状卡片试验〔RPR〕、自动反响素试验〔ART〕。特异性密螺旋体抗原试验有：梅毒密螺旋体微量血凝试验〔MHA-TP〕和荧光密螺旋体抗体吸收试验〔FTA-ABS〕。硬下疳--梅毒一期软下疳杜克雷嗜血杆菌引起的性传播疾病回归热螺旋体虱传播流行性斑疹伤寒人体虱地方性斑疹伤寒鼠蚤或鼠虱支原体支原体主要以二分裂形式进行繁殖，生长需要胆固醇和酵母，菌落能够吸附豚鼠红细胞，能产生溶血素，在培养皿上初代菌落“草莓”状，反复传代后呈“荷包蛋”菌落。肺炎支原体冷凝集试验常用于肺炎支原体的快速筛查试验。支原体P1膜蛋白和菌体蛋白是支原体的主要型特异性抗原，其抗原性常用生长抑制试验和代谢抑制试验鉴定。ELISA检测P1蛋白和多肽相应抗体，是目前诊断MP感染的可靠方法；补体结合试验是诊断MP常用的血清学方法。衣原体衣原体具有独特发育周期：原体，有细胞壁，内含致密核质，无繁殖能力，但有高度感染性；网状体又称为始体，无细胞壁，胞质内不含致密核质，有繁殖能力，但无感染性。沙眼衣原体的包涵体中含有糖原，碘染色可以着色呈阳性。沙眼分泌物Giemsa染色镜下可见包涵体，有诊断价值。Giemsa染色可以鉴别衣原体原体和始体。二乙氨基乙基葡萄糖用于处理细胞，提高沙眼衣原体培养成功率。立克次体立克次体含有DNA和RNA，专性活细胞内寄生，以二分裂方式繁殖，有群特异性抗原和种特异性抗原。斑疹伤寒、恙虫病、Q热立克次体别离多用动物接种；埃里克体用细胞培养；罗沙利马体〔巴通体属〕可用培养基培养。贝纳柯克斯体有荚膜，在鸡胚卵黄囊中可以形成芽孢。流行斑疹伤寒普氏立克次体地方性斑疹伤寒--莫氏立克次体Q热贝纳柯克斯体恙虫病恙虫病立克次体，恙虫病重要体征黑色焦痂+外斐试验OXK阳性，传播媒介为恙螨。Gimenez染色可以鉴别恙虫病立克次体。外斐试验阴性Q热、立克次体病及罗沙利马体感染立克次体常用染色方法：Giemsa普氏立克次体--紫红色Gimenez染色普氏立克次体红色GimenezQ热红色一般斑疹伤寒与OX19凝集试验阳性、OX2低滴度阳性；恙虫病时OXK高滴度阳性。三、真菌球孢子菌、组织胞浆菌等均为双相性真菌，隐球菌是酵母菌，是单细胞真菌。孢子是真菌的繁殖器官，分为有性孢子和无性孢子，有性孢子有：卵孢子、接合孢子、子囊孢子和担孢子；无性孢子分为：叶状孢子、分生孢子、孢子囊孢子。芽生孢子是有菌丝体细胞出芽生成孢子，是叶状孢子的一种，常见于假丝酵母菌与隐球菌。孢子囊孢子是菌丝末端膨大形成，内含大量孢子，成熟时破囊而出。由生殖菌丝在末端分裂或收缩而成的是分生孢子。尿素培养基可以鉴别酵母菌与类酵母菌，酵母菌如新型隐球菌能产生脲酶。厚壁孢子试验：假丝酵母菌在玉米粉培养基25摄氏度条件下培养1-2天后，仅白假丝酵母菌在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚壁孢子。隐球菌不发酵糖。假菌丝是指菌丝向培养基下生长瑞氏染色液适合检出荚膜组织胞浆菌。真菌常量肉汤稀释法药敏试验，最终接种菌量为1*103--5*103/ml。病毒呼吸道病毒呼吸道病毒检验：正粘病毒科流感病毒副粘病毒科副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒其他病毒科--鼻病毒、腺病毒、风疹病毒、冠状病毒、呼肠病毒科〔如：轮状病毒〕等腺病毒为双链DNA病毒。流行性感冒特征表现多为急性起病、高热、头痛和全身肌肉痛。全身中毒病症明显而呼吸道病症较轻。流感儿童忌用阿司匹林，因其与流感患儿肝脏和神经系统并发症有关，偶尔可致死。流感病毒鸡胚培养初次别离病毒应接种于羊膜腔，传代培养接种于尿囊腔。流感病毒细胞培养首选猴肾细胞或犬肾传代细胞。鉴定副流感病毒最常用的方法是红细胞吸附试验，也可用血凝抑制、中和试验和补体结合试验。麻疹出疹期皮疹开始为不规那么的红色斑丘疹，始于耳后、颈部、发际边缘，24h普及全身丘疹大局部压之褪色。颊部黏膜相当于下部磨牙位置外侧出现白斑点，即麻疹黏膜斑，对麻疹的早期诊断有决定性意义。麻疹肺炎是麻疹最常见并发症，占麻疹死亡病例的90%，麻疹重症期首选丙种球蛋白治疗。麻疹病毒与亚急性硬化性全脑炎〔SSPE〕相关。呼吸道合胞病毒不能在鸡胚中繁殖，只能在人猴细胞如Hep-2、Hela等细胞株中繁殖。呼吸道合胞病毒不引起中枢神经系统感染。婴幼儿下呼吸道感染最常见的病毒。化脓性腮腺炎多是一侧腮腺肿大，局部红肿压痛明显，有脓液。流行性腮腺炎时双侧肿大，发热但不红肿，白细胞不升高。腺病毒不能在鸡胚中生长，人胚肾细胞对其最敏感。肠道病毒肠道病毒：柯萨奇病毒、ECHO病毒、脊髓灰质炎病毒、肠道病毒71型脊髓灰质炎瘫痪型患者特征表现肢体驰缓性瘫痪。临床上绝大多数病毒性心肌炎由柯萨奇病毒和埃可病毒引起，柯萨奇病毒B组是人体心肌炎的首位病原体。柯萨奇病毒主要经粪口途径传播。肠道病毒：小RNA病毒科肠道病毒属--脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒、新肠道病毒鉴定肠道病毒标准方法为中和试验。轮状病毒具有双层衣壳，从内向外放射状排列，呈车轮状。轮状病毒A组是世界性婴幼儿重症腹泻最常见病原体。轮状病毒A组主要侵袭婴幼儿，以秋冬季流行为主；B组主要引起成人腹泻，无明显季节性。肝炎病毒HBeAg不是HBV结构蛋白，故不是HBV病毒复制所必须的成分，但是HBV复制和感染性的指标。HBV基因组比拟奇特，DNA双链可分别编码。HEV在胞浆中装配，可形成包涵体。HBV感染后第一个出现的血清学标志物--HBsAg，HBV存在和复制活泼的直接指标为HBcAg，诊断HBV感染最直接指标HBV-DNA。疱疹病毒幼儿急疹潜伏期8-14天，平均10天，起病急，体温突然升高达39-41摄氏度，持续3-5天，一般情况好，热退9-12小时出现皮疹，伴有斑丘疹，散在分布于躯干、颈部及上肢，几小时内皮疹开始消退，一般2-3天内消失，无色素沉积。带状疱疹多发生于成人，发热后1-4天出现皮疹，常成群分布，迅速变为水疱，带状排列。黄病毒、出血热病毒流行性乙脑传播媒介为三带喙库蚊，登革病毒传播媒介为伊蚊肾病出血热汉坦病毒流行性出血热表现为明显的感染中毒病症，结膜充血水肿，肾脏损害表现为蛋白尿、尿量减少和氮质血症。逆转录病毒HIV特异性糖蛋白是P24，其外表刺突蛋白gp120、gp41由Env基因编码。HIV为脂蛋白包膜，HCV为蛋白包膜，腮腺炎病毒、麻疹病毒为脂质双分子层包膜，腺病毒无包膜。AIDS最常见、最严重的时机感染性疾病为卡氏肺孢子菌感染，可引起致死性感染。其他病毒、朊粒朊病毒感染常见于器官移植或者或者神经外科手术患者，主要因手术器械消毒不彻底引起。水痘-带状疱疹病毒在感染细胞核内可见嗜酸性包涵体；单纯疱疹病毒在细胞核内可见嗜酸性包涵体；呼吸道合包病毒在胞浆内形成嗜酸性包涵体；麻疹病毒胞核与胞浆内均可见嗜酸性包涵体；汉坦病毒不形成嗜酸性包涵体。流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、汉坦病毒均为单负链RNA病毒丙型肝炎病毒是有蛋白包膜的单正链RNA病毒。HSV主要通过接触传播，HHV-6主要经口口传播或口手传播，VZV主要通过呼吸传播。HPV-6型--锋利湿疣HPV16、18型宫颈内瘤变临床血液学检验造血检验根底理论与方法1.造血理论根底造血：卵黄囊胚胎2-9w造血干细胞绝大多数表达CD34和Thy-1，特定条件下，可在脾内形成造血结节，具有自我更新能力和多向分化能力，只进行不对称分裂。造血祖细胞CD34弱表达，可表达CD38，局部或全部失去了自我更新能力，定向分化，进行对称分裂。红细胞早期集落形成单位〔BFU-E〕是骨髓中红细胞系造血细胞形成的细胞集落，BFU-E增加见于真性红细胞增多症、原发性骨髓纤维化，减少见于再障、急性白血病、急性红白血病及铁粒幼细胞性贫血等。造血检验方法〔1〕血象、骨髓象骨髓检查：正常骨髓象一般观察200个细胞进行分类，增生明显活泼者应计数400-500，甚至1000个细胞；对于增生极度减低者可计数100个有核细胞。正常人骨髓象核分裂细胞<1%骨髓细胞学检查时泡沫细胞是指尼曼-匹克细胞。骨髓活检：AA可见残存孤立性幼红细胞岛；巨幼细胞贫血可见不同阶段红细胞增生，分裂象易见；慢粒中晚幼粒增多，同时吞噬细胞增加，形成“星空样”图像；MDS最重要特征是检出不典型微巨核细胞和未成熟前体细胞异常定位；MM是骨髓内浆细胞均一性、结节性聚集。骨髓增生性疾病是骨髓组织持续增生引起的疾病，通常指真性红细胞增多症、CML、原发性骨髓纤维化、原发性血小板增多。细胞化学染色NAP积分增加见于细菌感染、再障、急淋、恶性淋巴瘤、慢性粒细胞白血病急变期等，NAP积分下降见于慢性粒细胞白血病、PNH、MDS、急粒、恶性组织病等。NAP主要用于区别类白血病反响和慢粒，慢粒确实诊有赖Ph染色检出。POX特异性高于SBB，POX染色要求新鲜涂片；SBB敏感性高于POX，SBB较繁琐，可以用旧片。POX染色成功标志--成熟粒细胞呈强阳性；鉴别急性白血病首选细胞化学染色POX，POX染色原始粒细胞可呈阳性，原淋及幼稚淋巴细胞阴性，急单时少数细胞可呈阳性。脂酶染色分为特异性脂酶染色〔NAS-DCE〕和非特异性(α-NAE/NAS-DAE、α-NBE)萘酚AS-D氯乙酸脂酶(NAS-DCE)，又称特异性脂酶，主要用于鉴别急性白血病，急粒白血病细胞阳性，急单和急淋均为阴性，急粒单白血病局部细胞阳性；肥大细胞可呈阳性，其余细胞均为阴性。α-醋酸萘酚酯酶染色〔α-NAE〕和NAS-DAE是一类反响，单核系统细胞阳性且阳性可以被NaF抑制，粒细胞少局部阳性、少数淋巴细胞以及巨核细胞、血小板均为阳性，且不能被NaF抑制。α-丁酸萘酚酯酶染色〔α-NBE〕单核细胞呈阳性且能被NaF抑制，粒细胞各阶段均为阴性反响，组织细胞可呈阳性且不能被NaF抑制。PAS染色粒细胞、单核细胞、成熟巨核细胞、血小板均为阳性，戈谢细胞强阳性，尼曼-匹克细胞胞质阳性，空泡阴性；有核红细胞与红细胞均为阴性，大局部淋巴细胞阴性，少数淋巴细胞可呈阳性。糖原染色〔PAS〕主要用于红系良恶性疾病鉴别，α-NBE+NaF可用于鉴别急性单核细胞白血病与恶性组织病；ACP用于鉴别毛细胞白血病和脂质代谢障碍性疾病。ACP染色可以鉴别T/B淋巴细胞白血病，T细胞阳性，而B细胞阴性或弱阳性；ACP染色戈谢细胞强阳性，尼曼匹克细胞阴性。T〔8；21〕M2bT〔8；14〕B-ALL红细胞检验贫血：Hb极重--30--重--60--中90轻骨髓中细胞外铁主要存在骨髓小粒的巨噬细胞中，细胞内铁存在于中晚幼红细胞、铁粒幼红细胞、环形铁粒幼红细胞等。感染和某些慢性病导致贫血，细胞外铁增加而铁粒幼红细胞减少，铁利用障碍。G6PD缺乏时高铁血红蛋白复原率下降。抗碱