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第第页土壤硝态氮试剂盒说明书土壤硝态氮试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。测定意义：硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物汲取氮的重要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。测定原理：在浓酸条件下，NO3与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH12）呈黄色，在肯定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。自备试验用品及仪器：蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、振荡仪。试剂构成和配制：试剂一：粉剂×2支，4℃避光保管。临用前依据用量每支加1mL浓硫酸充分溶解。试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保管。样本处理：依照土壤质量（g）：蒸馏水体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g新鲜土样，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，置于振荡仪中振荡提取1h，25℃，10000g离心10min，取上清待测。测定操作表：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调整波长至410nm，蒸馏水调零。2、操作表（于EP管中加入下列试剂）空白管测定管样本（μL）10蒸馏水（μL）10试剂一（μL）2020充分混匀，25℃静置30min试剂二（μL）475475混匀，涡旋振荡，使显现的沉淀充分溶解，转移200uL至微量石英比色皿/96孔板中测定410nm处吸光值A，△A=A测定管A空白管计算公式：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=0.0156x+0.0073，R2=0.9997NO3——N含量（mg/kg鲜重）=（△A0.0073）÷0.0156÷（W÷V样总）=64.1×（△A0.0073）÷WV样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，gb.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线：y=0.0078x+0.0073，R2=0.9997NO3——N（mg/kg鲜重）=（△A0.0073）÷0.0078÷（W÷V样总）=128.2×（△A0.0073）÷WV样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g注意事项：1.硝酸根不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很容易在土壤内部移动，所以测定此指标时应注意采样深度全都。2.土壤经风干或者烘干很容易引起NO3——N的变动，所以最好采用新鲜土壤进行测定，以准确反映该指标含量。3.试剂一配制好后尽快使用，4℃可

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