DB36-T 1031-2018 水稻二化螟抗药性检测技术规程 饲料浸药法

ICS65.020.20

B16

DB36

江西省地方标准

DB36/T1031—2018

水稻二化螟抗药性检测技术规程饲料浸药

法

Technologicalrulesformonitoringinsecticideresistanceinstripedstemborer（Chilo

suppressalisWalker）usingartificialdietdippingbioassaymethod

2018-03-19发布2018-09-20实施

江西省质量技术监督局发布

DB36/T1031—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由江西省农业厅提出并归口。

本标准起草单位：江西省农业科学院植物保护研究所、江西省农业生态与资源保护站、江西省余江

县植保植检站、江西省植保植检局。

本标准主要起草人：黄水金、孙杨、秦文婧、熊焕华、刘晖、王惠明、徐样庚、王希、史建苗、盛

琦、饶喜。

II

DB36/T1031—2018

水稻二化螟抗药性检测技术规程饲料浸药法

1范围

本标准规定了饲料浸药法检测二化螟（Chilosuppressalis(Walker)）抗药性方法的术语和定义、

试剂与材料、主要仪器设备、实验步骤、数据统计与分析、抗性水平评估、检测报告表编写。

本标准适用于杀虫剂对二化螟室内毒力测定和抗药性评估。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

抗药性Insecticideresistance

昆虫忍耐杀死正常种群大部分个体的药量的能力，并在其种群中发展起来的能力。

2.2

敏感基线Susceptibilitybaseline

在某种农药使用之前，昆虫敏感品系的毒力基线LC50。

2.3

饲料浸药法Artificialdietdippingbioassaymethod

二化螟幼虫接触、取食浸渍农药的人工饲料而中毒死亡的毒力测定方法。

3试剂与材料

3.1生物试材

二化螟：4龄初期幼虫。

3.2试验试剂与药剂

试剂为分析纯，药剂为农药原药。

4主要仪器设备

电子天平（感量0.0001g），手持搅拌机，料理机,切片器，毛笔，眼科镊，移液器，平底玻璃管（直

径3cm，高5cm），1000ml烧杯（直径13cm，高15cm），恒温培养箱或人工气候箱，高温高压湿热灭菌锅，

微波炉。

1

DB36/T1031—2018

5试验步骤

5.1卵块采集、管理及人工饲料配制

5.1.1卵块采集

在成虫盛发期，从田间诱蛾带回室内产卵或从水稻田直接采集二化螟卵块。

5.1.2卵块孵化及幼虫管理

在玻璃培养皿（直径9cm）中放入滤纸3片～4片，并加入适量灭菌蒸馏水保湿，将卵块放入其中，

保湿培养至卵块黑头时，将黑头卵块放入装有饲料的玻璃管中，每个玻璃管中放入1个～2个卵块，塞上

棉花塞。待幼虫从卵块中孵出并爬至饲料上后，将卵块残余部分从玻璃管中挑出来，然后将幼虫放置于

温度28±1℃，相对湿度60%～70%，光周期为（白天:黑夜）16h:8h（下光源）的光照培养箱中培至4龄

初期。

5.1.3药剂配制

农药原药用有机溶剂（如丙酮、二甲基甲酰胺等）充分溶解，加入10％（每100ml体积终溶液中含

有溶质的质量为10mg）用量的Triton-X100（或吐温80）加工成制剂，并用蒸馏水稀释。根据预备试验

结果，按照等比例方法设置5个～7个系列质量浓度，每质量浓度药液量不少于200ml。

5.1.4人工饲料配制方法

人工饲料按配方进行配制（见附录B）。具体配制方法如下：

a)将各组分按配比称重，备用；

b)将新鲜的茭白切碎，加入水，放入料理机中磨碎并匀浆，匀浆后将其倒入盛有大豆粉、酵母粉、

干酪素和蔗糖的灭菌桶中，将上述5种组分充分搅拌均匀后，置于高压蒸汽灭菌锅中，于125℃

下灭菌30min，灭菌完毕后，取出备用；

c)琼脂中加入纯净水，用微波炉加热并煮至完全溶解后，将其倒入步骤（2）中已灭菌好的饲料

中，用手持搅拌机搅拌混匀，并冷却至60℃左右备用；

d)将称好的抗坏血酸钠、尼泊金酯、山梨酸、胆固醇、氯化胆碱、威氏盐、复合维生素放入烧杯

中，用少量温开水溶解，然后将其倒入步骤（3）中的饲料中，再加入40%的甲醛，搅拌直至

完全均匀；

e)将搅拌好的饲料倒入无菌的保鲜盒中，完全冷却凝固后存放于4℃冰箱中备用。

5.2处理方法

用切片器将饲料切成1.2mm薄片，然后将饲料薄片挑入至药液中浸渍10s，将浸渍药液后的饲料薄片

放置于呈45度角的纱网平面上晾干30min后挑入至平底玻璃管中（6片/管）。再将4龄初期二化螟幼虫挑

入（10头/管）。将其置于温度28±1℃，相对湿度60%～70%，光周期为（白天:黑夜）16h:8h（下光照）

的培养箱中。每个浓度4次重复，每个重复处理10头试虫。

5.3结果检查

根据杀虫剂的杀虫特性分别于接虫后的48h～96h检查。沙蚕毒素类、菊酯类、有机磷类、大环内酯

类药剂在药后48h检查；昆虫生长调节剂类和双酰胺类药剂在药后96h检查。死亡标准为：以小毛笔或尖

锐镊子轻触虫体，不能正常爬行者视作为死亡个体。

2

DB36/T1031—2018

6数据统计与分析

6.1计算方法

根据调查数据，计算各处理的校正死亡率。按公式（1）和（2）计算，计算结果均保留到小数点后

两位：

K

P1=×100%………（1）

N

式中：

P1——死亡率，单位为百分率（%）；

K——表示死亡虫数，单位为头；

N——表示处理总虫数，单位为头。

Pt−P0

P2=×100%……（2）

1−P0

式中：

P2——校正死亡率，单位为百分率（%）；

Pt——处理死亡率，单位为百分率（%）；

P0——空白对照死亡率，单位为百分率（%）。

若对照死亡率<5％，无需校正；对照死亡率在5％～20％之间，应按公式（2）进行校正；对照死亡

率>20％，试验需重做。

6.2统计分析

采用SAS、EPA、POLO、BA、DPS等统计分析系统软件的机率值分析法进行统计分析，求出每个药剂

的毒力回归方程式、LC50值及其95％置信限、b值及其标准误。

7抗性水平评估

7.1二化螟敏感毒力基线的制定

二化螟抗性监测的敏感毒力基线见附录A。

7.2抗性水平的分级标准

抗性水平的分级标准见表1。

表1二化螟抗性水平的分级标准

抗性水平分级抗性倍数

敏感RR≤5.0

低水平抗性5.0＜RR≤10.0

中等水平抗性10.0＜RR≤100.0

高水平抗性RR＞100.0

7.3抗性水平的计算与评估

3

DB36/T1031—2018

7.3.1根据敏感品系的LC50值和测试种群的LC50值，计算测试种群的抗性倍数。按下式计算，计算结

果均保留到小数点后一位：

抗性倍数=测试种群的LC50/敏感品系的LC50。

7.3.2按照抗性水平的分级标准，对测试种群的抗性水平作出评估。

8检测报告编写

根据统计结果和抗性水平评估，写出正式抗性检测报告，并列出原始数据。

4

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附录A

（资料性附录）

部分杀虫剂对水稻二化螟的敏感毒力基线

部分杀虫剂对二化螟的敏感毒力基线见表A.1

表A.1部分杀虫剂对二化螟敏感品系的毒力基线

药剂LD-P线(Y=)LC50（mga.i./L)95%置信限

甲氨基阿维菌素苯甲酸

7.9997+2.2221x0.04470.0366-0.0545

盐

阿维菌素6.9889+1.8571x0.08490.0663-0.1088

杀虫环5.8204+1.5219x0.2890.2203-0.3792

杀虫单4.863+1.614x1.21590.9687-1.5262

氯虫苯甲酰胺5.0842+1.9065x0.90330.7250-1.1255

氟苯虫酰胺3.5468+3.2260x2.82152.4410-3.2613

甲氧虫酰肼3.9067+2.0171x3.48372.7819-4.3625

三唑磷3.2009+3.0551x3.88053.2819-4.5883

水胺硫磷2.3008+3.7383x5.27274.742-5.8629

丙溴磷2.9981+2.0839x9.13377.4329-11.2237

稻丰散2.1207+2.4647x14.731112.4526-17.4265

二嗪磷-0.6914+4.8369x15.0213.6779-16.4939

5

DB36/T1031—2018

BA

附录B

（资料性附录）

二化螟人工饲料的组份及其配比

二化螟人工饲料各组份含量见表B.1，复合维生素B各组份含量见表B.2。

表B.1二化螟人工饲料各组份含量(1000g饲料)

饲料组份重量（g）饲料组份重量（g）

大豆粉45抗坏血酸4.35

酵母粉30胆固醇0.30

干酪素15氯化胆碱0.44

蔗糖15威氏盐0.15

鲜茭白145复合维生素B0.03

水375山梨酸1.45

琼脂粉16泥泊金甲酯1.45

水30040%甲醛1.00

蒸馏水50

表B.2复合维生素B各组份含量

成份每500mg混合物中含量（mg）成份每500mg混合物中含量（mg）

烟酰胺152叶酸38

盐酸硫胺素38泛酸钙153

核黄素76生物素4

盐酸吡哆醇38氰钴胺素1

_________________________________

6

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目次

前言................................................................................II

1范围..............................................................................1

2术语和定义........................................................................1

3试剂与材料........................................................................1

4主要仪器设备......................................................................1

5试验步骤..........................................................................2

6数据统计与分析....................................................................3

7抗性水平评估......................................................................3

8检测报告编写……………….4

附录A（资料性附录）部分杀虫剂对水稻二化螟的敏感毒力基线............................5

附录B（资料性附录）二化螟人工饲料的组份及其配比....................................6

I

DB36/T1031—2018

水稻二化螟抗药性检测技术规程饲料浸药法

1范围

本标准规定了饲料浸药法检测二化螟（Chilosuppressalis(Walker)）抗药性方法的术语和定义、

试剂与材料、主要仪器设备、实验步骤、数据统计与分析、抗性水平评估、检测报告表编写。

本标准适用于杀虫剂对二化螟室内毒力测定和抗药性评估。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

抗药性Insecticideresistance

昆虫忍耐杀死正常种群大部分个体的药量的能力，并在其种群中发展起来的能力。

2.2

敏感基线Susceptibilitybaseline

在某种农药使用之前，昆虫敏感品系的毒力基线LC50。

2.3

饲料浸药法Artificialdietdippingbioassaymethod

二化螟幼虫接触、取食浸渍农药的人工饲料而中毒死亡的毒力测定方法。

3试剂与材料

3.1生物试材

二化螟：4龄初期幼虫。

3.2试验试剂与药剂

试剂为分析纯，药剂为农药原药。

4主要仪器设备

电子天平（感量0.0001g），手持搅拌机，料理机,切片器，毛笔，眼科镊，移液器，平底玻璃管（直

径3cm，高5cm），1000ml烧杯（直径13cm，高15cm），恒温培养箱或人工气候箱，高温高压湿热灭菌锅，

微波炉。

1

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5试验步骤

5.1卵块采集、管理及人工饲料配制

5.1.1卵块采集

在成虫盛发期，从田间诱蛾带回室内产卵或从水稻田直接采集二化螟卵块。

5.1.2卵块孵化及幼虫管理

在玻璃培养皿（直径9cm）中放入滤纸3片～4片，并加入适量灭菌蒸馏水保湿，将卵块放入其中，

保湿培养至卵块黑头时，将黑头卵块放入装有饲料的玻璃管中，每个玻璃管中放入1个～2个卵块，塞上

棉花塞。待幼虫从卵块中孵出并爬至饲料上后，将卵块残余部分从玻璃管中挑出来，然后将幼虫放置于

温度28±1℃，相对湿度60%～70%，光周期为（白天:黑夜）16h:8h（下光源）的光照培养箱中培至4龄

初期。

5.1.3药剂配制

农药原药用有机溶剂（如丙酮、二甲基甲酰胺等）充分溶解，加入10％（每100ml体积终溶液中含

有溶质的质量为10mg）用量的Triton-X100（或吐温80）加工成制剂，并用蒸馏水稀释。根据预备试验

结果，按照等比例方法设置5个～7个系列质量浓度，每质量浓度药液量不少于200ml。

5.1.4人工饲料配制方法

人工饲料按配方进行配制（见附录B）。具体配制方法如下：

a)将各组分按配比称重，备用；

b)将新鲜的茭白切碎，加入水，放入料理机中磨碎并匀浆，匀浆后将其倒入盛有大豆粉、酵母粉、

干酪素和蔗糖的灭菌桶中，将上述5种组分充分搅拌均匀后，置于高压蒸汽灭菌锅中，于125℃

下灭菌30min，灭菌完毕后，取出备用；

c)琼脂中加入纯净水，用微波炉加热并煮至完全溶解后，将其倒入步骤（2）中已灭菌好的饲料

中，用手持搅拌机搅拌混匀，并冷却至60℃左右备用；

d)将称好的抗坏血酸钠、尼泊金酯、山梨酸、胆固醇、氯化胆碱、威氏盐、复合维生素放入烧杯

中，用少量温开水溶解，然后将其倒入步骤（3）中的饲料中，再加入40%的甲醛，搅拌直至

完全均匀；

e)将搅拌好的饲料倒入无菌的保鲜盒中，完全冷却凝固后存放于4℃冰箱中备用。

5.2处理方法

用切片器将饲料切成1.2mm薄片，然后将饲料薄片挑入至药液中浸渍10s，将浸渍药液后的饲料薄片

放置于呈45度角的纱网平面上晾干30min后挑入至平底玻璃管中（6片/管）。再将4龄初期二化螟幼虫挑

入（10头/管）。将其置于温度28±1℃，相对湿度60%～70%，光周期为（白天:黑夜）16h:8h（下光照）

的培养箱中。每个浓度4次重复，每个重复处理10头试虫。

5.3结果检查

根据杀虫剂的杀虫特性分别于接虫后的48h～96h检查。沙蚕毒素类、菊酯类、有机磷类、大环内酯

类药剂在药后48h检查；昆虫生长调节剂类和双酰胺类药剂在药后96h检查。死亡标准为：以小毛笔或尖

锐镊子轻触虫体，不能正常爬行者视作为死亡个体。