生物安全第三等级实验室操作程序

生物平安第三等級實驗室人員訓練實驗室操作程序95.3.20版ChainofInfectionPersonalProtectiveEquipmentImmunizationSurveillancePracticesEquipment/FacilityBarriersBarriersPrimarybarrier(主要屏障)：直接隔離人員與對人員有害的生物材料之防護設備Personalprotectiveequipment:口罩、防護衣、手套Laboratoryequipment:平安櫃、排氣櫃SecondaryBarrier(二級屏障〕環境設施與工程設計前室、獨立HVAC系統RiskGroupRGIndividualriskCommunityriskProphylaxisortreatment1NoorverylowNoorverylow2ModerateLowUsuallyavailable3HighLowUsuallyavailable4HighHighUsuallyNoneChainofInfectionPersonalProtectiveEquipmentImmunizationSurveillancePracticesEquipment/FacilityRoutesofinfectionMouthaerosolspillhandWound/cutEyePracticesMouthaerosolspillhandEyeWound/cutMouthSkinThroughacut,staborsplashWashimmediatelywithwaterfor5min.Eyesflushwithwateronlyfor10min.Cuts,stabscrubareatobleedRemoveglovesorclothingifrequiredReportaccidentandseekmedicalaidandfollowupSkinPenetratingrubberseptumvialsOpeningpop-toptubesSonicatingtissuesPipettingliquidsCentrifugationVortexingormixingliquidSplash/spillAerosolsEyePipettingPluggedwithcottonMixcarefullyClosetomediumCentrifugationClosedcontainersIntheBSCifneededWellbalancedVortexingCoverspillusingpaperPouronbleachWaitfor10min.PlacespilledmaterialintobiohazardbagCleanupSpillHandPersonalProtectiveEquipmentPersonalProtectiveEquipmentMouthaerosolspillhandEyeWound/cutHand

SafetyglassesSafetygogglesFaceshieldsEyeOvergownShoecoversSurgicalscrubsuitsLaboratorycoatPlasticapronsHeadcoverSkinAerosolsrespirator/maskHalffacerespiratorandcartridgesFullfacerespiratorandsuppliedairBiosafetyCabinetHEPAFilter

“Highefficiencyparticulateair〞filterTrapsparticulatesonlyEfficiencyof99.97%withparticles0.3umBSCClassIClassIITypeA170%ofairrecirculatedwithinthecabinet30%exhaustedthroughtheHEPAfilterintotheroomTypeA2(B3)SameasA1exceptairisexhaustedoutsidethroughathimbleunitconnection.TypeB130%ofairrecirculated70%exhaustedthroughtheHEPAfiltertotheoutsideviaahardductTypeB2NorecirculationwithtotalexhaustthroughtheHEPAfiltertotheoutsideviaahardductClassIITypeB1ClassIITypeB2ClassIITypeB3ClassIIIFacilities設施動線：阻隔區與平安區充足的標示MSDS,Sign氣流方向:cleantodirty負壓InOutGowningDeGowningChangeCloth人員動線(FlowofPersonnel)TBP2TBP2-A染色區TBP3-BBUFFER-2TBP3P3-AA/L-2A/L-14CRefrigBUFFER-1WaterBathVIRUSP3VIRUSP2CELLCULTURERackBSCDeconAutoclaveDeconAutoclaveWasteCORRIDOR-80CFreezerIncubatorMicro-ScopeCentrifugeClosetVirusP3MaterialsFlow4CRefrigWaterBathVIRUSP3VIRUSP2CELLCULTURERackBSCBUFFER-1DeconAutoclaveDeconAutoclaveWasteCORRIDOR-80CFreezerTBP2TBP2-ASTAINTBP3-BBUFFER-2TBP3P3-AIncubatorMicro-ScopeCentrifugeClosetA/L-2A/L-1物品動線(FlowofMaterials)4CRefrigWaterBathVIRUSP3VIRUSP2CELLCULTURERackBSCBUFFER-1DeconAutoclaveDeconAutoclaveWasteCORRIDOR-80CFreezerTBP2TBP2-ASTAINTBP3-BBUFFER-2TBP3P3-AIncubatorMicro-ScopeCentrifugeClosetA/L-2A/L-1WasteFlow廢棄物動線(FlowofWaste)P3Lab.Class100K20times/hr21±2℃60±10%RHCarridor12times/hr23±2℃P2Lab.Class100K20times/hr21±2℃60±10%RH-12.5PaVIRUSP3VIRUSP2CELLCULTUREBUFFER-1WasteCORRIDORTBP2TBP2-ASTAINTBP3-BBUFFER-2TBP3P3-AA/L-2A/L-1DeconAutoclaveDeconAutoclave氣流示意圖(FlowofAir)IndividualworkersresponsibilitiesThatmeansYOU!前言目的：為防範院內生物危害第三等級生物材料，因人為疏失、操作失當或不正確使用器具或設備，造成實驗室意外，導致環境污染及院內感染，訂定此操作程序，以防止或將可能的危險降至最低。實驗室平安的關鍵在於工作者對工作特性的認知及良好的工作習慣生物平安是每一位實驗室工作者的責任。為了維持平安的工作環境，每一位工作人員都需要遵守本操作程序的規定。違反規定者應通報生物平安官處理。實驗項目-病毒實驗項目-結核菌準備程序進出入管制：利用刷卡門禁管制人員進出入個人防護實驗室功能進出入管制生物平安第三等級實驗室操作時每次至少兩人同時在實驗室，並且有一人在走道監控監視器，於設施使用及人員進出紀錄表簽名〔附表一〕在監視系統設定允許進入實驗室。工務維修人員、實習學生、參觀或觀摩人員進入生物平安第三等級實驗室，必須有平安訓練紀錄〔附表三〕，並有合格人員全程監督，未經訓練不准操作。操作特定實驗須有操作訓練紀錄，並有合格人員監督。院外人員進入需填寫參訪紀錄〔附表一d〕準備實驗用器材〔附表一a〕於人員進出紀錄表勾選工作項目，並逐項核對實驗器材清單實驗用器材及儀器紀錄表經由傳遞箱送入室內。於人員進出紀錄表登錄日期、時間及工作項目。個人防護使用個人防護用具：進入緩衝室〔入〕，依標示穿隔離衣、穿鞋套、載N95口罩、戴手術帽、戴外科口罩、戴外科長手套、戴手套。禁止攜帶進入實驗室項目嚴禁攜帶私人手機入內使用。取下手錶、手環、戒指、耳環及髮飾。脫下影響穿著防護衣之個人外套。實驗室功能確定實驗室內氣流方向及換氣量氣流方向氣流方向是從無生物材料污染區域至污染可能程度增加的區域〔走道→緩衝室→實驗室〕，可用一張薄紙測試換氣量進入實驗室前，於中央監控系統啟動為正常模式，換氣量12次/時以上。實驗結束後，於中央監控系統設定為節能模式。工程人員至少每年測量一次氣流量的變化中央監控系統分層管制〔見附件六〕確定實驗室內負壓為3.5mmAq-5mmAq查看實驗室外負壓壓力表顯示值是否在設定範圍內。遵守人員、物品、廢棄物動線實驗程序個人平安衛生生物平安櫃的使用生物平安櫃外的實驗其他設備的使用個人平安衛生操作中手有任何污染之虞時，立刻更換外層手套。使用震盪器混合感染性液體時，手應執試管高於液面適當之高度處，混合液體才不會衝到蓋子。使用室內通話機、無線電話機必須先脫去外層手套才可手持話機通話。生物平安櫃的使用(I)實驗操作前，確定生物平安櫃氣流方向正確，負壓正常至少先開機運轉5分鐘，確認氣流穩定後再開始實驗操作。在生物平安櫃內操作時，防止破壞操作口之空氣屏障〔AirBarrier〕手盡可能減少進出動作，不能防止時進出動作要緩和，手臂進出時與生物平安櫃面板垂直。進出後須等1分鐘，氣流穩定後後才開始操作。防止其他人員在同一空間內移動或開關門生物平安櫃的使用(II)生物平安櫃內不可以有東西阻檔氣柵〔Grills〕盡量在離氣柵約10公分距離處操作實驗不可將物品儲存於生物平安櫃內生物平安櫃內不可放置太多物品，以免影響氣流生物平安櫃的使用(III)實驗操作完畢生物平安櫃至少持續運轉5分鐘，使污染空氣完全去除才可關機用含消毒液之紗布清潔生物平安櫃工作檯再用含無菌水的紗布擦拭幾次，以免不銹鋼腐蝕所有感染性廢棄物都必須丟棄在可滅菌之廢棄物容器，並置於生物平安操作櫃中，實驗結束後綁緊並取出滅菌關機後開UV燈。生物平安櫃外操作的實驗所有與傳染源有關的開放操作，都應在個人保護設施內的生物平安櫃或其他物理個人保護設備中進行，不許在開放的實驗台上進行工作。含病毒或結核菌之生物材料假设需凍結時，解凍前應先套上塑膠袋才可放進37℃恆溫水槽解凍，以防培養瓶龜裂並四處流散。將氣霧減至最低的方法培養液之更換或將上清液移至另一容器用吸管或震盪器混合液體滴加細菌懸浮液於固體培養基外表或製作染色抹片含病毒或結核菌之器具〔培養管、培養瓶、吸管或微吸管頭〕掉落檢體或菌液濺灑將可能含病毒或結核菌之檢體切碎或磨碎離心時試管破裂由注射器推出感染性液體吸管輔助器之使用使用具過濾器之吸管輔助器。使用過之吸管應退棄於含消毒液之容器。使用時因不慎受污染，應立即消毒處理並更換過濾膜，以防他人因不知而繼續使用。過濾膜應有備份置於實驗室內。微吸管頭之使用應選用有Filter之微吸管頭。使用過之微吸管頭應應退棄於含消毒液之容器。離心機之使用確認離心機蓋具平安設計裝置。檢視離心套管氣密蓋或Rotor蓋圓型墊環是否裝妥。確認裝在水平離心頭之套管是否一樣。確認所要用之離心管材質是否符合所要的轉速或離心力。平衡套管及離心物重量。確認套管與檢體已裝妥並成對角線位置。啟動離心，使用高轉速離心時應緩緩加速，不可急速轉到所要之轉速。完全停止前不可打開離心機超低溫冰櫃採用2.0ml保存管保存，封緊瓶口，容器外面清楚標示內容物。使用不銹鋼儲放架以便檢體之存取，減少佔用儲存空間。冰櫃內結冰時，或至少每年去除一次。病毒實驗室定期或每次進入時記錄溫度；結核菌實驗室每次進入時紀錄溫度。冰櫃內物品少時應置放冰寶〔冷媒劑〕，以維持溫度之穩定。取出之冰寶須滅菌丟棄。冰箱儲放冰箱內之培養基、緩衝液等液體類容器應緊閉瓶口並標示內容物、日期及儲放者。冰箱內置一溫度計以便溫度觀測及記錄。實驗告一階段應整理冰箱內之存放物，不用的東西一律高壓滅菌處理。冰箱內禁放具爆炸性之化學品。二氧化碳培養箱培養容器外表應標示培養物以利識別。隨時注意二氧化碳桶壓力錶，特別是例假日之前，防止二氧化碳耗盡影響培養物之生長。有培養物滲漏、污染時立即去除消毒。恆溫水槽注意水位不可低於電熱管，隨時添加水量定期清洗恆溫水槽。下班之前關閉不用的水槽加熱器。有感染物污染時水溫調高到75℃持續加溫一小時，待溫度降下後加消毒液，清洗，更換蒸餾水。傳遞箱定期擦拭傳遞箱內及UV紫外線燈管。定期檢測燈管紫外線強度，必要時更換燈管確保殺菌效果。工作中不可開紫外燈。尖銳物/玻璃製品實驗操作過程盡可能防止使用易傷手之尖銳物。非使用注射器不可時，用過之針頭不可套回針套。開冷凍乾燥菌種前，安瓶需先用玻璃切割器，切割欲折斷部位，〔手要戴防割材質手套〕，酒精棉擦拭後安瓶插入套管內，外面覆蓋滅菌紗布，才可折斷安瓶。使用注射器抽取感染性液後，如需排除氣泡局部，針頭必須朝上，插入底部填塞棉花之滅菌短試管，以防止產生氣霧。工作中意外割傷，應立即作處理並向平安管理人及實驗室負責人報告及製作記錄，以利追蹤監視。結束程序除污程序生物危害廢棄物之處理兩面操作高壓蒸氣滅菌鍋之使用實驗室平安個人衛生除污程序當天工作完，現場必須整理乾淨使用