(高清版)GBT 40641-2021 松针聚戊烯醇含量的测定 高效液相色谱法

松针聚戊烯醇含量的测定高效液相色谱法国家标准化管理委员会I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由国家林业和草原局提出。本文件由全国林化产品标准化技术委员会(SAC/TC558)归口。本文件起草单位：中国林业科学研究院林产化学工业研究所、中国标准化研究院、北京林业大学、浙江科技学院、南京林业大学、深圳市标准技术研究院、中山洪力健康食品产业研究院有限公司。1松针聚戊烯醇含量的测定高效液相色谱法本文件描述了用高效液相色谱法测定松针聚戊烯醇含量的方法。本文件适用于松科植物松针中的聚戊烯醇含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。松针聚戊烯醇polyprenolfrompineneedles从松科植物的针状叶子中得到的由一系列异戊烯基(isoprenyl)单元聚合构成的，具有不同链长的松针原料经石油醚热回流提取、皂化、石油醚萃取、硅胶柱层析、乙酸乙酯-石油醚溶剂系统梯度洗脱，再用0.22μm滤膜过滤后得澄清液，将酯变成游离的醇，经反相色谱柱分离后，用高效液相色谱仪测5试剂或材料本文件所用试剂除另有说明外，皆为分析纯，用水为GB/T6682规定的一级水；未指明用何种溶剂5.2石油醚(60℃~90℃),乙酸乙酯。5.35%氢氧化钠-甲醇溶液(质量分数):称取5g氢氧化钠，用95mL甲醇溶解，经0.22μm滤膜过滤。5.4聚戊烯醇标准物质：纯度≥99%。5.5聚戊烯醇标准储备溶液：精确称取500mg(精确到0.1mg)聚戊烯醇标准物质于50mL棕色容量2瓶中，加正己烷使其溶解并定容至刻度，混匀，此溶液可在温度低于4℃冰箱中冷藏保存两个月。5.6聚戊烯醇标准工作液：将聚戊烯醇标准储备液用正己烷稀释制备一系列标准溶液，标准系列浓度为0.10mg/mL、0.60mg/mL、1.00mg/mL、2.00mg/mL、4.00mg/mL、6.00mg/mL,临用时配制。5.7无水Na₂SO₄。6仪器设备6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。6.2分析天平：感量0.1mg。6.3粉碎机。6.4旋转蒸发仪。6.5水浴锅。6.6真空干燥箱。6.7干燥器。6.8层析柱：300mm×16mm(内径)。7样品7.1试样的制备将松针原料干燥(含水率不大于3%)处理后，用粉碎机将其粉碎，得到试样后，装入洁净干燥器中，于常温下密闭、干燥保存备用。7.2试样溶液制备精确称取试样10g(精确到0.1mg)于500mL圆底烧瓶中，加200mL石油醚，65℃下热回流2h;50℃下减压浓缩回收溶剂，得石油醚软膏抽提物；然后加入50mL5%氢氧化钠-甲醇溶液，于80℃水浴中皂化水解并搅拌3.5h,冷却；加水稀释至100mL,用石油醚萃取3次，每次100mL,合并3次石油将7.2.1中所得软膏用适量石油醚溶解后，上硅胶层析柱进行分离(上样量与硅胶质量比为1:30);先用石油醚洗脱4个柱体积，再用乙酸乙酯-石油醚(体积比4:96)溶剂洗脱8个柱体积，洗脱液减压浓缩回收溶8测定步骤8.1高效液相色谱参考条件高效液相色谱条件参考如下：GB/T40641—2021a)色谱柱：Cg,150mm×4.6mm(内径),粒径5μm,或相当者；b)流动相：甲醇-异丙醇(体积比9:16);d)进样量：5μL;8.2标准曲线的制作向液相色谱柱中注入浓度为0.10mg/mL、0.60mg/mL、1.00mg/mL、2.00mg/mL、4.00mg/mL、6.00mg/mL的标准工作溶液，在上述色谱条件下得到色谱峰面积(以C65、C70、C75、C80、C85为主要特征峰计算，下同),以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线。浓度为6.00mg/mL的标准工作溶液的高效液相色谱图参见附录A中的图A.1。8.3试样溶液的测定对同一试样平行做两份试验。向高效液相色谱柱中注入样品试验溶液得到色谱峰面积，根据标准曲线得到待测液聚戊烯醇的浓度。8.4空白实验除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行测定。9结果计算与表示试样中聚戊烯醇含量利用数据处理系统计算或按式(1)计算。式中：X——试样中聚戊烯醇的含量，单位为毫克每克(mg/g)c——试样中聚戊烯醇的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);50——试样定容体积，单位为毫升(mL);m——试样的质量，单位为(g)。测定结果以两次平行测定的算术平均值表示，计算结果保留至小数点后两位有效数字。样品吸收峰应在聚戊烯醇标准工作曲线的校准范围内，若样品吸收峰高于6.00mg/mL浓度的聚戊烯醇标准工作溶液的吸收峰，则应重新配制高浓度聚戊烯醇标准工作液进行校准。10精密度在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一