000革兰氏阴性需氧杆菌

第四章革兰氏阴性需氧杆菌

布氏杆菌又名布鲁氏菌,1887年Bruce从死亡士兵脾脏中分到第一株布鲁菌，可引起多种动物发病。主要寄居于肝、脾和淋巴组织内的单核细胞中，是胞内寄生菌。布氏杆菌属（Brucella）主要侵害：生殖器官和关节主要特征是：生殖器官、胎膜以及多种器官组织发炎、坏死和肉芽肿的形成，引起流产、不孕、睾丸及关节炎症等症状。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。一、形态及染色特性

球形、球杆形或短杆形，新分离者趋向球形。多单在，不形成芽胞和荚膜

，无鞭毛不运动。革兰氏染色阴性，但着色不佳。柯兹罗夫染色法染成红色，其他菌呈绿色或蓝色。

二、培养特性本菌专性需氧，在初代分离培养时尚需5%-10%CO2，泛酸钙和内消旋赤藓糖醇可刺激某些菌株生长。在培养基中加入少量血液、血清或肝浸液可促进生长，不溶血。生长缓慢，常需5-10d甚至

20-30d。液体培养基上呈轻微浑浊生长，时间长可形成很厚的菌膜；在固体培养基上有S、M、R型菌落，大小不一。

三、抗原性及变异性（一）属内抗原：A、M、R抗原光滑型布氏杆菌有A和M二种菌体抗原成分(外露的多糖侧链），是细菌的凝集抗原，各菌种含量不同。与S型菌发生交叉凝集。R抗原：非S型菌的共同抗原，不与S型菌发生凝集。变异：S→R丧失A、M抗原，暴露R抗原（二）属外抗原

可与巴氏杆菌、变形杆菌、大肠杆菌等属细菌发生交叉凝集反应。1）A抗原与M抗原是细胞壁表面的脂多糖蛋白复合物。光滑型布氏杆菌具有A和M两种表面抗原，两者含量有差异（约1：20），流产布氏杆菌以A为主，马尔他布氏杆菌以M抗原为主，分别能与相应的单项抗血清表现凝集反应。猪布氏杆菌两种抗原含量相近，可凝集两种单相抗血清。因此，可用凝集试验鉴别种和生物型2）R抗原为细胞壁中的脂多糖复合物。是大多数非光滑型布氏杆菌的共同抗原决定簇，其抗血清可与绵羊种和犬种布氏杆菌凝集光滑型菌株发生S到R的变异后，丧失A和M抗原后，暴露出R抗原，可与R抗血清发生凝集。绵羊种和犬种布氏杆菌是天然的R型种，其他种为S型。2、属外抗原是指布氏杆菌能与巴氏杆菌、变形杆菌、弗朗西斯杆菌、弧菌、弯曲菌、钩端螺旋体、假单胞菌、沙门氏菌、耶耳森菌和大肠杆菌等属的细菌发生交叉反应的抗原。五、变异性1、布氏杆菌最常见的变异是S→R变异，此种变异很少发生回变2、发生S→R变异后，细菌特异性多糖链发生改变，丧失A和M抗原。

3、变异细菌毒力减弱，凝集原性较差，对吞噬细胞缺乏抵抗力，同时易于发生自凝现象。

四、种及致病性（一）分类6个种

马耳他布氏杆菌Br.melitensis（羊型）1-3

流产布氏杆菌Br.abortus

（牛型）1-9

猪布氏杆菌Br.suis1-5

绵羊布氏杆菌Br.ovis

沙林鼠布氏杆菌

Br.neotomae

犬布氏杆菌

Br.canis其中1、2、3三个种危害最大，我国流行的也主要是这三种，其中以羊布氏杆菌病最为多见。：羊种天然感染羊，猪种天然感染猪，牛种感染牛但1、2、3可以互相感染，同时对人、马等动物都能致病，人类感染以羊种最多见，且毒力最强，猪种次之，牛种最弱布氏杆菌可通过胎盘、羊水、流产胎儿、乳汁、阴道分泌物、精液等排出体外，通过皮肤、伤口、消化道、呼吸道、眼结膜、交配等途径感染。主要致病物质有内毒素、荚膜和透明质酸酶。侵袭力强，可通过完整的皮肤、粘膜进入体内，并有很强的繁殖与扩散能力。动物体内常局限于腺体组织与生殖器官（与赤藓醇含量较高有关），故病畜主要表现为睾丸炎、附睾炎、乳腺炎、子宫炎等。孕期动物对布氏杆菌最敏感，感染后常引起流产。（二）致病性细菌学检查：柯兹罗夫斯基染色。血清学检查：用已知的布氏杆菌检查动物的血清抗体

凝集试验（虎红平板凝集试验）

感染初期检测。大动物血清凝集价达1：100时阳性，

1：25可疑；小动物1：50为阳性，1：25为可疑。补体结合试验

慢性布氏杆菌病诊断。规定1：10被检血清阻止溶血在50%以上即阳性。变态反应检测

不宜作早期诊断。布氏杆菌水解素注射，观察红肿反应。1-2cm为弱+；2-3cm为+；4-6cm为强+。

五、微生物学诊断微生物学诊断布氏杆菌病常表现为慢性或隐性感染，其诊断和检疫主要依靠血清学检查及变态反应检查，细菌学检查仅用于发生流产的动物和其他特殊情况。发达国家规定

凡涉及本菌样本检测应在生物安全2级实验室进行涉及本菌培养则需在生物安全3级实验室操作分离培养直接涂片、柯氏与革兰氏染色、显微镜检含菌量少的病料用肝汤或胰化酪蛋白大豆胨液增菌肝汤琼脂或胰化酪蛋白大豆琼脂或血平板直接划线纯培养生化试验血清学试验种及生物型的鉴定阳性者动物试验，豚鼠最易感，小鼠和家兔有低抗力病料（一）细菌学诊断——鉴定程序如下最好用流产胎儿的胃内容物、肺、肝和脾以及流产胎盘和羊水等。也可采用阴道分泌物、乳汁、血液、精液、尿液以及急宰病畜的子宫、乳房、精囊、睾丸、附睾、淋巴结、骨髓和其他与局部病变的器官。1、病料的采集及显微镜检查

病料直接涂片，作革兰氏和柯兹洛夫斯基染色镜检。若发现革兰氏阴性、鉴别染色为红色的球状杆菌或短小杆菌，即可作出初步疑似诊断2、分离培养鉴定加有放线菌酮0.1mg/ml、杆菌肽25IU/ml、多黏菌素B6IU/ml和加有色素的选择性琼脂平板。无污染病料肝汤琼脂或胰化酪蛋白大豆琼脂或血平板污染病料含菌数量较少的病料增菌培养每3d观察1次，如有细菌生长，可挑选可疑菌落细菌鉴定。如无细菌生长，可继续培养到30d，仍无生长者可认为阴性。两套培养大气环境5％-10％CO2环境，37℃培养挑取可疑菌落，做涂片、染色和镜检，确定为疑似菌后进行纯培养，以布氏杆菌抗血清做玻板凝集试验，以上两相试验结果并结合菌落特征，可做出布氏杆菌的诊断若动物一直未发病死亡，可于接种后5周左右扑杀豚鼠，进行同样检查。3、动物试验病料乳悬液豚鼠腹腔或鼠蹊部皮下注射每只1~2m1，（1）每隔7~l0d采血检查血清抗体，如凝集价达到1：50以上，即认为感染了布鲁氏菌。（2）皮肤过敏试验进行诊断。（3）动物发病死亡后，剖检取肝、脾、淋巴结及少许骨髓，进行细菌检查和分离。血清中布氏杆菌抗体检查病料中布氏杆菌检查两类方法。（二）血清学检查有多种检查方法归纳起来动物在感染布氏杆菌7~15d可出现抗体，检测血清中的抗体是布氏杆菌病诊断和检疫的主要手段。

大规模检疫时可采用操作较简便的方法进行初步筛选(初筛试验)，然后再用准确性较高方法予以复核(确定试验)。抗球蛋白试验琉基乙醇凝集试验琼脂扩散试验或酶联免疫吸附试验等国内常用玻板凝集试验虎红平板凝集试验乳汁环状试验现场或牧区大群检疫试管凝集试验补体结合试验实验室最后确诊作为疑难的病例辅助诊断方法。判断标准（1）牛、马、骆驼等大动物血清凝集价(或玻板试验中相当的凝集价)达：1：100时判为阳性1：50为可疑（2）羊、猪、狗等血清凝集价1：50为阳性1：25为可疑。（3）人血清凝集价1：100时为阳性。皮肤变态反应一般在感染后的20～25d出现，因此不宜作早期诊断。本法适于动物的大群检疫，主要用于绵羊和山羊，其次为猪。（三）变态反应检查感染初期阶段，凝集反应常为阳性，补体结合反应或为阳性或为阴性，变态反应则为阴性。到晚期慢性或恢复阶段，则凝集反应与补体结合反应均转为阴性，仅变态反应呈现阳性。因此，为了彻底消除各类病畜，应同时使用三种方法进行综合诊断。六、抵抗力1、对外界环境的抵抗力较强，在污染的土壤和水中可存活1-4个月，皮毛2-4个月，乳、肉食品中约2个月，粪便中120d，流产胎儿中至少75d，子宫渗出物中200d。

2、对湿热的抵抗力不强，60℃加热30min或70℃5min即杀死，煮沸立即死亡。3、对消毒剂的抵抗力也不强。临床表现

布鲁氏菌的主要临床表现与生殖道有关，一般情况下，动物不表现明显的全身性疾病。在雌性动物，流产是最普遍的表现，没有预兆的症状通常是明显的。对于公畜，附睾炎和睾丸炎是最普遍的症状，损伤通常是单侧的，但也可能是双侧的。公畜生殖道的感染导致生育降低，在一些情况下，导致不育。生殖道外症状表现在许多动物种类。感染猪布鲁氏菌的猪可能发展为关节炎，尤其在肢体的大关节或腰部脊椎。腰部脊椎的损伤导致在脊髓加压的组织坏死，并且导致后来的瘫痪。感染了犬布鲁氏菌的狗能够发生脑膜炎、骨髓炎和眼色素层炎。

人的布鲁氏菌病主要是一种网状内皮系统疾病。可能出现一种温和的淋巴结病，脾肿大和肝肿大。在暴露后的2—3周，开始出现症状。临床症状是非特异的，并且包括间歇性发热和盗汗的寒战，疲劳、肌肉和关节痛、背痛，压抑和失眠是普遍的。感染的特异性临床表现包括关节炎、骨髓炎和心内膜炎。九、免疫防治

目前研究认为,在绝大多数情况下,使用疫苗是控制牛、羊布病的有效方法。由于布氏杆菌主要为胞内寄生,抗生素对其效果甚微,机体的细胞免疫对抑制该病起了至关重要的作用。因此对布氏杆菌病疫苗的研究主要集中在筛选弱毒株,构建突变株以及寻找亚单位疫苗等方面。布氏杆菌的控制和预防手段依赖于所涉及的动物种、布鲁氏菌种、管理习惯、疫苗的利用和有效性。假单胞菌属一、鼻疽假单胞菌（一）致病性引起马、驴、骡、单蹄兽的鼻疽，也感染人和其它家畜。病变特征为皮肤、鼻腔粘膜、肺脏及其他实质器官形成典型的鼻疽结节和溃疡。strass反应：当接种细菌于雄性豚鼠腹腔后，可引起典型的睾丸炎和睾丸周围炎，睾丸肿胀化脓而破溃称为strass反应。（二）形态染色特征G－，矢直或微弯曲的中等大小杆菌，无运动性，无芽胞，无荚膜。（三）培养特性及抗原性（了解）（四）微生物学诊断主要采用变态反应检查和血清学检查，而细菌学检查具有在特殊病例中才应用，1．变态反应检查：是鼻疽诊断和检疫的最常用方法，所用的反应原是鼻疽菌素（马来因,mallein

）。方法：有5种方法，其中以点眼法最常用，将鼻疽菌素3-4滴滴入马匹一侧眼结膜囊内，分别于点眼后3，6，9，12，24h观察，若眼膜红肿并排出脓性分泌物则为阳性反应。2．血清学检查

方法：补体结合反应。此法特异性高，但敏感性不高，检出马匹多为活动性，对慢性病例只检出10-20%，所以它吸能作为对鼻疽菌素点眼试验阳性动物的附加诊断。(五）免疫防治无疫苗：采用全面检疫，检出阳性补杀或隔离。

伪鼻疽伯氏菌（过去叫伪鼻疽杆菌）引起人和动物的类鼻疽，表现为急性败血症，但也可以是皮肤，肝脏、脾脏淋巴结等处形成慢性的结节或脓肿病灶，与鼻疽相似。

铜绿假单胞菌（绿脓杆