输血科试剂质量管理操作规程

输血科试剂质量管理操作规程1、目的本文件规定了输血科所用试剂质量控制的相关操作程序，以确保输血科试验的质量，使检验结果更准确。2、适用范围本文件适用于医院输血科ABO血型、RhD血型、盐水交叉配血、凝聚胺交叉配血、柱凝胶法血型鉴定及交叉配血，新生儿溶血筛查试验，抗人球蛋白试验等试验项目检验过程的质量控制管理。3、职责输血科技术人员负责本实验室所用试剂质量的管理。4、内容：4.1ABO试剂红细胞质控4.1.1物理检查：参照质量标准要求，逐项肉眼观察并记录。4.1.2抗原性检测：⑴材料和试剂：待检红细胞；抗A、抗B试剂血清。⑵方法：将试管排成2列，每列9支。第1管加0.2ml待检血清，自第2管起每管加生理盐水0.2ml，将血清倍比稀释，加入相应的试剂红细胞悬液0.2ml，同时做红细胞悬液对照。置于18～22℃孵育15分钟，3400转/分离心15秒，肉眼观察。⑶结果：A型红细胞应与1：128倍稀释的抗A出现明显肉眼可见凝集，B型红细胞应与1：64倍稀释的抗B出现明显肉眼可见凝集。⑷抗原性要求：与1：128倍稀释的抗A出现肉眼可见凝集，与1：64倍稀释的抗B出现明显肉眼可见凝集。4.1.3特异性检测：⑴材料和试剂：待检红细胞；抗A、抗B试剂血清。⑵方法：按每列5支试管排成4列，第1、3列加抗A试剂血清0.1ml，第2、4列加抗B试剂血清0.1ml。在第1列试管中加入A型待检红细胞0.1ml，第2列试管中加入B型待检红细胞0.1ml，第3、4列试管中加入O型待检红细胞0.1ml，同时做红细胞悬液对照。置于18～22℃孵育15分钟，3400转/分离心15秒，肉眼观察。⑶结果见下表：ABO血型抗体特异性检测结果表待检血清标准红细胞凝集不凝集抗-AA、ABB、O抗-BB、ABA、O待检血清与相应红细胞的凝集应符合上表中要求，不得发生溶血。⑷特异性要求：A型红细胞与抗-A凝集，与抗-B不凝集；B型红细胞与抗-B凝集，与抗-A不凝集；O型红细胞与抗-A、抗-B均不凝集。4.1.4质控频率：每批1次，每次随机抽检1盒检测。4.2抗A、抗B试剂血清质量控制方法：4.2.1抗A、抗B标准效价检测：⑴材料和试剂：待检血清，A1,B型试剂红细胞（5%）。⑵方法：按每列9支试管排成2列，第1管加0.2ml待检血清自第2管起每管加生理盐水0.2ml，将血清倍比稀释，加入相应的试剂红细胞悬液0.2ml，同时做红细胞悬液对照。置于18～22℃孵育15分钟，3400转/分离心15秒，肉眼观察。⑶结果：抗体效价以产生“+”凝集的待检血清最高稀释度计算，不计红细胞悬液体积。两列试管终点相同作为待检血清凝集效价，并应符合以下要求，如两列终点相差一管，且效价均符合要求，则以凝集效价低的为终点；如两列终点相差一管，有一列效价不符合要求，则取双倍量待检血清复试。⑷抗体效价质量要求：抗A效价不应低于128，抗B效价不应低于128。4.2.2抗A、抗B试剂血清特异性检测⑴材料和试剂：待检血清；A1、B、O、AB型试剂红细胞（5%）。⑵方法：按每列5支试管排成2列，各管加待检血清0.1ml。在各试管中分别加入A1、B、O、AB型试剂红细胞（5%）0.1ml，同时做红细胞悬液对照。置于18～22℃孵育15分钟，3400转/分离心15秒，肉眼观察。⑶结果：结果见下表ABO血型抗体特异性检测结果表待检血清标准红细胞凝集不凝集抗-AA1、ABB、O抗-BB、ABA、O待检血清与相应红细胞的凝集应符合上表中要求，不得发生溶血。⑷特异性要求：抗-A与A、AB红细胞凝集，与B、O红细胞不凝集，抗-B与B、AB细胞凝集，与A、O细胞不凝集。4.2.3抗A、抗B试剂血清亲和力检测⑴材料和试剂：待检血清；A1、A2、B型试剂红细胞（10%），要求至少3人份同型红细胞混合配制。⑵方法：在玻片上加待检血清0.05ml，加入等体积的相应的10%红细胞悬液，充分混匀，面积直径要求10mm以上。立即记录肉眼可见的凝集时间和3分钟时的凝块大小。⑶结果：在3分钟时的凝块直径≥1mm。抗A血清与A1红细胞反应，出现凝集时间不超过15秒，与A2红细胞反应不超过30秒。抗B血清与B红细胞反应不超过15秒。4.2.4抗A、抗B试剂血清冷凝集素和不规则抗体测定⑴材料和试剂：待检血清；O型试剂红细胞（尽可能包含除ABO系统以外的红细胞抗原）3例，配制2%～5%悬液；B型试剂红细胞3例（测抗A用），配制2%～5%悬液；A型试剂红细胞3例（测抗B用），配制2%～5%悬液；抗人球蛋白。⑵方法：取试管排成3列，每列3支。在管中加待检血清0.1ml，再分别加入5%O型试剂红细胞0.1ml，混合后，第1列放置于37℃，孵育1小时，做抗人球蛋白实验。第2列放置于4℃，第3列放置于20℃，均孵育1小时，肉眼观察结果。以B型红细胞悬液取代O型红细胞悬液测定抗A，以A型红细胞悬液取代O型红细胞悬液测定抗B。⑶结果：全部试管均不得出现凝集或溶血反应，以及缗钱状、冷凝集、细菌性凝集和理化凝集等非特异性凝集。4.2.5质控频率：每批1次，每次随机抽检1盒检测。4.3抗D试剂血清质控方法4.3.1物理检查：参照质量标准要求，逐项肉眼观察并记录。4.3.2抗D试剂血清抗体效价检测：⑴材料和试剂：待检血清，Rh（D）阳性试剂红细胞（2%～5%）。⑵方法：按每列9支试管排成2列，第1管加0.2ml待检血清自第2管起每管加生理盐水0.2ml，将血清倍比稀释，加入相应的试剂红细胞悬液0.2ml，同时做红细胞悬液对照。置于18～22℃孵育15分钟，3400转/分离心15秒，肉眼观察。⑶结果：抗体效价以产生“+”凝集的待检血清最高稀释度计算，不计红细胞悬液体积。两列试管终点相同作为待检血清凝集效价，并应符合以下要求，如两列终点相差一管，且效价均符合要求，则以凝集效价低的为终点；如两列终点相差一管，有一列效价不符合要求，则取双倍量待检血清复试。⑷抗体效价质量要求：抗D效价不应低于128。4.3.3抗D试剂血清特异性检测：⑴材料和试剂：待检血清；RhD阳性和阴性试剂红细胞（2%～5%）。⑵方法：按每列5支试管排成2列，各管加待检血清0.1ml。在各试管中分别加入RhD阳性和阴性试剂红细胞0.1ml，同时做红细胞悬液对照。置于18～22℃孵育15分钟，3400转/分离心15秒，肉眼观察。⑶结果：待检血清应与RhD阳性试剂红细胞发生凝集，而与RhD阴性试剂红细胞不发生凝集。4.3.4质控频率：每批1次，每次随机抽检1盒检测。4.4微术凝胶卡和抗人球蛋白的质控方法4.4.1物理检查：参照质量标准要求，逐项肉眼观察并记录。4.4.2方法：选用IgG型抗-D致敏的红细胞做阳性对照，红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清做阴性对照，正常O型红细胞做空白对照。具体操作执行输血科相关检验项目的标准操作规程。4.4.3质控频率：每批使用前检测1次，每次随机抽检1盒检测。4.5筛选红细胞的质控方法4.5.1物理检查：参照质量标准要求，逐项肉眼观察并记录。4.5.2方法：用已知的弱抗血清检测，同时对试验样品平行检测。具体执行红细胞不规则抗体筛选试验标准操作规程。4.5.3筛选红细胞质量控制见下表：筛选红细胞质量控制表检验项目质量要求质控频率外观上清液没有溶血或混浊每天反应性和特异性与针对已知红细胞抗原的抗血清反应清晰效期内第1次及最后1次使用时4.6、凝聚胺试剂的质控方法4.6.1物理检查：参照质量标准要求，逐项肉眼观察并记录。4.6.2方法：用试剂盒提供的阳性对照品与O型Rh（D）阳性献血者红细胞做阳性对照，红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清加O型Rh（D）阳性献血者红细胞做阳性对照阴性对照。具体执行输血科相关实验项目的标准操作规程。4.6.3低离子盐溶液质量控制见下表：低离子盐溶液质量控制检验项目质量要求