(高清版)GBT 39999-2021 化妆品中恩诺沙星等15种禁用喹诺酮类抗生素的测定 液相色谱-串联质谱法

化妆品中恩诺沙星等15种禁用喹诺酮类抗生素的测定液相色谱-串联质谱法国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会IGB/T39999—2021本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。本标准起草单位：江苏省产品质量监督检验研究院、嘉文丽(福建)化妆品有限公司、无限极(中国)质量监督检测研究院、上海市日用化学工业研究所、上海相宜本草化妆品股份有限公司、欧诗漫生物股份有限公司、广州市娇兰化妆品有限公司、完美(广东)日用品有限公司、江苏省食品药品监督检验研究院、常州市食品药品监督检验中心、河北省食品检验GB/T39999—2021禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质。《化妆品安全技术规范生危害。1GB/T39999—2021化妆品中恩诺沙星等15种禁用喹诺酮类抗生素的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了化妆品中15种禁用喹诺酮类抗生素的液相色谱-串联质谱测定方法的原理、试剂或本标准适用于水剂类、乳液类和非蜡基膏霜类化妆品中依诺沙星、麻保沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、星和莫西沙星的测定。本标准不适用于粉类化妆品中喹诺酮类抗生素的测定。本标准15种喹诺酮类抗生素的方法检出限均为0.15mg/kg,定量限均为0.50mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中的15种喹诺酮类抗生素采用酸化乙腈提取，离心后合并提取液并浓缩，正己烷净化，用液相4试剂或材料4.50.1%甲酸乙腈溶液：准确量取1.0mL甲酸(4.3)至1000mL容量瓶中，用乙腈(4.2)稀释至刻度。4.60.1%甲酸溶液：准确量取1.0mL甲酸(4.3)至1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度。4.7定容液：准确量取10mL乙腈(4.2)和90mL0.1%甲酸溶液(4.6),混匀。4.9标准物质：纯度均不小于98%,15种喹诺酮类抗生素标准物质的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量及化学结构式参见附录A中表A.1。4.10混合标准工作溶液：分别准确称取适量标准物质(4.9)(精确至0.1mg),用乙腈(4.2)配制成质量浓度为1000μg/mL的单标标准贮备液(于4℃避光保存，可保存3个月)。准确移取各单标标准贮备2GB/T39999—20215.5离心机：最高转速不低于4000r/min。6试验步骤称取试样1.0g(精确至0.001g),置于15mL具塞塑料离心管中，加入8mL0.1%甲酸乙腈溶液(4.5),涡旋振荡1min,超声提取20min,4000r/min离心2min,取上清液。残渣用8mL0.1%甲酸乙腈溶液(4.5)重复提取一次，合并上清液，用0.1%甲酸乙腈溶液(4.5)定容至25mL。准确移取正己烷溶液(4.8),涡旋振荡1min,4000r/min离心2min,下层清液经滤膜过滤后供液相色谱-三重四极杆质谱联用仪测定。液相色谱参考工作条件如下：见表1;3GB/T39999—2021时间/minA/%B/%d)离子源温度：400℃;表215种喹诺酮类抗生素的质谱参数化合物保留时间/min子离子m/₃去簇电压/V碰撞电压/V碰撞室出口电压/V依诺沙星麻保沙星诺氟沙星氧氟沙星99氟罗沙星培氟沙星环丙沙星洛美沙星4GB/T39999—2021表2(续)化合物保留时间/min母离子m/≈子离子m/z去簇电压/V碰撞电压/V碰撞室出口电压/V丹诺沙星4.93358.1283.2恩诺沙星360.3316.39245.0奥比沙星396.2352.3295.3沙拉沙星6.11386.1342.2299.1司帕沙星6.21393.5349.2*292.2双氟沙星6.22400.3299.1莫西沙星6.81402.5364.5定量离子。将混合标准工作溶液(4.10),按高效液相色谱和质谱参考工作条件(6.2.1和6.2.2)进行测定，以定量离子色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的溶液浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。15种喹诺酮类抗生素标准物质的多反应监测色谱图参见附录B中图B.1。按高效液相色谱和质谱参考工作条件(6.2.1和6.2.2)测定试样溶液(6.1)。如果试样中待测物质的色谱峰保留时间与标准溶液的一致，并且在扣除背景后的试样质谱图中，所选择的离子均出现，而且选择离子的相对丰度与标准物质的进行比较，相对偏差不超过表3规定的范围，可判定为试样中含有对应的待测物。记录定量离子色谱峰的峰面积，以外标法定量。试样溶液中被测物的响应值均应在标准曲线的线性范围之内，超出线性范围的试样溶液可用定容液(4.7)适当稀释后进行测定。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差k>5050≥k>2020≥k>10k≤10士20士30士50除不称取试样外，均按6.1～6.2进行测定。5GB/T39999—20217试验数据处理试样中恩诺沙星等15种喹诺酮类抗生素的含量按式(1)计算：式中：X;———试样中被测组分的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);p;——从标准曲线得到的试样溶液中被测组分的质量浓度，单位为微克每升(μg/L);po——从标准曲线得到的空白样品溶液中被测组分的质量浓度，单位为微克每升(μg/L);V——试样溶液首次定容体积，单位为毫升(mL);计算结果保留两位有效数字。8回收率和精密度在添加浓度为0.50mg/kg～5.0mg/kg范围内，回收率为80%～110%,相对标准偏差小于10%。9允许差在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。6GB/T39999—202115种喹诺酮类抗生素标准物质的信息15种喹诺酮类抗生素的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量及化学结构式见中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量化学结构式依诺沙星Enoxacin74011-58-8C₁₅H₁₇FN₄O₃麻保沙星Marbofloxacin诺氟沙星Norfloxacin70458-96-7氧氟沙星Ofloxacin82419-36-1氟罗沙星Fleroxacin79660-72-3培氟沙星Pefloxacin70458-92-37表A.1(续)中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量化学结构式环丙沙星洛美沙星丹诺沙星Danofloxacin恩诺沙星奥比沙星沙拉沙星N司帕沙星CgH₂₂F₂N₄OHHH8表A.1(续)中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量化学结构式双氟沙星莫西沙星Moxifloxacin9强度/强度/eps强强度/强度/eps强度/强度/强度/eps强度/cps强度/cps强度/eps15种喹诺酮类抗生素标准物质的多反应监测色谱图15种喹诺酮类抗生素标准物质的多反应监测色谱图见图B.1。2.9e4依诺沙星4.132.0e43.04.05.06,07.08.09.0时间/min4.141.00e4麻保沙星1.02.03.04.05.06.07.08.09.0时间/min4.451.5e4诺氟沙星4.451.02.03.04.05.06.07.08.09.0时间/m14.464.7e4氧氟沙星1.02.03.04.05.06.07.08.09.0时间/min1.00c4氟罗沙星4.470.001.02.03.04.05.06.07.08.0时间/mn4.584.7e4培氟沙星4.581.02.03.04.05.06.07.08.09.0时间/min4.651.6e4环内沙星1.02.03.04.05.06.07.08.09.0时问/min4.894.0e4济美沙星2.0e40.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0时间/min图B.115种喹诺酮类抗生素标准物质的多反应监测色谱图4.0e4-2.0c4-0.04.0e4-2.0c4-0-1.0e5-0.0月诺沙星2.0思诺沙星2.(奥比沙星3.03.(4.05.06.07.08.09.0时间/min5.219.0)4.08.(6.07.05.09.0)4.08.(6.07.0时间/min6.09.04.05.06.09.04.077505000-L