第三节 动物的克隆课件

复习植物克隆的理论基础？

植物细胞的全能性植物细胞全能性体现的条件？离体、一定的营养物质和生长调节剂、适宜的其它外界条件植物克隆的常用技术手段？

植物组织培养、植物体细胞杂交植物组织培养的技术流程？在培养基中诱导植物细胞进行脱分化和再分化的物质是？

植物生长调节剂（如植物激素）制备原生质体的方法是？用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞诱导原生质体融合常用的化学试剂是？

聚乙二醇植物体细胞杂交的意义？

克服远缘杂交不亲和的障碍第三节动物的克隆

生姜是药食两用的经济作物，具有栽培容易、产量高、价格高等特点，近年在各地发展很快。但是生姜在生产上长期采用无性繁殖，容易感染多种病毒病，使生姜品质变差，叶子皱缩，生长缓慢，一般减产30%～50%。利用植物组织培养技术培养无毒生姜幼苗的关键环节是？第三节动物的克隆第三节动物的克隆第三节动物的克隆一、动物克隆的技术基础：

动物的细胞和组织培养

胰蛋白酶胚胎、幼龄动物组织器官（或病变的细胞）分散成单个细胞细胞悬浮液用培养瓶在培养箱中培养大量贴壁细胞细胞悬浮液胰蛋白酶剪碎细胞悬浮液细胞悬浮液分装……继续培养原代培养传代培养第三节动物的克隆原代培养与传代培养………………原代培养传代培养第三节动物的克隆细胞贴壁过程第三节动物的克隆细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间相互接触,细胞分裂和生长停止。接触抑制第三节动物的克隆细胞系

有限细胞系2N

连续细胞系（异倍体核型）不致癌保持接触抑制致癌

恶性细胞系细胞株有限细胞株连续细胞株细胞系、细胞株具有特殊性质原代培养物第三节动物的克隆克隆培养法（细胞克隆）最基本要求：保证分离出的细胞是一个而不是多个连续细胞系、肿瘤细胞的克隆易于原代细胞、有限细胞系提高细胞克隆形成率的措施:主要用途：从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系1948年，Sanford创建了单细胞分离培养法（克隆培养法）从原代培养或从细胞系中选出具有特定的生物学性质的细胞群，称细胞株。应用这一技术可以建立遗传性状相同的克隆细胞株。第三节动物的克隆动物组织培养技术的发展19世纪，萌芽。1885，鸡神经板在生理盐水中培养成功1903年，在腹水及血清中培养皮肤及白细胞，存活1个月，有细胞分裂1907，蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，看到了阿米巴运动，也创立了悬浮培养法1943，在致癌物的诱导下培养小鼠结缔组织，得到L-细胞系；此后，细胞克隆成功1951，建成海拉细胞系第三节动物的克隆

概念

指用自然或人工方法,使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。

不同基因型的细胞之间的融合就是细胞杂交。二、动物细胞融合技术及其应用第三节动物的克隆

诱导融合的因素生物法：灭活的仙台病毒诱导融合利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。化学法：聚乙二醇诱导融合因为聚乙二醇易得、简便，且融合效果稳定，是目前应用最广泛的方法。物理法：电激、激光诱导融合病毒颗粒黏附细胞表面细胞膜连接细胞膜被病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞第三节动物的克隆动物细胞融合技术的应用由于细胞杂交中染色体容易丢失，因此利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物减少的对应关系，可以进行基因定位。利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。第三节动物的克隆检测抗原用什么检测？相应的抗体

一般来说，医院如何检测人体内是否存在乙肝病毒？乙肝病毒模式图

第三节动物的克隆

第三节动物的克隆决定抗原特异性的特定部位----如1、2

由几个氨基酸组成，具有特定的空间结构第三节动物的克隆

人们如何获得针对某种抗原的抗体?传统的方法是什么？第三节动物的克隆第三节动物的克隆

用从血清中获得的抗体进行检验时，有时会出现假阳性。

没乙肝病毒的，被误检为有乙肝病毒。这是怎么回事？第三节动物的克隆

2

1ABC

用这样的抗体进行检测，特异性差。如何解决这一问题？血清中的抗体：第三节动物的克隆（单克隆抗体）单个B淋巴细胞细胞群克隆化学性质单一、特异性强的抗体产生一个B淋巴细胞只产生一种特异性抗体在体外：第三节动物的克隆单克隆抗体需要解决的问题：

B淋巴细胞如何在体外培养条件下无限增殖解决的方法：

利用动物细胞融合技术，使B淋巴细胞与一种能够在体外无限增殖的细胞融合骨髓瘤细胞第三节动物的克隆单克隆抗体

——极富创造性的方案1975年米尔斯坦与科勒合作研制出了单克隆抗体技术，于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。单克隆抗体技术几乎对生理学和医学的所有领域都产生了深远的影响，给许多疾病的诊断和治疗带来革命性的变化。柯勒(1946～)德国免疫学家米尔斯坦(1927～2002)阿根廷裔英国生物化学家第三节动物的克隆动物免疫分离B淋巴细胞细胞融合——淋巴细胞杂交瘤的制备杂交瘤细胞的筛选克隆能产生抗体的细胞单克隆抗体的纯化单抗的制备过程第三节动物的克隆单克隆抗

体的制备动物体注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞能产生特定抗体的杂交瘤细胞群获得足够量的细胞从培养液中提取抗体从小鼠的腹水中提取抗体获得细胞融合筛选细胞培养筛选继续培养体外培养体内培养B淋巴细胞—B淋巴细胞骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞杂交瘤细胞多种杂交瘤细胞特定的选择培养基抗体检验（多次）第三节动物的克隆单克隆抗体的应用疾病诊断、治疗和预防——如单抗诊断盒用单克隆抗体与抗癌药物连接，用于治疗癌症

——“生物导弹”“人T淋巴细胞亚群双色荧光标记单抗分型试剂盒”单克隆抗体药物Zevalin第三节动物的克隆单克隆抗体的优点：可以从特异性抗原成分比例极少的抗原混合物中，获得单一类型的抗体。特异性强，灵敏度高。第三节动物的克隆动物细胞全能性的表现程度比较以下细胞的全能性：

受精卵、二分裂球细胞囊胚细胞、多能造血干细胞单能造血干细胞、人的消化细胞

细胞具有全能性多能细胞单能细胞高度分化的体细胞癌细胞可以分化为各种正常的体细胞三、动物的克隆繁殖第三节动物的克隆动物的基因组中，一类基因是维持生存的，在各种细胞中都处于活动的状态。另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。分化的细胞内基因的活动很不完全，因此很难像受精卵那样发挥细胞全能性。胚胎细胞克隆比高度分化的体细胞克隆要容易得多。动物难以克隆的原因第三节动物的克隆核移植和动物的克隆核移植：利用供体核来取代另一个细胞中的细胞核。去核注核重组细胞第三节动物的克隆1.说出“多莉”的产生过程3.多莉的成功证明了什么？2.多莉羊的培育用到了哪些细胞工程技术?动物细胞、组织培养；胚胎移植；核移植第三节动物的克隆第三节动物的克隆第三节动物的克隆动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于（）A、培养基不同B、动物细胞培养不需要在无菌条件下进行C、动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能D、动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株A第三节动物的克隆世界上第一只克隆绵羊“多莉”的培育等程序如图所示。请仔细看图后回答问题：黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊卵腺细胞核重组细胞早期胚胎另一头母绵羊子宫克隆绵羊多莉ab电脉冲处理妊娠、出生⑴写出ａ、ｂ所指的细胞工程各称：ａ

ｂ

。⑵实施细胞工程ａ时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判断依据：

。⑷继植物组织培养之后，克隆绵羊培育成功，证明动物细胞也具有

。⑸请举例说明克隆绵羊培育成功的实际意义：。第三节动物的克隆植物细胞和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质培养基特有成分培养结果应用（举例）细胞的全能性细胞增殖固体培养基液体培养基蔗糖植物激素葡萄糖动物血清植物体细胞株、细胞系如：快速繁殖、培育无病毒植株如：获得细胞或细胞分泌蛋白第三节动物的克隆植物体细胞杂交和动物细胞融合得比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理诱导方法用途（举例）细胞膜的流动性、植物细胞全能性细胞膜的流动性物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒获得杂种植株等制备单克隆抗体等第三节动物的克隆单克隆抗体的制备运用了哪些动物细胞工程技术？

动物细胞培养、动物细胞融合B淋巴细胞是否是效应B淋巴细胞？细胞融合的方法？选出杂交瘤细胞灭火的仙台病毒或PEG杂交瘤细胞的特点？

继承了双亲细胞的遗传物质，不仅能分泌特异性的抗体，还能在体外