电镜技术-第5次课

第三章超薄切片术(theTechniquesofUltrathinSection)超薄切片术是最根本的透射电镜样品制备技术，需要借助超薄切片机制备样品，切片的厚度小100nm(一般30~70nm及其功能的有力工具。它分为一般超薄切片术和冷冻超薄切片术两大类。电镜样品必需满足一些根本的条件才能用于观看第一为保持电镜工作真空和样品在真空下不损伤，样品必需彻底枯燥。其次电镜所成的图像是黑白图像，要求图像有肯定的反差，而生物样品供给的反差低，样品要进展提高反差的处理，如电子染色和金属喷镀等方法。都会使图像模糊。所以要求透射电镜样品肯定要薄。同时考虑到反差，一般认为在50~1OOkV5OO第四样品应当能耐受电子束的猛烈照耀，在电镜观看程中不发生变形和升华等损伤。制备好的超薄切片，应当满足如下要求细胞的精细构造保存良好，没有产生明显的物质的凝集、丧失或添加等人工效应500Ǻ1000Ǻ切片能耐受电子束的猛烈照耀电镜观看过程中，包埋介质不发生变形或升华切片应具有良好的反差切片均匀，并且没有皱摺、刀痕及染色剂沉淀等缺陷超薄切片主要步骤杀死组织，同时把从细胞间的联系直至细胞器的分子构造的全部组织的精细构造真实地保存下来2.脱水从组织中除去游离水分，并用一种既能和水又能和渗透液相混的惰性液体取代组织中的水。3.块染使组织某些成分结合重金属离子，引起电子散射力量差异，提超群微构造电镜图像的反差。4.渗透和包埋用另一种溶液或混合液取代脱水液。它们很简洁硬化成固体，并且有足够的弹性，以切出5OOA的平薄切片。５.聚合渗入组织里的包埋液变硬，以便形成一个能结实地支持组织的固态基质，而不混乱其空间联系。６.切片将带有组织的固态基质(称为“包埋块切成500Ǻ 左右的超薄切片。７.安放把单张或切片带移到样品支持载网上，以便放入电子显微镜中观看８.切片染色使载网上切片和重金属溶液反响，以增加组织成分的电子散射力量９.镜检把有样品切片的载网放人电子显微镜中观看，可得到样品的电子显微镜图像和照片。80%70样品90%100%修块超薄切片染色超薄切片的样品制备流程一、取材预备工作取材原则预备工作取材时需预备各种溶液、玻璃器皿及器件所需溶液主要有缓冲液，戊二醛、锇酸30%丙酮，50%丙酮，70%丙酮，80%丙酮，95%100%丙酮分别用于滴加戊二醛、缓冲液、锇酸、脱水剂、包埋剂、废弃溶液的玻璃吸管，小称量瓶，载玻片和封口膜，双面刀片和医用剪刀，一般镊子及游丝尖镊，用于转移组织的牙签。此外，还需预备双目解剖镜为得到超微构造保存良好的样品，从第一步取材就需重视操作中应留意的问题，如选择锐利切割器械、织块大小适中、固定液温度适宜等取材原则动作快速 组织离体后，应将其快速放人化学固定液内，使组织和细胞尽可能保持原来的生活状态〔动物材料半分钟或最多2分钟内减小损伤选择锐利切割器械，避开或尽量削减牵拉或挤压组织。组织块小为使组织得到均匀而充分固定，所取材料一般要小于lmm3。低温操作 为削减对组织细胞酶活性的破坏，最好在4℃下操作，所用容器、器械及戊二醛固定液均需预冷。在血液供给停顿后，防止组织和细胞内各种酶的作用使组织发生自溶，降解组织中蛋白、核酸等主要成分。二、固定固定的定义和目的固定方法影响固定效果的因素固定剂常用的固定操作法固定的定义和目的定义：固定是指用物理或者化学的方法快速杀死细胞的过程。目的：防止组织细胞的离体后变化，防止自溶，以保持组织细胞的成分和构造与其生活状态尽量全都。在固定以后的漂洗、脱水和包埋等样品处理过程中，保护样品使其物质不致溶解和流失。为样品以后的处理〔包括染色和和经受电子束轰击〕作预备，使其组织适当地硬化。固定方法物理固定法用高温、冷冻、微波、枯燥等物理手段，使细胞构造固定。化学固定法承受化学试剂来固定细胞构造。这种方法应用的较广泛。常用的固定剂有甲醛、戊二醛、四氧化锇、高锰酸钾及重铬酸钾等等在化学固定中，固定液和样品作用，使细架间的流淌蛋白质凝固，以保存各种细胞器的空间联系。同时，使细胞的全部组成成分，如核酸、蛋白质、核蛋白、糖类和脂类等变为不行溶解的物质。另外，固定剂中常有重金属原子，其和组织成分用，可提高电子反差。３.影响固定效果的因素固定液的渗透速度固定液浓度固定温度固定时间组织块大小固pH固定液渗透压缓冲液固定液的渗透速度抱负的固定液应能快速将组织细胞杀死，并使之收缩和膨胀量最小。细胞被杀死的速度主要取4mm/h2mm/h>(0.1～０.5)mm/(1～１.5)h固定液浓度及固定时间，可增加渗透速率;灌注固定也是加快渗透速率的有效途径。致密组织会使固定液渗入缓慢，组织内空气多或外表含蜡，也会阻碍固定液渗入，甚至使组织漂移在固定液面上。消灭这种状况，可在固定前抽气，或用稀释的去垢剂处理。固定液浓度组织细胞中蛋白质之间的交联受固定液浓度影响较大。假设固定液浓度过低，则需较长时间固定，这易引起组织中酶的集中，造成细胞物质的抽提。过高浓度固定液，尤其氧化固定剂类易损坏酶活性和细胞构造，使细胞过度收缩。因此，1.5%~4%胎组织，或泡状物较多的肺组织时，可用稍高浓度的固定液。固定温度戊二醛固定液与组织之间发生的反响随温度增加而 强室温下固定组织，可提高固定液渗透速率，较好保存细胞中的微丝和微管。低温下固定组织，可减小线粒体和细胞质颗粒体积变化，降低酶的活性，削减细胞自溶及胞内物质的抽提。灌注固定取材时，假设固定液温度低于体温，将会引起血管收缩，导致固定效果较差。某些致密样品不适合在低温下固定。另外，当组织放在冷的锇酸固定液时，微管构造将会丧失。通常，固441-4h。固定时间固定的最正确时间应由固定液和缓冲液类型、样品种类及大小、固定温度及固定液浓度等因素打算。假设组织固定时间过长，会造成某些成分抽提。由于化学固定剂引起的抽提作用随时间延长而渐渐积存，故确定适宜的固定时间格外重要。锇酸固定时间的掌握比戊二醛严格。由于，组织经 锇酸长时间固定会引起脂蛋白复合体溶解，造成组织变脆，而不利于超薄切片。通常，锇酸固定时间为15min~2h。单个细胞或颗粒状样品，固定时间应缩短;构造致密的样品，固定时间应延长。组织块大小组织固定不好的缘由，多为组织块偏大或是延迟了组织放入固定液的时间。只有组织块较小才能得到 快速均匀的固定。锇酸固定液的均匀固定深度为0.25mm，戊二醛的均匀固定深度为0.5~lmm。一般来讲，组织块表层固定效果较好，但表层易有机械损伤。组织中心虽无机械损伤，但固定效果不够好。所以，取材时要求尽可能将组织块切小，使组织表层及中心部位均得到良好固定。对于组织表层的机械损伤，在修整包埋块时可适当修除一薄层。pHpHpHpHpH平均为7.4。试验中，不同组织需用不同pH的固定液。含水量高的动物组织，如原生动物、海生无脊椎动物以及胚胎组织需用pH8.0~8.4固定液;胃黏膜组织需用pH8.5pH6.8~7.1pH6.2固定液渗透压固定液渗透压对组织固定效果的影响不容无视。为此，通常用电解质物质氯化钠或非电解质物质蔗糖、葡萄糖等调整固定液的渗透压，以使组织得到良好的固定。固定液假设是等渗的，渗透速度则比较慢;假设固定是高渗的，将会引起组织收缩;假设固定液是低渗的，将引起组织细胞膨胀。样品制备时，假设样品为培育细胞，应考虑细胞培育液与固定液渗透压是否全都，假设固定液渗透压低于培育液渗透压，将导致细胞膨胀裂开。所缓冲液缓冲液在组织固定中的作用比较简单。为维持细胞本身的pH良好的固定质量，正确使用及选择缓冲液格外重要。有些缓固定液发生反响，降低缓冲液和固定液两者效力还有些缓冲液抽提组织中物质。假设在预固定时末用缓冲液，组织的pH则会急剧下降，使组织产生大量人为假象。不同组织对同一种缓冲液反响不同，而相近组织对不同缓冲反响也不同。因此，应依据试验要求选择缓冲液。４.固定剂固定的目的要求抱负固定剂应具备以下条件:能快速而均匀地渗透到组织内部，并能马上杀死细 胞，以尽量削减死后变化能使各种构造成分凝固或变性，并稳定，以保证在后继的各种处理过程中不致消逝能保存肯定的酶活性，以供细胞化学的测定对细胞没有收缩或膨胀作用，以保持各种构造在生活时的外形没有人工假象，以保证电镜图像的真实性有防腐作用，以利于较长期的保存样品。固定剂的种类及性能锇酸戊二醛甲醛高锰酸钾丙烯醛１〕四氧化锇四氧化锇是一种淡黄色结晶，具有特别的臭味，习惯上称为锇酸，它的水溶液呈中性，所以正确的应称为四氧化锇。它是一种强氧化剂，有毒性，其蒸气对眼、鼻、喉等粘膜有猛烈的刺激作用，水溶液能烧伤皮肤。四氧化锇优点几乎和细胞内全部成分发生化学结合，在细胞内结实地吸附在为其所稳定的构造上，把构造图像能较完善地刻画出来。蛋白质发生化学结合时，形成交链，而不是沉淀，以稳定蛋白质。因此能较完好地保存生物微细构造。它能保护脂肪，与脂肪的不饱和脂肪酸结合，形成脂肪-锇复合物。是现在全部固定剂中唯一的脂肪性物质的固定剂。虽然对碳水化合物保护较差，但对组成细胞支架的磷脂蛋白质保护很好。对核酸保护作用差，但对核蛋白保护很好。锇的原子序数高，为76，对生物样品有电子染色作用。对缓冲液要求不高经过四氧化锇固定的组织，既不收缩，也不膨胀，亦不变硬或发脆，有利于超薄切片。四氧化锇的缺点不能保护糖原，不能固定核酸，对微管固定作用较差。不适于进展超微细胞化学方面的工作。子量大，渗透力量差，大于lmm３的组织块固定不完有挥发性，对粘膜有毒性作用，吞食或经皮肤吸取可能致命，有强刺激性。2〕戊二醛戊二醛优点对组织的穿透力量较强、较快，组织块可适当增大到数毫米，也不影响固定效果。对蛋白质反响较快，能较好地保存蛋白质。对糖原、核蛋白，尤其是微管、内质网等细胞膜系统构造和细胞基质有较好的固定作用。保存肯定的酶活性，适于做超微细胞化学争论。不挥发，但简洁经皮肤吸取，对皮肤、眼睛、粘膜及上呼吸道有刺激性。样品在冷戊二醛固定液中数周到数月，不致产生不良后果，为野外工作和远离试验室的现场取材，供给大便利。戊二醛缺点对脂类保护不好。经戊二醛单独固定的组织，在脱水时大局部脂类会被脱水剂抽提而丧失。另外它不能供给电子反差，对缓冲液的要求也较高。固定，再以四氧化锇固定液后固定。可以使两种固定剂相互补充，样品取得良好的固定效果。因戊二醛和四氧化锇混合会形成沉淀，所以戊二醛固定后，必需用缓冲液充分洗涤后，才能将组织块转人四氧化锇后固定。戊二醛和醋酸-巴比妥缓冲液相互反响，所以戊二醛的缓冲液不能承受醋酸-巴比妥缓冲液。为充分发挥戊二醛固定效果，使用和储存过程中应留意以下凡种因素的影响pHpHpH3.5力也将大幅度降低。有试验说明，纯戊二醛溶液pH54℃或更低温度可保持稳定状态几个月，如在-146个月不会消灭聚合现象。氧气和浓度氧气对戊二醛溶液的影响较大，所以，无论是纯的还是与缓冲液混合的戊二醛，均应密封保存。另外，浓度大50%的戊二醛溶液在室温下简洁聚合成胶状，因此保存低于4%的溶液较稳妥。杂质污用缓冲液或水稀释戊二醛溶液时，因某些杂质污染，能产生白色沉淀物。故此，在配制戊二醛固定液时，应确保玻璃器皿及水的干净。3〕甲醛甲醛为无色气体，溶于水，37％~40%的水溶液为福尔马林，甲醛曾作为早期电镜工作的固定剂，但当它浓度过高时，或脱水时会使细胞中某些物质因解固定而流失消灭空洞现象，对细胞超微构造保存不好。甲醛在溶液形式下会形成长度不均的聚合物，会影响交联效力和渗透速度，曾被淘汰。甲醛有以下优点：渗透速度比戊二醛还要快，固定快速，组织块大小不受限制；对酶活性存比戊二醛好；济便利。现在还是承受，但一般不单独使用，通常作为四氧化锇和戊二醛的前固定剂，或和戊二醛组成混合固定液。4〕6%，呈赤紫色溶液，它也是一种强氧化剂。高锰酸钾的特点是磷脂蛋白的优良固定剂，空间关系保存好。对神经髓鞘、脂质固定特别好，是细胞膜构造的良好固定剂。对叶绿体的构造固定也好。对生物样品有电子染色作用。高锰酸钾对细胞的其它成分固定不好。对细胞内颗粒性或纤维状构造固定效果欠佳，有些组织构造将会在固定期间和脱水过程中发生变化，如线粒3%高锰酸42h，用缓冲液冲洗几次后过夜，然后按标准步骤脱水。另外，用高锰酸钾固定的组织，一般不需用锇酸后固定。高锰酸钾也可以作为戊二醛的后固定剂。5〕丙烯醛丙烯醛(C3H4O)为单醛。与大多数固定液相比，其渗透和反响速度均较快。稍大一些的组织块可用丙烯醛作固定液。丙烯醛与戊二醛混合液可较好保存微管。当丙烯醛暴烯醛易燃，是危急化学品，可由呼吸系统吸人，通过皮肤吸取，并对皮肤有猛烈刺激作用。5、常用的固定操作法动物组织固定动物组织取材通常承受灌注固定和浸入固定两种方式。灌注固定可使组织得到快速、均匀而充分的固定，细胞成分稳定，构造形态变化最小。浸人固定则存在某些缺乏。如解剖时，动物血压的快速变化可导致组织体积转变;动物缺氧和死后变化可引起组织形态转变;组织外外表的固定可阻碍固定液进一步渗人;由于戊二醛和饿酸渗透力量有限，往往便尺寸偏大的组织中心部位得不到充分固定。尽管浸入固定有很多弊端，但因其操作简洁便利，假设能较好把握取材方法，如解剖动物动作尽可能快速，剪下的组织块尽可能小些，并尽可能快地放入固定液等，也能得到较好的固定效果。故仍有许多组织样品实行这种固定方式。例如皮肤和骨组织在血液供给停滞后，可短时间保持其结构不变，较适合承受浸人固定方式。浸入固定将动物麻醉或急性处死，解剖所需器官，用锐利洁净解剖剪刀取下小块组织，放入预冷2.5%lmmхlmmх3mmlmm31-2h5102.5%0.lmol/L(PBS)315min11~2h。灌注固定灌注固定需经血液循环途径，使所需组织或器官得到良好固定。如猎取动物肝脏组织时，先将动物麻醉，解剖后使心脏和肝脏暴露，将注射器针头插人左心室，注入漂洗液，同时将右心房剪开，通过体循环冲洗大约30S，当肝脏从深棕黄色变成淡棕黄色时注入固定液，待组织适度变硬后，用剪刀取下一块组织，切成小块后放入预冷固定液。组织临时储存为削减细胞物质丧失，取材后应马上进展固定和包埋等一系列操作程序。但在外科手术中意外猎取的组织，手头又缺乏用于电镜样品制备药品和设备时，则需将组织材料临时储存。用于储存组织材料的固定液种类则取决于样品大小和争论目的。较小组织可短时间储存在3mm4%1%戊二醛固定液中;2~3cm材料需放在渗透效果较强的丙烯醛或甲醛固定液中，10%多聚甲醛0.2mol/L三甲基吡啶缓冲液一般用于较大组织的固定，但这种固定液可能会抽提组织成分。已用醛类固定的组织材料不宜在缓冲液中储存。体外培育细胞的固定单层细胞2%戊二醛固定液后放在3~5min3m12023r⁄min15~2Omin2%戊二醛固定液缓慢参加细胞，固定液参加量按1515~3Omin1-2115-3Omin。悬浮培育细胞离心法 在培育液中参加等量固定液，离心使细胞分散成团。假设细胞离心后仍呈絮状，轻轻吸去上清液后，于沉淀物中加几滴溶化的2%琼脂或牛血清白蛋白，以促使细胞分散。琼脂预包埋法将经固定液固定的细胞悬液离心，弃上清液后，在50℃水浴中将细胞团加热，用的吸管吸一滴已加热溶化并冷却至50℃的琼脂，滴入细胞团中，使细胞悬浮。为避开琼脂凝固，将细胞放在保温的离心管中，在3000~5000r⁄min条件下离心lmin。在离心管置于冰浴条件下，参加70%乙醇，停留1h。当细胞团被琼脂包埋后，取出并切成小块，用常规方法进展双重固定。琼脂铸模法该方法可将分散样品高度浓缩在微小空间内，不仅适制备悬浮培育细胞，而且适合制备细菌、蓝藻、原生动物和花粉等细小分散的生物样品。藻类细胞的固定淡水藻细胞颖的淡水藻细胞，固定液戊二醛和锇酸通常0.025mol/LPBS配制。海藻细胞因渗透压对海藻细胞的影响，溶液配制与样品制备均不同于淡水藻。不管是淡水藻还是海藻，分布均较分散，为将分散样品浓缩在微小空间内，可用琼脂铸膜法制备样品。植物材料固定取材时应先将组织切成薄片状，然后切成lmm3小块。组织放入戊二醛固定液后，需用真空泵抽出组织内部的气体，使材料沉人固定液中。植物材料固定液浓度与固定时间与动物材料不同。戊二醛固定液浓度一般为0.5%~12%，大2.5%~5%.6.固定方式戊二醛一锇酸双重固定法本法可充分发挥戊二醛与四氧化锇二固定剂的优点，有利于保存细胞内各种微细构造，所以现在被普遍承受，其操作步骤是：将生物样品先浸入预冷(42%~4%1~2现0.6~2〔)1％锇酸室温下后固定1~2小时。样品经戊二醛固定后呈淡黄色，再经锇酸固定后则变成黑色。混合固定混合固定是将适当浓度戊二醛和饿酸固定液混合，并同时对组织进展固定的一种方法。在双重固定方法中，锇酸固定前需用缓冲液将组织中残留戊二醛漂洗干净，以免其与锇酸作用产生微小沉淀。而在混合固定方式中，将戊二醛和锇酸两者混合，对组织构造同时发挥各自的固定作用，不会有沉淀产生。双重固定与混合固定，虽然均是戊二醛和锇酸在组织中起固定作用，但因操作方式不同，这是可否产生沉淀的关键。两者反响生成沉淀存在滞后时间，滞后时间长短与固定温度有关，温度越低，两者反响的滞后时间越长。混合固定的优点可防止膜中脂质移动，尤其可防止流淌性脂质的变化。该固定方式可使膜构造清楚，可良好保存核蛋白、脂质和多糖。颗粒状和泡状构造较清楚，但糖原可能有所削减。对单个细胞构造的保存，明显好于双重固定。假设在脱水前用2%醋酸双氧铀对组织进展后固定，则利于样品构造保存，并能增加反差。适合纤毛虫、四膜虫及简洁裂开构造的保存。混合固定的缺点当两种固定液同时固定组织时，它们各自的固定效果将有所减弱;两者对氨基酸残基的交联有竞争现象;混合固定液对蛋白质的交联作用不及单独用戊二醛三、脱水１.脱水的定义：脱水是指将组织内所含的游离水完全去除过程，属于包埋前必经步骤。２.脱水的必要性〔１〕才能保证包埋剂完全深入生物样品内。〔２〕假设含有水分的生物样品进入电镜的高真空中，样品就会急骤收缩并放出水蒸气，这样就会使电镜的高真空遭到损坏，并且造成镜筒的污染。３.常用的脱水剂及脱水程序抽提取代;假设脱水急骤，常易引起组织块中渗透压等条件的猛烈变化，样品消灭猛烈收缩，会导10~1551具体的脱水程序彻底清洗样品 30分钟以上(中间换缓冲液数次)30％乙醇或丙酮 10~15分钟50％乙醇或丙酮 10~15分钟70％乙醇或丙酮 10~15分钟(如因工作安排关系，4℃冰箱内过夜)80％乙醇或丙酮 10~15分钟90％乙醇或丙酮 10~15分钟100％乙醇或丙酮230游离和培育细胞的脱水时间可适当缩短。４.脱水时的留意事项脱水肯定要彻底，特别是100％乙醇或丙酮应确定保证无水，为此可事先参加吸水剂(如无水硫酸钠、无水硫酸铜等)进展吸水处理。假设当天完不成浸透、包埋操作时，应将样品停40C、7070％的浓度时所引起的组织块体积变化最小。高浓度的脱水剂，尤其100％脱水剂中决不行停留过夜，不仅可引起组织内过多物100％脱水时，更要留意样品块不要在空气中停留时间过长，否则会造成样品枯燥，使样品内产生小气泡致使包埋剂难以浸透。潮湿季节在空气中暴露时间过长也会吸水受潮。四、浸透１.浸透的定义：是用一种溶液或混合液渐渐取代组织内的脱水剂，使细胞内外全部空隙被这种溶液填充。.〔经过脱水处理后的样品，即可用包埋剂进展浸透〕样品中的脱水剂，使细胞内外全部空隙都被包埋剂所填充。３.浸透的技术操作由于包埋剂的粘度要比脱水剂大得多，所以要用环氧丙烷与包埋剂配制不同比例的浸透液，使浸透液的粘度渐渐增加，以提高样品的质量。环氧丙烷能与环氧树脂类的包埋剂较好地混溶，有助于到达逐级浸透的目的。浸透液的配制和使用方法如下:环氧丙烷:包埋剂=3:1(V/V)30~60分钟环氧丙烷:包埋剂=1:1(V/V)30~60分钟环氧丙烷:包埋剂=1:3(V/V)30~60分钟100%包埋剂 1~2小时五、包埋１.包埋的定义：是将浸透好的样品块放到适当的模具中，灌上包埋液包埋，经加温聚合形成一种固体基质，结实地支持组织，又不混乱其空间联系。２.包埋的目的：一方面要支撑样品本身的超微构造，另一方面使能切片。３.抱负的包埋剂应当具备以下条件能与脱水剂(乙醇、丙酮等)完全混溶粘度低、易操作、而且易于渗入样品内部聚合后质地均匀，体积变化小。能耐受电子束的照耀与轰击在浸透过程中，对细胞成分抽提少，可保存其微细结在电镜高倍放大下，不显示包埋剂本身的任何微细构造包埋后具有良好的切片性能，包括均匀性、可塑性、硬度和弹性等对人体无毒害作用广且材料来源丰富，操作简便，价格廉价。常见的包埋介质的缺点聚合损伤:包埋介质渗透到组织中而引起组织过分膨胀所造成的 组织损伤。用甲基丙烯酸酯包埋时，聚合损伤严峻，达15%~20%，环氧树脂和聚醋树脂较小些，仅2%。电子束损伤有的包埋介质在电子轰击下会蒸发，或分解，损伤样品的超微构造。收缩损伤包埋介质在聚合时因聚合反响而引起的体积收缩，对样品的损伤叫收缩损伤。粘度损伤树脂都是格外粘稠的液体，操作时很不便利。包埋液中的各成分因太粘稠很难混合均匀。另外搅拌时很难避开产生气泡，最终都将影响包埋效果。渗透压损伤毒性４包埋剂的种类１〕甲基丙烯酸酯1949Newman期对超薄切片起过很大的推动作用。其优点是粘度低，极易浸透，具有良好的切片性能及良好的反差；但因其本身的缺点：聚合后收缩率大，造成样品损伤，在电子束的照耀下易升华，并导致组织构造破坏和镜筒污染，现在根本上不承受了。不过，有人有时还用它作为某些样品的包埋介质，如在电镜细胞化学中有时应用它。２〕环氧树脂类这是当前承受最多的包埋剂。它具有三维交联构造，包埋后可保存细胞内的微细构造，2％左右)，耐受电子束轰击性能好。其缺点是粘度较大，操作不便、切片较为困难，而且反差较弱。包埋块切片时的难易，与树脂、固化剂、增塑剂及催化剂之间的比例有关，而且还取决于聚合的温度、时间等因素。2.4.6－三甲氨基甲基苯酚简称为DMP30，其主要作用是可以催化聚合反响，但本身并不参加到树脂链中。DDSAMNA)等，它们参与树脂三维聚合中的交联反响，并被吸取到树脂链中。常用的增塑剂为邻苯二甲酸二丁酯(简称DBP)，其主要作用是提高包埋块的弹性和韧性，改善其切割性能。Epon812，国内也较普遍承受。同时国内也常用国产的环氧树脂618，下面分别介绍。〔１〕Epon812Epon812是一种甘油基脂肪族环氧树脂，溶于乙醇和丙酮，不溶于水。〔２〕618Epon812618程度影响反差，粘度也较大，操作较困难些，但其比Epon812好切片，又国产易得，在618〔３〕聚醋树脂聚醋树脂包埋介质具有环氧树脂的优点，切片简洁，好染色，包埋块硬，适用于细菌和植物组织等硬样品。但因不大稳定，没被广泛承受。５.包埋剂的配制单纯用某一种物质作包埋剂往往效果不抱负，因此，常用多种物质配制成复