TCSBM 0050.3-2024 创面修复材料有效性评价 第3部分：刺激因子屏蔽评价方法

ICS11.040.30CCSC30

T/CSBM团 体 标 准T/CSBM0050.3—2024创面修复材料有效性评价3EffectivenessevaluationofwoundrepairmaterialsPart3:Invitroirritantsbarrierevaluationmethod2024-05-14发布 2024-10-01实施中国生物材料学会 发布T/CSBM0050.3T/CSBM0050.3—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANIII目 次前言 II引言 III范围 1规范性用文件 1术语和1刺激物度确定验 1物理屏细胞活试验 3物理屏细胞迁试验 5参考文献 7前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准工作导则 第部分：标准化件的结和起草规》的规起草。本文件是T/CSBM0050—2024《创面修复材料有效性评价》的第3部分。包括以下部分：——第1部分：水溶性材料体外评价方法；——第2部分：水不溶性材料体外浸提液评价方法；——第3部分：刺激因子屏蔽评价方法；——第4部分：体外微血管形成试验评价方法；——第5部分：体外细胞粘附和增殖直接接触评价法；——第6部分：动物食管创面模型促修复愈合评价方法；——第7部分：动物胃创面模型促修复愈合评价方法；——第8部分：动物肠道创面模型促修复愈合评价方法；——第9部分：动物皮肤创面模型促修复愈合质量评价方法。本文件由中国生物材料学会团体标准化技术委员会归口。本文件起草单位：杭州英健生物科技有限公司、中国食品药品检定研究院、四川大学。引 言TranswellT/CSBM0050.3T/CSBM0050.3—2024PAGEPAGE1创面修复材料有效性评价第3部分：刺激因子屏蔽评价方法范围本文件适用于水凝胶或固态创面修复生物材料屏蔽保护创面细胞活力和迁移效果的评价。GB/T16886.5—2017 医疗械生物评价 5分：体外胞毒性验T/CSBM0050.1 创修复材有效性价 第部：水溶性料体外价方法术语和定义T/CSBM0050.1界定的术语和定义适用于本文件。细胞活力 cellviability总细胞中活细胞所占的百分比。刺激物 irritants可致眼、皮肤、呼吸道黏膜、消化道黏膜发生可逆炎性反应的物质。原理GB/T16886.540％、50％60％的浓度。器具试验器具如下：酶标仪；电子天平；液氮罐；96试剂和耗材试验试剂和耗材如下：10％DMEM（10％FBSDMEM）；（DMSO）；异丙醇；细胞系刺激物试验可使用的刺激物如下：盐酸；胃蛋白酶；胰蛋白酶；过氧化氢；其他。样品制备10％FBSDMEM阴性对照计算直径为1cm的高密度聚乙烯双面的面积，按3cm2/mL加入含10％FBSDMEM低糖培养基，37℃、120r/min24h，阳性对照取适量DMSO加入含10％FBSDMEM低糖培养基内，制备10％DMSO溶液，37120r/min24h。空白对照含10％FBSDMEM37120r/min24h。试验方法按照GB/T16886.5—2017CMTT6将复苏好的成纤维细胞传至两代以上呈对数生长期时，按照1×105个/mL密度制备细胞悬液，每孔加入100L963724h，24hmg/mL50LMTT3h100L570和650表1 细胞毒性验试验分组处理条件试验模型观察时间试验方法空白对照组含10％FBSDMEM低糖培养基细胞系37℃、5％CO224hMTT法阴性对照组高密度聚乙烯含10％FBSDMEM低糖培养基阳性对照组10％DMSO含10％FBSDMEM低糖培养基刺激物组不同浓度刺激物溶液1𝑃=𝐴570𝑛𝑚−𝐴650𝑛𝑚×100％··························································(1)1𝐵570𝑛𝑚−𝐵650𝑛𝑚式中：P1——细胞相对存活率，％；A570nm570nmA650nm650nmB570nm570nmB650nm650nm40％50的3原理采用Transwell1胞死亡。a）入料 未材料图1 材料屏蔽护试验型示意图器具试验器具如下：酶标仪；电子天平；液氮罐；24Transwell96试剂和耗材试验试剂和耗材如下：10％DMEM（10％FBSDMEM）；CCK-8细胞系同4.2.3。按4.5确定的浓度，按4.3.1配制3个浓度的刺激物溶液。试验方法按照表21×105个/mL241ranswel0.2mL.0m～1.5mm324h48h72h450nm（2）表2 物理屏蔽胞活力验试验分组处理条件试验模型观察时间试验方法空白对照组无材料细胞系24、48h、hCKK—8法试验组有材料1𝑃=𝐴450𝑛𝑚×100％·································································(2)1𝐵450𝑛𝑚式中：P1——细胞存活率，％；A450nm450nmB450nm450nm结果分析p＜0.05原理采用Transwell1器具试验器具如下：酶标仪；电子天平；液氮罐；24TranswellImageJ试剂和耗材含10％DMEM含10％FBSDMEM）。细胞系同4.2.3。同5.3。试验方法按照表31×105个/mL241个复孔，24h1mL10×微镜下观察。样品组的Transwell孔板中加入0.2mL1.0mm～1.5mm，0h、以及培养12h、24h时的细胞图片，应用ImageJ（3）表3 物理屏蔽胞迁移验试验分组处理条件试验模型观察时间试验方法空白对照组无材料细胞系0h、12h、24h试验组有材料2𝑃=𝑆0−𝑆12/𝑆24×100％·······························································(3)2𝑆0式中：P2——细胞迁移率，％；S0012hS2424h结果分析p＜0.05参 考 文 献GB/T16886.12—2023医疗器械生物学评价第12究[J].,2022,41(04):405-412.HangZ,MuyeH,MinyiY,etal.I